一、高血压反义基因治疗的研究进展(论文文献综述)
杨洁[1](2020)在《单纯收缩期高血压并脑梗死的中医证候特征及其lncRNA差异表达谱研究》文中提出目的:以单纯收缩期高血压并脑梗死患者为研究对象,初步总结其中医证候分布规律;基于临床研究结果,筛选相关证型人群的血浆特征lnc RNA表达谱,构建lnc RNAs-m RNAs共表达网络,探讨lnc RNA在单纯收缩期高血压并脑梗死相关证型中的潜在作用和可能作用机制。方法:1.临床研究收集并分析149例单纯收缩期高血压并脑梗死患者的临床资料,对四诊资料等运用量表进行全面采集,通过聚类分析和对应分析的方法,总结中医证候特征,并分析各证型血糖、血脂、尿酸、同型半胱氨酸等因素的相关性。2.实验研究根据前期临床研究结果,使用高通量测序技术检测单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证患者与对照组单纯收缩期高血压肾虚血瘀证患者血浆lnc RNAs、m RNAs的表达水平,筛选差异表达lnc RNA和m RNA。通过生物信息学预测分析差异表达的lnc RNAs靶向调控的m RNAs。对筛选出的部分lnc RNA,扩大样本量,纳入前期符合临床研究的60名受试者,进行q T-PCR验证。结果:1.临床研究发现单纯收缩期高血压并脑梗死的中医证候分布:149例单纯收缩期高血压并脑梗死患者中医证候分布情况为肾虚血瘀证最多,占比42.95%,其次为肝肾阴虚证、肝火亢盛证、痰热腑实证、风痰阻络证,分别占比23.49%,18.79%,7.38%,7.38%。各证型之间的年龄分布没有统计学差异。各证型在不同性别间的分布结果显示肝肾阴虚与痰热腑实在男女占比有统计学差异(卡方值=7.6215 P=0.005),肝肾阴虚女性占比高,痰热腑实男性占比高。血清尿酸单因素方差分析P=0.05,LSD检验方法两两比较后,t分组结果显示肝肾阴虚证与风痰阻络证有差异,风痰阻络证血清尿酸水平高于肝肾阴虚证血清尿酸水平。各证型的BMI、低密度脂蛋白均升高,但无统计学意义。血糖在肝肾阴虚证中提示升高,同型半胱氨酸在痰热腑实证和风痰阻络证中升高,但各证型间无明显统计学意义。2.实验研究使用高通量测序技术和生物信息学分析方法,发现单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证患者与对照组单纯收缩期高血压肾虚血瘀证患者血浆存在2768个差异lnc RNAs(946个上调,1822个下调),747个差异m RNAs(228个上调,519个下调)。对高通量测序筛选的差异表达lnc RNA和m RNA(FC值在2倍以上且P<0.05)进行聚类分析,和单纯收缩期高血压肾虚血瘀证患者相比,单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证患者血浆lnc RNAs和m RNAs表达谱存在明显差异。3.Lnc RNA可以在转录水平调控靶基因的表达,采用生物信息学分析预测差异表达lnc RNA的靶m RNA。交集基因进行GO和KEGG富集分析,结果显示交集基因主要与血小板活化聚集、ECM受体相互作用、细胞粘附分子、黏着斑等相关。瘀血是单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证患者的主要致病因素,结合富集分析结果和疾病致病因素的病理表现,提示脑梗死与凝血异常、血小板聚集和细胞粘附密切相关。4.结合差异表达lncRNA-m RNA共表达网络、差异表达lnc RNA和m RNA富集分析结果,筛选与单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证相关的特定lnc RNA和m RNA。q T-PCR结果显示,可能存在调控关系的lnc RNA和m RNA为:ENST00000565493(上调)、ENST00000606054(上调)、ENST00000590604(上调)、ENST00000566942(上调)、NONHSAT217189.1(下调)和CD226(上调);ENST00000565493(上调)、NONHSAT138949.2(上调)、ENST00000369385(下调)、ENST00000540082(下调)和PARVB(上调)。5.同型半胱氨酸和血清肌酐在单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证(实验组)和单纯收缩期高血压肾虚血瘀证(对照组)间存在显着性差异,提示同型半胱氨酸和血清肌酐与脑梗死相关。回归分析结果表明,血清尿酸和脂蛋白(α)与差异特定lnc RNA和m RNA存在线性关系。结论:1.单纯收缩期高血压并脑梗死可分为肾虚血瘀证、肝肾阴虚证、肝火亢盛证、痰热腑实证、风痰阻络证5个基本证候,其中肾虚血瘀证是主要证候。结合理化指标分析,风、热、痰、瘀是致病因素,其中瘀是单纯收缩期高血压并脑梗死的最关键病理因素。同时应用聚类分析能够使数据更加客观,有利于中医证候的分类研究。2.单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证和单纯收缩期高血压肾虚血瘀证之间有较明显的转录组表达谱差异。GO富集分析和KEEG富集分析提示,单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证差异表达的lnc RNA和m RNA主要与凝血调节、血小板活化聚集、焦点粘连、细胞粘附分子结合等信号通路相关。筛选到的5个上调lnc RNA和3个下调lnc RNA可能通过调控CD226和PARVB的表达,参与血小板聚集和细胞粘附信号通路,影响单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证的发生发展。为单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证的分子和病理机制提供了一定的理论依据。
雷蕾[2](2020)在《rAAV9介导的CGRP基因对自发性高血压大鼠血压、左心室纤维化、肾脏损伤的影响》文中研究说明目的:研究静脉注射重组腺相关病毒9型(Recombinant adenoassociated viral,r AAV9)介导的降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)基因对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)血压、左心室纤维化、肾脏损伤的影响。方法:16只自发性高血压大鼠(SHR),随机分为4组,每组4只,分为对照组、空载体组、CGRP组、贝那普利组,无创测量大鼠血压,检测各组大鼠血浆中CGRP含量,尿微量白蛋白含量,在第8周处死大鼠,检测各组大鼠左室心肌组织中的CGRP表达,左心室重量指数,左心室的心肌胶原容积分数(Collagen volume fraction,CVF),并对肾脏组织进行病理形态学观察。结果:1.第3周,第6周,第8周CGRP组血浆CGRP浓度较其它三组明显升高(P<0.05),贝那普利组CGRP含量三个时间点均高于对照组、空载体组(P<0.05)。CGRP组左心室CGRP表达最多,贝那普利组次之,对照组与空载体组最少。2.CGRP组在注射后第3周出现血压下降,在第3周到第7周,收缩压下降与对照组、空载体组有显着性差异(P<0.05);贝那普利组,CGRP组各个时间点无明显差异(P>0.05)。贝那普利组在给药后第3周开始出现收缩压下降,第3周到第8周收缩压下降与对照组、空载体组血压有统计学差异(P<0.05)。3.大鼠收缩压与血浆CGRP的浓度呈中等程度负相关。4.CGRP组,贝那普利组均与对照组、空载体组CVF有显着性差异(P<0.05)。5.第3周,第6周,第8周,CGRP组尿微量白蛋白浓度较其它三组明显降低(P<0.05)。第3周贝那普利组尿微量白蛋白浓度与对照组、空载体组无明显差异(P>0.05),第6周及第8周贝那普利组尿微量白蛋白浓度低于对照组、空载体组,有显着性差异(P<0.05),CGRP组第3周及第6周与贝那普利组无明显差异(P>0.05),第8周尿微量白蛋白浓度低于贝那普利组,有显着性差异(P<0.05)。在对照组和空载体组可见肾小管基膜和间质硬化,肾小管上皮细胞出现肿胀。在CGRP组和贝那普利治疗组中未见明显肾小管及肾小球的病理改变。结论:1.SHR尾静脉注射r AAV9-CGRP基因后,第3周到第8周血浆CGRP浓度增高。第3周到第7周收缩压下降。2.r AAV9-CGRP基因能减少左心室心肌纤维化,降低尿微量白蛋白,减轻肾小管的损伤,其保护作用与贝那普利相似。
邵琳琳[3](2019)在《杜仲-刺蒺藜药对调控lncRNA干预血管紧张素Ⅱ诱导神经损伤的机制研究》文中提出目的:分析导师杨传华教授治疗老年高血压共病轻度认知障碍的核心药对,找出核心药对干预血管紧张素Ⅱ诱导的神经损伤的lnc RNA的表达谱,筛选出有潜在调节作用的lnc RNA,为后期进一步深入研究、发现新的药理机制提供依据。方法:1.收集导师门诊老年高血压共病轻度认知障碍患者资料,统计组方规律并结合现代药理学研究的成果,筛选出治疗本病的核心药对。2.借助整合药理学平台(TCMIP),找出核心药对的已知的活性成分,预测二者干预高血压和认知障碍相关的靶点,作为实验前的预测评估。3.应用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测药物神经细胞保护作用的物质基础研究,探寻拮抗血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的有效成分。通过药物吸收的主要原理来确定可吸收成分,借助生物信息学分析这些成分的作用靶点,预测其作用机制。4.MTT法筛选药对的有效部位和最佳有效部位的配伍比例。进一步通过流式细胞仪、seahorse细胞能量代谢实验分别观察对SH-SY5Y增殖、凋亡及能量代谢的影响。5.检测中药药对的有效部位干预AngⅡ诱导的SH-SY5Y中lnc RNA的表达谱,使用GO和KEGG等生物信息学分析方法研究lnc RNA的调控机制。筛选关键lnc RNA进行验证分析。结果:1.共收集导师门诊老年高血压共病轻度认知障碍患者一般资料及处方102首。共选用中药124种,1369味次,平均每方11.04味次。使用频率超过40次的有11味药物:当归、黄芪、泽泻、刺蒺藜、牛膝、杜仲、酸枣仁、黄芩、桑寄生、黄连、丹皮,筛选得到核心药对杜仲-刺蒺藜药对。2.TCMIP结果显示杜仲-刺蒺藜干预高血压和认知障碍的有效成分有26个,涉及39个关键靶标,30个核心通路。主要参与循环系统与神经系统功能调节,与炎症、氧化应激以及与衰老的线粒体功能障碍相关。3.LC-MS/MS结果显示,刺蒺藜有效成分与调节炎症、氧化应激以及与衰老的线粒体功能障碍相关。4.MTT法筛选杜仲、刺蒺藜的有效部位和浓度的配伍比例,栀子苷(0.1mg/L)与刺蒺藜乙酸乙酯Fr.10(5mg/L)比例为1:1时最佳。5.基因测序得到差异lnc RNA和差异m RNA,分析显示lnc RNA或是通过影响鞘脂代谢通路改善神经细胞损伤。结论:1.老年高血压共病认知障碍的病位在肝、肾,病理性质为本虚标实,以肝肾亏虚为本,瘀热、痰热为标。2.肝肾亏虚,血脉不利,脑神失养是老年高血压共病认知障碍的核心病机,治疗多以滋补肝肾为基础,兼以清热泻火、活血化瘀、理气祛痰。基于导师的用药经验,使用药物性味多是温、寒,以甘、苦、辛为主,归肝、肾经。结合现代药理学的研究成果,筛选出具有降压和神经保护的药对,即杜仲-刺蒺藜药对。3.杜仲-刺蒺藜的降压和神经保护机制与Lnc RNA的调控作用相关。生物信息学分析结果显示,lnc RNA很可能是通过调控鞘脂代谢信号通路发挥调控作用。Lnc RNA ENST00000437438通过调控NEU4的表达,影响鞘脂代谢。
李俊漾[4](2019)在《炎症抑制剂PTUPB和长链非编码RNA HMMR-AS1影响胶质母细胞瘤生长的机制研究》文中研究指明工作目的胶质母细胞瘤(GBM)是成人常见的原发性高度恶性中枢神经系统肿瘤(WHO Ⅳ级),即使联合使用当前最先进的治疗手段,其预后仍然很不乐观。当前迫切需要继续在细胞和分子生物学水平上对GBM进行深入的研究以取得突破。炎症反应能改变肿瘤微环境,通过多种活性因子促进肿瘤的血管生成、细胞增殖和侵袭转移。有研究认为,成人大脑的室管膜下区(SVZ)因临近侧脑室受到脑脊液中炎症诱导因子的影响而存在持续的炎症反应,存在于SVZ的神经干细胞和祖细胞在炎症反应产生的多种活性因子(包括多种生长因子、细胞因子和趋化因子)的持续刺激下会转变成具有致瘤能力的肿瘤干细胞,而这些肿瘤干细胞可能是导致包括GBM在内的脑部肿瘤的根源。因此,抑制炎症反应或许不仅可以从根源上遏止GBM的发生,还能通过抑制肿瘤血管生成和细胞增殖抑制GBM的发展。长链非编码RNA(lncRNA)在包括GBM在内的很多恶性肿瘤中都呈异常表达,与肿瘤的发生、转移以及恶性进展等密切相关。调控炎症反应和lncRNA都会对肿瘤的发生发展产生深远的影响。本研究的目的在于,分析炎症抑制剂对lncRNA及相关基因表达谱的改变,探索抑制炎症反应和调控相关lncRNA对GBM的影响和机制。研究方法1.使用Arraystar人类LncRNA芯片V3.0芯片对样品进行微阵列基因芯片检测分析。使用 Agilent DNA Microarray Scanner(part number G2505C)进行芯片扫描,使用Agilent Feature Extraction软件(v11.0.1.1)采集芯片探针信号值,使用Agilent GeneSpring GX v12.1软件进行芯片标准化、挑选差异表达的lncRNA 和 mRNA。2.设计并合成针对HMMR和HMMR-AS1的siRNA或者构建搭载HMMR和HMMR-AS1的shRNA的慢病毒载体,分别对细胞进行瞬时或者稳定转染下调HMMR和HMMR-AS1表达;合成HMMR和HMMR-AS 1全长序列,构建慢病毒载体稳定转染细胞,使HMMR和HMMR-AS1过表达。3.使用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞增殖或者细胞存活情况。4.使用transwell小室(8μm孔径)检测细胞迁移和侵袭能力。5.用FACS Calibur流式细胞仪检测细胞周期情况。6.利用Applied Biosystems公司的TaqmanTM检测试剂盒,在AB17300系统上完成实时定量PCR检测,用于评估相关基因的转录水平。7.使用免疫印记实验或细胞免疫荧光实验检测细胞内蛋白的表达情况。8.构建裸小鼠GBM颅内移植瘤模型或者裸小鼠GBM皮下移植瘤模型,从体内水平观察GBM生长情况。9.用免疫组织化学染色评估裸小鼠移植瘤组织的相关蛋白表达情况。10.使用 SPSS、GraphPad Prism、Microsoft Excel 和 ImageJ 等软件对数据进行分析。结果1.炎症抑制剂t-AUCB(sEH特异性抑制剂)导致U87细胞605个lncRNA和689个mRNA的表达出现了明显变化(Fold Change≥2.0,P<0.05),其中375个lncRNA和338个mRNA表达上调,230个lncRNA和351个mRNA表达下调。2.t-AUCB所致差异表达的反义lncRNA中HMMR-AS1的下调幅度最大(Fold Change=6.47,P=0.031),其正义转录本HMMR mRNA也显着下调。3.HMMR-AS1在GBM肿瘤组织和细胞系中都呈高表达。4.下调HMMR-AS1能导致细胞周期G1期阻滞、抑制细胞迁移和侵袭。5.体外和体内研究结果都显示,下调HMMR-AS1后GBM细胞中HMMR表达水平降低、GBM细胞生长受抑制。6.下调HMMR-AS1能使GBM对X射线的放射治疗更敏感。7.上调HMMR-AS 1使c-Myc水平升高但不影响HMMR的表达。8.HMMR-AS1可以维持HMMR mRNA的稳定性。9.体外和体内研究结果都显示,上调HMMR-AS1能促进GBM生长。10.因GBM通过上调COX-2抵抗t-AUCB,导致在体内水平t-AUCB对GBM抑制效果不佳,所以用COX-2/sEH双靶点抑制剂PTUPB替换t-AUCB继续研究。在体外水平,PTUPB显着抑制GBM细胞增殖、导致细胞周期G1期阻滞、下调HMMR-AS1和HMMR的表达水平、抑制干细胞标记物的表达、下调磷酸化EGFR的水平。11.体内水平研究证实,PTUPB抑制GBM血管生成和肿瘤生长、抑制HMMR表达。12.一些对GBM生长有促进作用的调控因子,例如HMMR、ERK1/2、c-Myc、CDK2、CDK4、BMIl、CyclinD1 和 ZEB1 受到了 PTUPB 和 HMMR-AS1 的共同调控。结论1.下调HMMR-AS1不仅能抑制GBM肿瘤生长、迁移和侵袭,还能增强GBM对放射线的敏感性;上调HMMR-AS1通过调控癌基因c-Myc的表达促进GBM肿瘤的生长。这为以lncRNA作为靶点治疗GBM提供了强有力的证据。2.PTUPB对GBM具有显着抑制作用,并且可以特异性抑制COX-2和sEH两个靶点,或将为临床上进行GBM靶向治疗提供新的思路。3.一些对GBM生长有促进作用的蛋白受到了 PTUPB和HMMR-AS1的共同调控,说明炎症反应和lncRNA之间的相互作用对GBM的发生发展具有重要影响,对两者之间的复杂联系进行深入探索,或将为GBM的分子生物学诊断和靶向治疗提供很有价值的线索。
王娜[5](2019)在《冠心病患者外周血中lncRNA-ANRIL的表达水平及其临床意义》文中认为【研究背景】冠状动脉硬化性心脏病,简称冠心病,是一个慢性、多因素的炎症性疾病,它可以导致急性冠脉综合征和突然的心脏性猝死。冠心病引起的心肌梗死等卒中性疾病目前依然是全球人口死亡和残疾的主要原因。其发病率随患者年龄增长而升高,且初始发病患者呈年轻化趋势。尽管目前心血管介入治疗技术发展迅速,但仍有相当大比例的冠心病患者由于临床症状不典型,早期未能准确诊断,并且在心梗发作时没有得到有效的救治。急性冠脉综合征等冠心病严重阶段将会对心肌细胞造成严重损害,最终导致心肌细胞肥大、纤维化、坏死或凋亡。研究发现,冠心病跟家族史有关,同时有很多明确的危险因素,如糖尿病、高血压、高血脂、吸烟等,这就意味着冠心病的发生发展与遗传基础密切相关。但由于冠心病的发生发展影响因素众多,是一个具有复杂遗传基础背景的多基因遗传性疾病,并且由于研究技术上的限制,对冠心病遗传基础的研究进展缓慢。随着人类基因组计划的实施,以及全基因组关联分析(GWAS)方法的开展,人类对复杂性疾病的遗传研究有了新的方向。GWAS是以单核苷酸多态性(SNP)为分子遗传标记,通过大量样本的病例对照关联分析,客观的发现疾病新的易感基因。而SNP是人类遗传变异中最常见的形式。GWAS研究发现人染色体9p21基因区域的基因变异是心血管疾病的危险因素之一。染色体9p21是人类冠心病和其他形式的心脑血管疾病如中风、外周动脉疾病和动脉瘤等研究中复制最成功的遗传因子,虽然近年来研究内容有很大进展,但其在动脉粥样硬化发生发展中的作用机制尚不完全清楚。9p21区段包含了许多与冠心病可能相关的SNP位点,但这些SNP位点几乎都位于非编码区域,而与这段冠心病相关区域最近的蛋白编码基因,是与其相隔几千碱基对(kb)的INK4b-ARF-INK4a基因座。INK4b-ARF-INK4a基因座长约35kb,内含3种已知的编码基因:CDKN2B(即INK4b)、CDKN2A(包括INK4a和ARF),它们编码2个依赖细胞周期蛋白的激酶抑制剂p15INK4b、p16INK4a以及另一蛋白质p14ARF,这3种蛋白均参与细胞周期的调控。而染色体9p21 CAD风险SNP位点核心区段与INK4位点反义链上的lncRNA INK4基因座反义链非编码RNA(antisense non-coding RNA in the INK4 locus,ANRIL)的1319外显子区段相重叠。研究发现ANRIL在受动脉粥样硬化影响的多种组织和细胞类型中表达,且ANRIL包含多种线性和环状异构体。然而,关于这些转录产物如何参与到动脉硬化的发病机制中的具体原因未明。在此,我们假设9p21基因座的单核苷酸多态性(SNP)会影响到相关区域转录本(如ANRIL、CDKN2A/2B)的表达,从而参与动脉粥样硬化形成。【研究目的】1.研究冠心病患者外周血中3个SNP(rs1333049,rs564398,rs2811712)、长链非编码RNA ANRIL、CDKN2A、CDKN2B的表达水平以及相互关系。2.探索长链非编码RNA ANRIL在冠心病诊断中的临床意义。【研究方法】1.筛选冠心病患者和正常对照组,记录详细病史、体格检查,筛查肝肾功能、血脂、血糖、心电图等临床资料;2.对入选的研究对象取静脉血,提取DNA,选取9p21区域3个感兴趣的SNP(rs1333049,rs564398,rs2811712)进行基因型分型,应用统计学方法分析SNP与冠心病的关联性;3.RT-PCR法测定外周血中9p21基因区域相关转录产物lncRNA-ANRIL、CDKN2A、CDKN2B的相对表达量,分析各变量之间的相关性;4.应用ROC曲线分析ANRIL的表达在冠心病诊断中作用。【研究结果】rs564398与rs2811712等位基因频率在冠心病组和对照组中的比较并无统计学意义(p>0.05);冠心病组单核苷酸rs1333049等位基因G显着低于对照组(p<0.05);冠心病组ANRIL(外显子1-2)与ANRIL(外显子17-18)的相对表达量均明显小于对照组(均p<0.01);ROC曲线示:ANRIL(外显子1-2)、ANRIL(外显子17-18)在诊断冠心病方面均具有统计学意义(均p<0.01);冠心病组rs1333049等位基因G与ANRIL(外显子1-2)、ANRIL(外显子17-18)的表达均呈正相关(r=0.3402/0.3124,均p<0.05);lncRNA-ANRIL(外显子1-2)与CDKN2A、CDKN2B表达均呈正相关(均p<0.05),lncRNA-ANRIL(外显子17-18)与CDKN2A的表达呈正相关(p<0.0001)。【结论】ANRIL可能通过调控CDKN2A/B的表达影响冠心病的发生发展,ANRIL的表达可能受染色体9p21区域单核苷酸rs1333049表达的影响,外周血ANRIL的表达可以作为早期诊断冠心病的特异性指标。
姜凌宇[6](2018)在《杜仲-刺蒺藜药对通过调控lncRNA保护血管内皮的机制研究》文中研究说明目的:通过收集患者四诊资料及用药处方,探讨高血压合并颈动脉粥样硬化的中医证候分布规律及导师用药规律。从中医角度更标准化、客观化的研究高血压伴动脉粥样硬化的病机特点,为更好的制定临床诊疗方案提供参考。根据高血压合并颈动脉粥样硬化临床证候分布特点和用药规律设计实验研究部分,以氧化低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)干预人主动脉内皮细胞(Human aortic endothelial cell,HAEC)构建内皮损伤模型,从长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)角度研究ox-LDL诱导内皮细胞功能紊乱的相关机制。通过提取刺蒺藜有效成分,筛选刺蒺藜、杜仲最佳有效部位,确定二者最佳配伍比例,探讨杜仲-刺蒺藜(杜仲、刺蒺藜有效组分配伍药对)改善ox-LDL诱导的内皮细胞功能紊乱的作用靶点和分子机制,为明确杜仲-刺蒺藜改善血管内皮功能,缓解动脉粥样硬化,治疗高血压的药理机制提供理论依据,并且为杜仲-刺蒺藜药对的临床应用提供实验支撑。方法:1.高血压合并颈动脉粥样硬化的中医证候分布规律及用药规律研究:收集110例高血压合并颈动脉粥样硬化患者的临床资料及用药处方,统计各症状、体征及用药频数,使用SPSS进行聚类分析,统计高血压伴颈动脉粥样硬化的中医证候分布规律及用药规律。结合颈动脉彩超及血脂生化,研究各证型与颈动脉内中膜厚度(intima-media thickness,IMT)、臂踝脉搏波传导速度(brachial-ankle pulse wave velocity,baPWV)、最大斑块面积以及血脂各指标的相关性,分析各证型特点。依据现代数据挖掘理念和方法,解析导师杨传华教授在治疗高血压合并颈动脉粥样硬化的用药处方规律。2.刺蒺藜有效成分的提取及杜仲、刺蒺藜有效部位的筛选:刺蒺藜经粉碎后使用70%乙醇浸泡,加热回流提取滤去不溶部分,旋转蒸发仪浓缩,负压下回收得粗提物,刺蒺藜有效成分使用LC-ESI-MS/MS鉴定。使用MTT法及Transwell迁移实验筛选刺蒺藜、杜仲的有效部位,研究并明确刺蒺藜成分的有效物质基础,确定刺蒺藜及杜仲最佳有效部位的配伍比例。3.ox-LDL诱导的内皮细胞功能紊乱的机制研究:体外培养HAEC,以ox-LDL诱导建立内皮损伤模型,通过MTT法、流式细胞仪、Transwell迁移实验、seahorse细胞能量代谢实验分别观察ox-LDL对细胞增殖、凋亡、迁移能力以及能量代谢的影响,采用lncRNA联合mRNA基因芯片检测ox-LDL诱导的HAEC中lncRNA的表达改变,使用生物信息学分析研究lncRNA调控ox-LDL诱导的内皮损伤的机制。经siRNA敲减代表性lncRNA(NONHSAT061051)后,验证其在ox-LDL诱导的内皮损伤过程中的作用。4.杜仲-刺蒺藜对ox-LDL诱导的内皮损伤的保护作用及其机制研究:使用杜仲、刺蒺藜有效组分配伍药对干预ox-LDL诱导的内皮损伤模型,通过MTT法、流式细胞仪、Transwell迁移实验、seahorse细胞能量代谢、单核-内皮细胞黏附实验观察杜仲-刺蒺藜对ox-LDL诱导的HAEC的增殖、凋亡、迁移能力、能量代谢以及单核-内皮细胞黏附水平的影响,采用lncRNA联合mRNA基因芯片检测经杜仲-刺蒺藜干预后lncRNA的表达,同ox-LDL模型组比较,筛选差异基因,使用生物信息学分析差异基因,从lncRNA角度研究杜仲-刺蒺藜改善ox-LDL诱导的内皮损伤的机制。结果:1.高血压合并颈动脉粥样硬化的中医证候分布规律及用药规律研究:110例高血压合并颈动脉粥样硬化患者的年龄为47-80岁,平均年龄69.25±10.39岁。通过聚类分析,110例患者主要分为3大类,结合临床症状,共分为5类证型,肝肾阴虚证、肝阳上亢证以及痰浊中阻、瘀血阻滞、痰瘀互结证,分别占比43.64%、20.00%、15.45%、11.82%、9.09%。痰浊中阻组、肝阳上亢组颈动脉IMT高于肝肾阴虚组(P<0.05)。各组baPWV值均高于正常,其中肝肾阴虚组baPWV值明显高于其他组(P<0.05),且二者呈正相关(r=0.469)。痰瘀互结组以及瘀血阻滞组最大斑块面积均高于其他组,最大斑块面积同痰瘀互结证型呈中等程度正相关(r=0.342),同瘀血阻滞证型呈弱相关(r=0.122);痰浊中阻以及痰瘀互结组甘油三酯(triglyceride,TG)及总胆固醇(total cholesterol,TC)水平均高于肝阳上亢组以及肝肾阴虚组(P<0.05),TG与痰浊中阻、痰瘀互结证型呈中等程度正相关(r=0.306;r=0.329),与瘀血阻滞证型呈弱正相关(r=0.179),TC与痰浊中阻、瘀血阻滞证型以及痰瘀互结证型均呈弱正相关(r=0.254;r=0.156;r=0.254),TG、TC与肝肾阴虚证及肝阳上亢证呈负相关。各证型患者的LDL-C均值水平都高于正常,但各组间患者高密度脂蛋白及低密度脂蛋白水平差异无统计学意义。在导师临证处方中,黄芪、杜仲、刺蒺藜、淫羊藿、桑寄生、当归、川芎、牛膝、知母以及黄芩为导师治疗高血压合并颈动脉粥样硬化的前十味常用药。药物分类以补虚药、清热药、平肝熄风药、活血化瘀药为最多,用药频次均在150次以上。导师常用药对为杜仲-刺蒺藜药对。2.刺蒺藜有效成分的提取及杜仲、刺蒺藜有效部位的筛选:粗浸膏经萃取后得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水4部分,乙酸乙酯部分及正丁醇部分效果较好,经粗分后被分为18个及8个部分。经MTT法及Transwell迁移实验筛选,刺蒺藜乙酸乙酯Fr.15可明显增强细胞活力及细胞迁移能力,且优于其他部位。经LC-ESI-MS/MS检测刺蒺藜乙酸乙酯Fr.15的有效物质基础,共得到340个化合物(其中289个已知化合物),主要以胆碱类、黄酮类、生物碱类、维生素类以及有机酸类为主,其中乙酰胆碱、烟酸与内皮功能密切相关。经MTT法筛选,杜仲中槲皮素(Quercetin,QC)可明显增强细胞活力,促进细胞增殖,且优于其他杜仲有效部位(P<0.05)。当槲皮素与刺蒺藜乙酸乙酯Fr.15以各自最佳浓度按比例为3:1配伍时,促进细胞增殖作用更强,优于其他比例配伍组(P<0.05)。3.ox-LDL诱导的内皮细胞功能紊乱机制的研究:使用ox-LDL干预HAEC后,同正常组比较,细胞总凋亡率上升、迁移率降低、细胞基础呼吸值、ATP产生量、最大呼吸值均降低(P<0.05)。经芯片检测,ox-LDL诱导后共筛选得到532个差异lncRNA,其中298个lncRNA上调,234个lncRNA下调(fold change≥2.0,P<0.05);532个差异mRNA,其中195个mRNA上调,337个mRNA下调(fold change≥2.0,P<0.05)。差异lncRNA的功能主要与脂肪酸代谢、萜类骨架合成、PPAR信号通路、NOD样受体信号转导通路、脂肪酸降解等多条内皮功能相关的通路有关。经敲减lncRNA NONHSAT061051的表达,证实其可上调ICAM-1的表达,升高ICAM-1相关蛋白的表达,促进单核(THP-1细胞)-内皮细胞黏附,参与ox-LDL诱导的内皮细胞功能紊乱。4.杜仲-刺蒺藜对ox-LDL诱导的内皮损伤的保护作用及其机制研究:同ox-LDL诱导的内皮损伤模型组比较,经杜仲-刺蒺藜干预后细胞凋亡率降低,迁移能力提高,同时细胞基础呼吸值、ATP产生量、最大呼吸值均得到提高,单核细胞(THP-1细胞)同内皮细胞的黏附降低(P<0.05)。经芯片检测,杜仲-刺蒺藜干预后,同模型组比较,共筛选得到149个差异lncRNA,其中69个lncRNA上调,80个lncRNA下调(fold change≥2.0,P<0.05);64个差异mRNA,其中11个mRNA上调,53个mRNA下调(fold change≥2.0,P<0.05)。差异lncRNA功能主要与甘油酯代谢、脂肪酸代谢、甘油磷脂代谢、黏附、JAK-STAT信号通路以及细胞因子受体相互作用等多条内皮相关通路有关。其中,杜仲-刺蒺藜干预后使lnc-MAPK8-2:1、NONHSAT061051、lnc-MTHFD2L-1:1、lnc-CXCL3-1:1表达下调,lnc-TK1-2:1、lnc-PKLR-1:1、lnc-TGFB3-5:1、lnc-KLHL10-2:1表达上调,呈现对抗ox-LDL诱导的内皮损伤作用。此外,经杜仲-刺蒺藜干预后,NONHSAT061051下调的同时,靶基因ICAM-1的表达水平也下降,ICAM-1编码的蛋白表达也相应降低。结论:年龄增加与高血压、动脉粥样硬化的发生存在一定关系,肝肾亏虚证是高血压合并颈动脉粥样硬化的主要证型,与baPWV呈正相关。高血压合并颈动脉粥样硬化患者斑块形成的同时多伴有血脂异常,斑块的形成以及TG、TC水平的升高多与痰、瘀相关,痰、瘀是高血压合并颈动脉粥样硬化的关键病理因素。导师治疗高血压合并动脉粥样硬化常用药物以滋补肝肾、活血祛瘀药为主,杜仲-刺蒺藜为常用药对。从内皮保护角度,刺蒺藜乙酸乙酯部分Fr.15为最佳有效部位,主要成分中乙酰胆碱、烟酸与内皮功能较为密切,杜仲中槲皮素为最佳有效部位,当槲皮素、刺蒺藜乙酸乙酯Fr.15配伍比例为3:1(3μmol/L槲皮素:1.3 mg/L刺蒺藜乙酸乙酯Fr.15)时,内皮保护效果最好。ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤,使血管内皮细胞活力下降、凋亡率升高、迁移能力下降,并且损伤线粒体功能,导致ATP产生能力及呼吸储备能力下降,其诱导内皮损伤的机制同lncRNA的调控有关。杜仲-刺蒺藜可通过调控lncRNA改善ox-LDL诱导的内皮损伤,促进细胞增殖及迁移,抑制细胞凋亡,提高细胞能量代谢水平。
刘文琛[7](2018)在《急性缺血中风阴阳类证lncRNA、mRNA及miRNA表达谱研究》文中研究说明目的:以缺血性中风阴类证、阳类证患者、非中风对照组作为研究对象,筛选出与阴类证、阳类证相关的差异lncRNA、miRNA、mRNA,探讨差异lncRNA、miRNA在阴类证、阳类证中可能作用机制。方法:使用lncRNA/mRNA芯片、miRNA芯片技术,分别检测10例缺血性中风阴类证、10例阳类证患者、10例非中风对照组血清中lncRNA、miRNA与mRNA表达情况,并将三组间差异表达谱联合分析,筛选出缺血性中风与对照、缺血性中风阴类证与阳类证之间的差异表达基因。对获得的差异基因进行聚类分析、反义lncRNA与mRNA共表达分析、GO和KEGG功能通路分析,获取基因间调控关系,并预测lncRNA的靶基因。同时对筛选出的部分lncRNA,纳入60名受试者,进行q RT-PCR验证。结果:1.使用高通量测序技术及生物信息学分析方法,对缺血性中风阴类证、阳类证组、非中风对照组表达谱进行两两比较。经筛选后,急性缺血性中风相关差异基因包括1123个lncRNAs(371个相对上调,752个相对下调),587个mRNAs,(288个相对上调,299个相对下调),5个的miRNAs(4个相对上调,1个相对下调)。存在6对可能具有调控急性缺血性中风生物学机制的反义lncRNA与正义mRNA:ENST00000428573(相对上调)与SYT2(相对上调)、ENST00000494849(相对下调)与PRKAR2B(相对上调)、NR_036505(相对下调)与IPPK(相对下调)、NR_131907(相对上调)与BCL2L1(相对上调)、T071563(相对下调)与CACNA1C(相对下调)、uc.148+(相对下调)与LRBA(相对下调)。分层聚类分析能区分lncRNA、mRNA在缺血性中风与非中风对照组的表达差异。q RT-PCR结果显示,T029143在脑梗死组中表达上调,ENST00000530525、T131416、T013651在脑梗死组中表达下调,且在脑梗死组与对照组之间有明显差异(P<0.05)。生物信息学富集结果提示,急性缺血性中风差异表达的mRNA主要与氧气运输、白细胞在炎症反应中的迁移、神经递质分泌的负调节、Toll样受体结合、组氨酸代谢过程、尿酸代谢过程等关系密切,涉及了多条涉及血管活性变化、血栓形成以及炎症反应的信号通路,包括毛细血管平滑肌收缩、RAS信号通路、趋化因子通路、磷脂酶D信号通路、血小板激活、白细胞内皮迁移等。2.通过高通量筛查与交联分析,经筛选后,阳类证相关差异基因包括227个差异lncRNAs(73个相对上调,154个相对下调),54个差异mRNAs(21个相对上调,33个相对下调),4个miRNAs(均相对上调);阴类证相关差异基因包括的394个差异lncRNAs(283个相对上调,111个相对下调),206个差异mRNAs(177个相对上调,29个相对下调)。聚类分析结果显示,差异的lncRNA、miRNA和mRNA表达谱均可较好的区分阴类证与阳类证样本,表明lncRNAs、mRNAs、miRNAs在急性缺血性中风阴类证、阳类证之间有差异性的表达。q RT-PCR结果显示,ENST00000527450、T131416在阳类证中表达相对上调,且在阴类证与阳类证间有明显差异(P<0.05)。在阳类证与阴类证差异表达的lncRNAs与mRNA中,存在77对可能具有调控关系的反义lncRNA与正义mRNA,可能参与证候的形成。GO与KEGG富集分析提示,阴类证、阳类证之间差异表达mRNA主要与血压调节、神经递质、内分泌激素调节、炎症等相关,如血压的正性/负性调节、Notch受体信号通路过程、氨基丁酸/-A受体复合体及其活性、肾上腺素能受体活性、花生四烯酸及其单氧酶/表氧化酶活性、白细胞介素1/1β的负性调节、呼吸爆发等相关。阳类证相关通路涉及血压调节,与既往研究中阳类证易感人群易患高血压特征关系密切。兴奋性的肾上腺素能受体通路与异质性的氨基丁酸相关通路,与阴阳类证患者不同症状表现关系密切。结论:急性缺血中风阴类证、阳类证、非中风对照组之间均有较明显的转录组表达谱差异。急性缺血性中风差异表达的mRNA主要与氧气运输、白细胞在炎症反应中的迁移、神经递质分泌的负调节、Toll样受体结合、组氨酸代谢过程、尿酸代谢过程等关系密切,涉及了多条涉及血管活性变化、血栓形成以及炎症反应的信号通路。急性缺血中风阴类证、阳类证的发生发展与炎症反应、RAS系统、血小板活化、神经递质分泌等多个生物学过程和关键通路的联系。反义lncRNA与对应的正义mRNA在急性缺血中风致病过程可能起调控作用的。阴类证、阳类证之间的差异,主要体现在血压的正性/负性调节、抑制性神经递质与兴奋性神经递质和相关受体的差异调控,炎症与氧化应激等相关,为急性缺血中风阴阳类证辨证分治体系的物质基础和病理机制研究提供了一定的科学依据。
陈来江[8](2016)在《血管紧张素转换酶2与Nephrin信号、肾脏炎症及纤维化调控》文中指出目的:肾素血管紧张素系统(RAS)与肾脏炎症和纤维化的发生发展过程密切相关。作为一种单羧基肽酶,血管紧张素转换酶2(ACE2)可将RAS的主要效应子——血管紧张素II(Ang II)催化生成Ang-(1-7)。研究表明ACE2过表达可明显减轻心血管重构和炎症现象,但其对肾脏炎症与纤维化是否起调控作用目前尚未完全阐明。本研究旨在探讨在高血压和动脉粥样硬化状态下ACE2对肾脏炎症、纤维化及结构功能损伤中的调控作用及其可能机制。方法:采用11-12周龄以C57BL/6为背景的ApoE基因敲除(ApoEKO;ApoE-/-),ACE2基因敲除(ACE2KO;Ace2-/y),ApoE/ACE2双敲除(DKO;ApoE-/-Ace2-/y)小鼠及野生型(WT)小鼠作为研究对象,利用微泵每天输入Ang II(1.5 mg/kg)和/或给予重组ACE2(2 mg/kg),为期两周,对照给予安慰剂或生理盐水。用尾套法测定小鼠血压水平。采用实时荧光定量PCR、Western印迹及Masson染色等技术观测小鼠肾脏组织ACE2、Nephrin水平、促炎症细胞因子和趋化因子表达及纤维化信号改变,并利用透射电镜技术观测小鼠肾脏超微结构改变。结果:与正常对照小鼠相比,Ang II微泵诱导的ApoEKO小鼠和高血压小鼠血压水平均明显升高,而肾脏组织Nephrin水平下调。在ApoE/ACE2 DKO小鼠中,ACE2基因缺失促使小鼠收缩压水平升高和肾脏AT1受体表达增加,伴有小鼠肾脏Nephrin和Ang-(1-7)水平下调与促炎细胞因子/趋化因子包括白介素(IL)-1β、IL-6、IL-17A、RANTES、ICAM-1、TNF-α、TNFRSF1A表达增加。有趣的是,在ApoE/ACE2 DKO和ApoEKO+Ang II组小鼠中,肾功能紊乱和超微结构损伤明显加重,伴有血浆肌酐、尿素氮的水平增加以及血浆和肾脏Ang II水平升高。重组ACE2干预治疗可以逆转高血压小鼠和ApoEKO小鼠中Ang II介导的肾脏Nephrin表达减少,并促进肾脏Ang-(1-7)水平增加。更重要的是,重组ACE2干预可抑制ApoEKO小鼠中Ang II介导的TNF-α/TNFRSF1A信号增加,最终减轻肾脏炎症因子生成及肾功能紊乱现象。此外,重组ACE2治疗可大大降低Ang II输注的ApoEKO小鼠肾脏组织转化因子(TGF)-β1、I型胶原及mTOR-ERK1/2磷酸化信号,导致小鼠肾间质纤维化和超微结构损伤减轻。然而重组ACE2治疗对小鼠肾脏TNFRSF1B、III型胶原及血浆脂质水平没有明显影响。结论:在高血压和动脉粥样硬化状态下存在肾脏Nephrin信号下调,而肾脏组织中炎症反应增强及结构损伤明显。在ApoEKO小鼠中,ACE2基因缺失可通过影响TNF-α/TNFRSF1A信号加重肾脏炎症损伤。而重组ACE2治疗通过改善Ang-(1-7)和Nephrin水平,抑制TNF-α/TNFRSF1A及mTOR-ERK1/2磷酸化信号,最终减轻ApoEKO小鼠肾脏炎症、间质纤维化及肾脏结构损伤,提示ACE2/Ang-(1-7)信号有望成为治疗高血压和动脉粥样硬化性肾损害的新靶点。
李莹,徐克雷[9](2013)在《高血压治疗的研究进展与展望》文中认为我国的高血压患者至少2亿人,在高血压人群中,同型半胱氨酸(Hcy)升高的患者达75%,这是我国脑卒中高发的重要原因之一。近年来无论是药物治疗还是非药物治疗,都取得了很大程度的发展,按照平稳、安全、个体化降压原则,维持血压在正常水平,从而预防心脑血管事件的发生,改善患者整体预后。本文对近年来高血压治疗的研究进展和未来的发展进行如下综述。
黄敏[10](2012)在《基因治疗的研究进展》文中研究表明基因治疗可以治疗直接或间接与基因有关的疾病,如传染性疾病、癌症、冠心病、高血压、糖尿病等。本文介绍了我国基因治疗的概况,着重介绍了基因治疗的研究进展,特别是在肿瘤、高血压的治疗和抗病毒上的应用,并分析了基因治疗的前景。
二、高血压反义基因治疗的研究进展(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、高血压反义基因治疗的研究进展(论文提纲范文)
(1)单纯收缩期高血压并脑梗死的中医证候特征及其lncRNA差异表达谱研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
引言 |
第一部分 理论探讨 |
一、中医学视角下单纯收缩期高血压并脑梗死的理论探讨 |
(一)单纯收缩期高血压的中医理论探究 |
(二)脑梗死的中医理论探究 |
(三)单纯收缩期高血压并脑梗死的相关中医理论探究 |
(四)血脉理论与单纯收缩期高血压并脑梗死探究 |
二、现代医学宏观视角下单纯收缩期高血压并脑梗死的理论研究 |
(一)单纯收缩期高血压的流行病学研究 |
(二)单纯收缩期高血压与脑梗死的相关性研究 |
(三)脉压与脑梗死的相关性研究 |
三、LncRNA在高血压相关疾病的研究现状 |
(一)LncRNA的定义、分类、功能机制 |
(二)LncRNA与高血压的相关性研究 |
(三)LncRNA与脑梗死的相关性研究 |
(四)LncRNA与中医证型的相关性研究 |
第二部分 临床研究 |
一、研究目的 |
二、研究对象 |
三、诊断标准 |
(一)单纯收缩期高血压诊断标准 |
(二)脑梗死的诊断标准 |
(三)中医辨证标准 |
四、纳入与排除标准 |
(一)纳入标准 |
(二)排除标准 |
五、研究方法 |
(一)调查问卷的选择 |
(二)中医证候的判定 |
六、数据处理及统计分析 |
七、研究结果 |
(一)一般资料分析 |
(二)受教育程度 |
(三)慢性病相关病史 |
(四)吸烟饮酒史 |
(五)主要临床症状频率统计 |
(六)证候分布聚类分析 |
(七)中医证候在不同性别间的分布 |
(八)中医证候在不同年龄段的分布 |
(九)中医证侯与慢性病相关病史的分布 |
(十)中医证候与理化指标的相关性分布 |
八、讨论 |
(一)单纯收缩期高血压并脑梗死的中医病机演变规律 |
(二)导师观点 |
(三)聚类分析在中医证候中的应用 |
(四)统计结果分析 |
十、结论 |
十一、局限性 |
第三部分 实验研究 |
第一节 单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证患者和单纯收缩期高血压肾虚血瘀证患者转录组测序分析 |
一、研究材料 |
(一)研究对象 |
(二)研究材料采集 |
二、研究方法 |
(一)主要试剂与仪器 |
(二)血浆总RNA的纯化 |
(三)转录组测序(RNA-seq) |
(四)转录组测序数据分析 |
三、研究结果 |
(一)血浆总RNA浓度及纯度质控结果 |
(二)转录组测序质控结果 |
(三)转录组测序数据统计结果 |
四、讨论 |
五、小结 |
第二节 单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证患者差异表达mRNA的生物信息学研究 |
一、研究材料 |
二、研究方法 |
(一)差异表达mRNA的 GO分析 |
(二)差异表达mRNA的 KEGG分析 |
三、结果 |
(一)差异表达mRNA的 GO分析结果 |
(二)差异表达mRNA的 KEGG分析结果 |
四、讨论 |
五、小结 |
第三节 差异表达lncRNA的生物信息学研究 |
一、研究材料 |
二、研究方法 |
(一)单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证患者差异表达lncRNA靶基因预测 |
(二)lncRNA-mRNA共表达网络构建 |
(三)差异表达lncRNA靶基因与mRNA取交集后的基因GO和 KEGG富集分析 |
三、结果 |
(一)lncRNA靶基因预测结果 |
(二)lncRNA-mRNA共表达网络 |
(三)差异lncRNA预测的靶基因和差异mRNA交集并对交集后的mRNA做GO分析和KEEG分析结果 |
四、讨论 |
五、小结 |
第四节 差异特定lncRNA与单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证患者相关性分析 |
一、研究对象 |
二、研究方法 |
(一)主要试剂与仪器 |
(二)扩大样本的qT-PCR验证特定lncRNA和 mRNA的表达 |
(三)特定lncRNA、mRNA和血液相关指标回归分析 |
(四)单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证患者和对照组间血液相关指标显着差异分析 |
三、结果 |
(一)实时荧光定量PCR(qT-PCR)验证差异表达lncRNA、mRNA结果 |
(二)特定lncRNA、mRNA和血液相关指标回归分析 |
(三)单纯收缩期高血压并脑梗死肾虚血瘀证患者和对照组间血液相关指标显着性分析结果 |
四、讨论 |
五、小结 |
讨论 |
结语 |
参考文献 |
附录 |
致谢 |
查新报告 |
发表论文 |
科研课题 |
(2)rAAV9介导的CGRP基因对自发性高血压大鼠血压、左心室纤维化、肾脏损伤的影响(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
1 引言 |
2 材料与方法 |
2.1 实验材料 |
2.2 实验方法 |
2.3 统计学分析 |
3 结果 |
3.1 各组大鼠收缩压比较 |
3.2 各组大鼠血浆中CGRP浓度的比较 |
3.3 大鼠收缩压与血浆CGRP浓度的相关性 |
3.4 各组大鼠左心室重量指数比较 |
3.5 各组大鼠左心室心肌CGRP表达 |
3.6 各组左心室心肌胶原纤维比较 |
3.7 各组大鼠尿微量白蛋白浓度的比较 |
3.8 各组大鼠肾脏组织病理观察 |
3.9 各组大鼠存活状态 |
4 结论 |
5 讨论 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
中英文缩略词表 |
致谢 |
(3)杜仲-刺蒺藜药对调控lncRNA干预血管紧张素Ⅱ诱导神经损伤的机制研究(论文提纲范文)
提要 |
abstract |
引言 |
理论研究 |
一、老年高血压共病认知障碍的研究进展 |
(一)老年高血压流行病学研究 |
(二)老年高血压病理特点与临床特征 |
(三)老年高血压共病认知障碍的研究进展 |
二、LNCRNA在高血压及其并发症中作用机制的的研究进展 |
(一)lncRNAs的生物学特点 |
(二)lncRNAs参与高血压的发生发展 |
(三)lncRNA与高血压常见并发症的关联 |
(四)总结与展望 |
三、老年高血压共病认知障碍的中医理论探讨 |
(一)肝肾功能正常是血脉畅利的基础 |
(二)肝肾功能与认知功能发挥相关 |
(三)肝肾亏虚是老年高血压共病认知障碍的核心病机 |
临床研究 |
一、研究内容 |
二、研究对象 |
(一)病例来源 |
(二)诊断标准 |
(三)纳入标准 |
(四)排除标准 |
(五)剔除标准 |
三、数据处理软件及处理过程 |
(一)数据预处理和数据库的完善 |
(二)数据处理与结果输出 |
(三)核心药对筛选 |
四、结果及分析 |
(一)一般资料分析 |
(二)用药统计 |
(三)讨论 |
实验部分 |
一、基于整合药理学平台预测杜仲-刺蒺藜药对治疗老年高血压共病认知障碍的机制 |
(一)方法 |
(二)结果 |
(三)小结 |
二、基于LC-MS/MS的刺蒺藜神经细胞保护作用的物质基础研究 |
(一)材料 |
(二)方法 |
(三)结果 |
(四)讨论 |
三、杜仲、刺蒺藜有效部位及组合比例的筛选 |
(一)实验目的 |
(二)实验材料 |
(三)实验方法 |
(四)实验结果 |
(五)结论 |
四、长链非编码RNA和 MRNA联合分析ANGⅡ诱导的神经元功能障碍 |
(一)材料和方法 |
(二)结果 |
(三)讨论 |
五、杜仲-刺蒺藜通过调控长链非编码RNA和 MRNA治疗ANGⅡ诱导的神经元功能障碍 |
(一)实验目的 |
(二)实验材料 |
(三)实验方法 |
(四)实验结果 |
(五)讨论 |
结语 |
参考文献 |
综述 长链非编码 RNAs 在原发性高血压及其并发症中的作用机制研究进展 |
参考文献 |
附录 |
致谢 |
查新报告 |
发表论文 |
(4)炎症抑制剂PTUPB和长链非编码RNA HMMR-AS1影响胶质母细胞瘤生长的机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 绪论 |
第二章 t-AUCB对胶质母细胞瘤lncRNA和mRNA表达谱的影响 |
1. 前言 |
2. 材料与方法 |
3. 结果 |
4. 讨论 |
第三章 下调HMMR-AS1对HMMR表达和胶质母细胞瘤生长的影响 |
1. 前言 |
2. 材料与方法 |
3. 结果 |
4. 讨论 |
第四章 上调HMMR-AS1对HMMR表达和胶质母细胞瘤生长的影响 |
1. 前言 |
2. 材料与方法 |
3. 结果 |
4. 讨论 |
第五章 炎症抑制剂PTUPB对胶质母细胞瘤的抑制作用及机制 |
1. 前言 |
2. 材料与方法 |
3. 结果 |
4. 讨论 |
全文总结 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
攻读学位期间发表文章情况 |
致谢 |
(5)冠心病患者外周血中lncRNA-ANRIL的表达水平及其临床意义(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略语 |
前言 |
研究现状、成果 |
研究目的、方法 |
一、染色体9p21.3 区段上单核苷酸多态性表达与冠心病相关性研究 |
1.1 对象和方法 |
1.1.1 研究对象 |
1.1.2 主要实验仪器和试剂 |
1.1.3 研究方法 |
1.2 结果 |
1.2.1 研究对象的临床资料特征 |
1.2.2 SNP与冠心病相关性分析 |
1.3 小结 |
二、lncRNAANRIL、CDKN2A、CDKN2B在冠心病中的表达分析和临床意义 |
2.1 .研究对象和方法 |
2.1.1 研究对象 |
2.1.2 主要实验仪器和试剂 |
2.1.3 研究方法 |
2.2 结果 |
2.2.1 lncRNA ANRIL、CDKN2A、CDKN2B的表达水平 |
2.2.2 ANRIL的 ROC曲线评估诊断冠心病的价值 |
2.2.3 rs1333049 等位基因频率G与 lnc-ANRIL表达的相关性分析 |
2.2.4 lnc RNA-ANRIL表达与CDKN2A、CDKN2B表达的相关性分析 |
2.3 小结 |
讨论 |
结论 |
参考文献 |
发表论文和参加科研情况说明 |
综述 LncRNAs在冠心病病人外周血中的表达及临床意义 |
综述参考文献 |
致谢 |
个人简历 |
(6)杜仲-刺蒺藜药对通过调控lncRNA保护血管内皮的机制研究(论文提纲范文)
提要 |
Abstract |
引言 |
第一部分 理论探讨 |
1 内皮细胞功能紊乱概述 |
2 lncRNA相关研究 |
2.1 lncRNA分类及主要功能 |
2.2 lncRNA与内皮细胞 |
2.3 lncRNA、内皮细胞功能紊乱与高血压 |
2.4 lncRNA、内皮细胞功能紊乱与动脉粥样硬化 |
3 中医对高血压与动脉粥样硬化的认识 |
3.1 中医对高血压的认识 |
3.2 中医对高血压合并动脉粥样硬化的认识 |
3.3 导师观点 |
4 杜仲、刺蒺藜的古今研究 |
4.1 杜仲 |
4.2 刺蒺藜 |
第二部分 高血压合并颈动脉粥样硬化的中医证型规律及用药规律分析 |
1 研究目的 |
2 研究对象 |
3 诊断标准 |
3.1 高血压诊断标准 |
3.2 颈动脉粥样硬化诊断标准 |
3.3 中医辨证标准 |
4 纳入与排除标准 |
4.1 纳入标准 |
4.2 排除标准 |
5 研究方法 |
5.1 病例收集 |
5.2 观察指标 |
5.3 数据处理 |
5.4 统计方法 |
6 结果 |
6.1 一般资料分析 |
6.2 主要临床症状频率统计 |
6.3 主要舌、脉象统计 |
6.4 聚类分析的证型分类 |
6.5 肝肾阴虚证证型分析 |
6.6 痰瘀阻滞证证型分析 |
6.7 肝阳上亢证证型分析 |
6.8 各证型与IMT、baPWV、斑块以及血脂各指标相关分析 |
6.9 药物频次统计 |
6.10 药类频次统计 |
6.11 药物聚类分析 |
7 讨论 |
7.1 高血压合并动脉粥样硬化的中医病机认识 |
7.2 聚类分析在中医证候分类中的应用 |
7.3 高血压合并颈动脉粥样硬化中医证型规律分析 |
8 结论 |
9 局限性 |
第三部分 杜仲-刺蒺藜药对通过调控lncRNA保护血管内皮的机制研究 |
实验一 刺蒺藜有效部位的提取及物质基础研究 |
1 实验目的 |
2 实验材料 |
2.1 实验用药 |
2.2 实验仪器 |
2.3 实验试剂与材料 |
2.4 层析系统和显色剂 |
3 实验方法 |
3.1 提取和分离 |
3.2 刺蒺藜有效部位的物质基础研究 |
4 实验结果 |
4.1 提取和分离 |
4.2 刺蒺藜乙酸乙酯Fr. 15 有效物质基础研究 |
5 讨论 |
6 结论 |
实验二 刺蒺藜、杜仲有效部位的筛选及配伍 |
1 实验目的 |
2 实验材料 |
2.1 主要试剂 |
2.2 主要仪器 |
2.3 实验用试剂的配制 |
3 实验方法 |
3.1 细胞培养 |
3.2 MTT比色实验 |
3.3 Transwell迁移实验 |
3.4 杜仲、刺蒺藜及有效部位靶点预测 |
4 实验结果 |
4.1 ox-LDL对细胞活力的影响 |
4.2 阿托伐他汀作用浓度筛选 |
4.3 杜仲有效成分筛选 |
4.4 刺蒺藜有效部位的筛选 |
4.5 杜仲有效成分与刺蒺藜有效部位最佳配伍比例筛选 |
4.6 杜仲、刺蒺藜的靶点预测 |
5 讨论 |
6 结论 |
实验三 ox-LDL诱导内皮细胞损伤的相关lncRNA表达谱改变 |
1 实验目的 |
2 实验材料 |
2.1 细胞和主要试剂 |
2.2 主要仪器 |
2.3 实验用试剂的配制 |
3 实验方法 |
3.1 THP-1 细胞的培养 |
3.2 MTT比色实验 |
3.3 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
3.4 Transwell迁移实验 |
3.5 细胞能量代谢 |
3.6 基因芯片实验 |
3.7 NONHSAT061051 si RNA的转染 |
3.8 NONHSAT061051 si RNA转染后NONHSAT061051及靶基因表达的检测 |
3.9 NONHSAT061051 si RNA转染后ICAM-1 蛋白的检测 |
3.10 NONHSAT061051 si RNA对单核细胞(THP-1 细胞)-内皮细胞黏附的影响 |
3.11 统计方法 |
4 实验结果 |
4.1 ox-LDL对细胞凋亡的影响 |
4.2 ox-LDL对细胞迁移的影响 |
4.3 ox-LDL对细胞能量代谢的影响 |
4.4 ox-LDL诱导的HAEC中lncRNA表达谱变化 |
4.5 NONHSAT061051 si RNA各组转染效率的评估 |
4.6 敲减NONHSAT061051对HAEC中NONHSAT061051、ICAM-1 基因及ICAM-1 蛋白表达的影响 |
4.7 敲减NONHSAT061051对ox-LDL诱导的单核细胞(THP-1 细胞)-内皮细胞黏附功能的影响 |
5 讨论 |
6 结论 |
实验四 杜仲-刺蒺藜对ox-LDL诱导的内皮损伤的保护作用 |
1 实验目的 |
2 实验材料 |
3 实验方法 |
3.1 细胞培养 |
3.2 透射电子显微镜(TEM)观察杜仲-刺蒺藜对细胞超微结构的影响 |
3.3 MTT比色实验 |
3.4 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
3.5 Transwell迁移实验 |
3.6 细胞能量代谢 |
3.7 单核细胞(THP-1 细胞)-内皮细胞黏附实验 |
3.8 基因芯片实验 |
3.9 统计方法 |
4 实验结果 |
4.1 杜仲-刺蒺藜对细胞结构的影响 |
4.2 杜仲-刺蒺藜对细胞活力的影响 |
4.3 杜仲-刺蒺藜对细胞凋亡的影响 |
4.4 杜仲-刺蒺藜对细胞迁移能力的影响 |
4.5 杜仲-刺蒺藜对细胞能量代谢的影响 |
4.6 杜仲-刺蒺藜对单核细胞(THP-1 细胞)-内皮细胞黏附功能的影响 |
4.7 杜仲-刺蒺藜对ox-LDL诱导的HAEC lncRNA表达谱的影响 |
4.8 杜仲-刺蒺藜对NONHSAT061051、ICAM-1 及ICAM-1 蛋白表达的影响 |
5 讨论 |
6 结论 |
结语 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
附录 |
致谢 |
查新报告 |
发表论文 |
(7)急性缺血中风阴阳类证lncRNA、mRNA及miRNA表达谱研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
引言 |
第一部分 文献综述 |
1.1 缺血中风阴阳类证理论及证候客观化的研究进展 |
1.2 脑梗死与表观遗传学调控机制 |
1.2.1 miRNA与缺血性脑血管病 |
1.2.2 lncRNA与缺血性脑血管病 |
1.3 表观遗传机制在中医药研究中的应用进展 |
第二部分 急性缺血中风阴阳类证患者血清lncRNA、mRNA、miRNA表达谱构建 |
2.1 研究对象 |
2.1.1 研究人群 |
2.1.2 诊断标准 |
2.1.3 病例组纳入与排除 |
2.2 材料与方法 |
2.2.1 主要仪器与试剂 |
2.2.2 实验操作 |
2.3 结果 |
2.3.1 一般临床资料 |
2.3.2 样本RNA质检结果 |
2.3.3 芯片杂交信号原始扫描结果 |
2.3.4 lncRNAs、mRNAs、miRNAs在急性缺血中风阴类证、阳类证患者与对照组血清的表达谱差异 |
2.3.5 聚类图分析 |
2.3.6 火山图分析 |
2.3.7 缺血性中风阴阳类证差异lncRNAs的 q RT-PCR验证 |
第三部分 LNCRNAS与 MRNAS靶基因功能分析及作用预测 |
3.1 材料 |
3.2 方法 |
3.2.1 基因本体论(Gene Ontology,GO)分析 |
3.2.2 通路富集分析 |
3.3 结果 |
3.3.1 急性缺血中风与非中风组差异mRNAs的 GO和 KEGG分析 |
3.3.2 急性缺血中风阴类证与阳类证组差异mRNAs的 GO和 KEGG分析 |
3.4 讨论 |
3.4.1 急性缺血中风具有lncRNA、miRNA和 mRNA差异基因表达谱 |
3.4.2 急性缺血中风阴阳类证间具有lncRNA、miRNA和 mRNA差异基因表达谱 |
结语 |
参考文献 |
附录 |
在校期间发表论文情况 |
致谢 |
附件 |
(8)血管紧张素转换酶2与Nephrin信号、肾脏炎症及纤维化调控(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
中英词对照表 |
绪论 |
第一部分 ACE2对高血压小鼠Nephrin信号及肾脏损伤的调控作用 |
1 材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 试剂配制 |
1.3 设备与耗材 |
1.4 动物饲养与分组 |
1.5 高血压模型制备 |
1.6 小鼠血压测量 |
1.7 组织取材 |
1.8 Western印迹 |
1.9 透射电镜观察 |
1.10 统计学分析 |
2 实验结果 |
2.1 重组ACE2干预对高血压小鼠血压水平的影响 |
2.2 各组小鼠体质量、心率及血脂水平 |
2.3 重组ACE2干预对高血压小鼠肾脏血管紧张素及Nephrin水平的影响 |
2.4 高血压小鼠肾脏氧化应激与肾功能改变及重组ACE2干预对其的影响 |
2.5 重组ACE2干预对高血压小鼠肾脏组织超微结构损伤的影响 |
3 讨论 |
第二部分 ACE2对高血压合并动脉粥样硬化状态Nephrin信号及肾脏炎症的影响 |
1 实验材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 试剂配制 |
1.3 设备与耗材 |
1.4 动物饲养与分组 |
1.5 组织取材 |
1.6 Western印迹 |
1.7 实时荧光定量PCR检测 |
1.8 免疫荧光检测 |
1.9 免疫组织化学检测 |
1.10 透射电镜观察 |
1.11 统计学分析 |
2 实验结果 |
2.1 ApoEKO小鼠肾脏组织ACE2水平 |
2.2 ACE2基因缺失对ApoEKO小鼠肾脏组织Nephrin信号的影响 |
2.3 ACE2基因缺失对ApoEKO小鼠AT1受体水平与炎症反应的影响 |
2.4 ACE2基因缺失对ApoEKO小鼠TNF-α/TNFRSF1A信号与肾脏炎症的影响 |
2.5 重组ACE2治疗对Ang Ⅱ输入的ApoEKO小鼠肾脏损伤和炎症反应的影响 |
2.6 ApoEKO小鼠肾脏Nephrin信号与超微结构改变及重组ACE2治疗对其的干预作用 |
3 讨论 |
第三部分 ACE2对高血压合并动脉粥样硬化肾脏纤维化的干预作用 |
1 实验材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 试剂配制 |
1.3 设备与耗材 |
1.4 动物饲养与分组 |
1.5 组织取材 |
1.6 Western印迹 |
1.7 实时荧光定量PCR检测 |
1.8 Masson三色染色 |
1.9 统计学分析 |
2 实验结果 |
2.1 各组小鼠血压、体质量及血脂水平 |
2.2 重组ACE2对合并高血压的ApoEKO小鼠肾脏组织中mTOR/ERK1/2信号的调控作用 |
2.3 重组ACE2对合并高血压的ApoEKO小鼠肾脏组织中TGF-β1信号及胶原水平的影响 |
2.4 重组ACE2对合并高血压的ApoEKO小鼠肾脏组织纤维化结构改变的影响 |
3 讨论 |
参考文献 |
研究生在学成果 |
致谢 |
(9)高血压治疗的研究进展与展望(论文提纲范文)
1 药物治疗 |
1.1 β-受体阻滞剂 |
1.2 维生素D |
1.3 叶酸 |
1.3.1 H型高血压患者血清B族维生素水平以及脑影像学变化的研究 |
1.3.2 H型高血压与缺血性脑卒中预后的关系 |
1.3.3 H型高血压增加脑梗死的复发风险 |
1.3.4 血浆Hcy与冠心病及高血压的相关性研究 |
1.4 抗抑郁治疗 |
1.5 褪黑素 |
2 非药物治疗 |
2.1 心理学因素治疗 |
2.1.1 心理学因素对高血压患者运动行为的影响 |
2.1.2 连续护理干预对原发性高血压患者动态血压的影响 |
2.1.3 社会支持对社区高血压患者行为阶段的影响 |
2.2 有氧运动降低顽固性高血压 |
2.3 高血压的膳食疗法 |
2.4 平衡针治疗高血压获老年医学创新奖 |
2.5 高血压的介入治疗 |
2.5.1 经导管射频消融肾交感神经治疗难治性高血压的近期疗效和安全性 |
2.5.2 肾动脉去神经可改善糖代谢与耐药性高血压 |
2.5.3 去肾神经术治疗难治性高血压患者有可能降低心血管发病率和病死率 |
2.5.4 欧洲高血压学会 (ESH) |
3 高血压疫苗及基因治疗 |
3.1 疫苗治疗 |
3.2 基因治疗 |
4 展望 |
(10)基因治疗的研究进展(论文提纲范文)
1 基因治疗的研究进展 |
1.1 肿瘤基因治疗的研究进展[5][6] |
1.1.1 抑癌基因治疗 |
1.1.2 针对癌基因的治疗 |
1.1.3 肿瘤免疫基因治疗 |
1.1.4 自杀基因治疗或酶药物前体疗法 |
1.1.5 耐药基因治疗 |
1.1.6 抗血管生成基因治疗 |
1.2 原发性高血压基因治疗的研究进展[8] |
1.2.1 正义基因治疗法 |
1.2.2 反义基因治疗法 |
1.3 病毒基因治疗的研究进展[9] |
1.3.1 反义寡核苷酸 (ASODN) 疗法 |
1.3.2 核酶 |
1.3.3 脱氧核酶 |
1.3.4 小干扰RNA |
1.3.5 疫苗 |
2 基因治疗的前景 |
四、高血压反义基因治疗的研究进展(论文参考文献)
- [1]单纯收缩期高血压并脑梗死的中医证候特征及其lncRNA差异表达谱研究[D]. 杨洁. 山东中医药大学, 2020(01)
- [2]rAAV9介导的CGRP基因对自发性高血压大鼠血压、左心室纤维化、肾脏损伤的影响[D]. 雷蕾. 湖南师范大学, 2020(01)
- [3]杜仲-刺蒺藜药对调控lncRNA干预血管紧张素Ⅱ诱导神经损伤的机制研究[D]. 邵琳琳. 山东中医药大学, 2019(05)
- [4]炎症抑制剂PTUPB和长链非编码RNA HMMR-AS1影响胶质母细胞瘤生长的机制研究[D]. 李俊漾. 南京大学, 2019(01)
- [5]冠心病患者外周血中lncRNA-ANRIL的表达水平及其临床意义[D]. 王娜. 天津医科大学, 2019(02)
- [6]杜仲-刺蒺藜药对通过调控lncRNA保护血管内皮的机制研究[D]. 姜凌宇. 山东中医药大学, 2018(01)
- [7]急性缺血中风阴阳类证lncRNA、mRNA及miRNA表达谱研究[D]. 刘文琛. 广州中医药大学, 2018(05)
- [8]血管紧张素转换酶2与Nephrin信号、肾脏炎症及纤维化调控[D]. 陈来江. 上海交通大学, 2016
- [9]高血压治疗的研究进展与展望[J]. 李莹,徐克雷. 实用心脑肺血管病杂志, 2013(08)
- [10]基因治疗的研究进展[J]. 黄敏. 科技创新导报, 2012(25)