一、自身外周造血干细胞移植时粒系集落刺激因子的应用研究（论文文献综述）
张中豪[1]（2021）在《粒细胞集落刺激因子受体调控造血干细胞功能和慢性髓系白血病发病进程的研究》文中进行了进一步梳理造血干细胞（hematopoietic stem cells,HSCs）是一类具有自我更新和分化为所有成熟造血细胞的多能干细胞,能够长期维持造血系统的稳定性。在骨髓中,成体造血干细胞的生理功能受到其自身的内在因素以及骨髓微环境（Bone marrow niche,BM niche）等外在因素的共同调节。其中,由骨髓微环境细胞分泌的一系列因子,如:GCSF、CXCL12、IL-3、SCF等,参与调控造血干细胞的自我更新、增殖、分化、动员等重要生理活动。本课题利用常规基因敲除技术构建粒细胞集落刺激因子受体（Granulocyte colony-stimulating factor receptor,GCSFR又称为Csf3r）缺失的纯合C57BL/6J小鼠,研究GCSF-GCSFR介导的信号通路参与调控造血干细胞功能的机理。文章分为四个部分:（1）利用流式细胞术分析Csf3r-/-小鼠各造血组织和器官中血液细胞的变化;（2）分析Csf3r-/-小鼠造血干细胞的功能变化;（3）构建三种骨髓移植模型探究Csf3r-/-BM Niche以及Csf3r-/-HSCs对重建造血系统的影响;（4）探究删除Csf3r基因对慢性髓系白血病（Chronic myeloid leukemia,CML）急性发病期的影响。研究结果表明:（1）Csf3r-/-会引起成年小鼠造血系统失衡,表现为:骨髓中长效造血干细胞（Long-term hematopoietic stem cell,LT-HSC）减少,粒系-巨噬系祖细胞（Granulocyte macrophage progenitor,GMP）减少、共同髓系祖细胞（Common myeloid progenitor cell,CMP）和巨核系-红系祖细胞（Megakaryocyte-erythroid progenitor cell,MEP）增多;脾脏、外周血以及骨髓中的髓系和粒系细胞减少。（2）更有趣的是,在Csf3r-/-小鼠骨髓内环境稳态下,共同淋巴系祖细胞（Common lymphoid progenitor cell,CLP）、祖B细胞（progenitor B cells,pro-B）、前体B细胞和未成熟B细胞（pre+immature B）细胞增多,但这种累积现象未在脾脏和外周血中发现。（3）随后,我们通过克隆集落形成（colony forming units,CFU）和Brd U标记实验分析造血干/祖细胞功能的变化,与野生型（Wild type,WT）相比,Csf3r-/-造血干/祖细胞分化形成的克隆集落异常,表现为CFU-E、BFU-E、CFU-G和CFU-GM克隆集落数量降低,CFU-M和CFU-Mix（CFU-GEMM）克隆集落数量增多;造血干细胞的增殖速率降低。（4）在构建的三种骨髓移植模型中,我们发现,（1）Csf3r-/-BM niche不影响正常造血干细胞长期重建造血系统的能力,但短期的恢复能力较弱;（2）相比WT HSCs,Csf3r-/-HSCs竞争性重建造血系统的能力受损;（3）非竞争性造血的条件下,Csf3r-/-HSCs重建造血系统的能力存在严重缺陷,引起小鼠的体重降低、甚至诱发死亡。（5）最后,我们将BCR-ABL1癌基因导入WT或Csf3r-/-骨髓细胞,构建慢性髓系白血病细胞株并移植到C57BL/6小鼠体内,观察白血病的发病情况。我们发现Csf3r-/-/BCR-ABL1实验组发病程度较WT/BCR-ABL1更加恶劣,表现为,小鼠的生存周期更短、脾脏中的白血病细胞浸润率更高、肝脏肿大更明显。本文研究了Csf3r基因缺失后对HSCs的增殖、分化以及重建造血系统等多个功能的影响,并积极探索了Csf3r-/-对BCR-ABL1+慢性髓系白血病的影响。目前,科学界多关注GCSF-GCSFR信号通路对造血干细胞动员上的影响,但对造血干细胞功能的影响鲜有报道,因此,我们的研究将补充这一空白,并为进一步探索由于Csf3r缺失而引起造血系统紊乱的分子机制提供了坚实的基础。
文瑞婷[2]（2020）在《单细胞水平解析体外扩增对脐带血造血干细胞自我更新和分化的影响》文中进行了进一步梳理【目的】本研究拟在体外采用细胞因子联合不同小分子化合物扩增脐带血（cord blood,CB）来源的造血干细胞（hematopoietic stem cells,HSC）,探索体外诱导HSC高效扩增的最佳体系;通过免疫缺陷小鼠连续移植实验评价扩增后细胞的植入能力和长期自我更新能力;基于单细胞测序技术筛选调控HSC自我更新的关键分子,阐明其作用的信号通路,并从单细胞水平解析体外扩增体系对HSC自我更新和分化的影响。【方法】（1）CB来源的CD34+细胞在4种细胞因子（SCF、Flt3-L、TPO、IL-6）存在的条件下与UM171、SR1、和K1小分子单独或联合（USK）在无血清培养基中培养10 d,流式细胞术检测CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的比例以及CD33+、CD41+、CD3-CD56+、CD235a+、CD19+和CD3+细胞的比例;通过集落形成单位（colony forming units,CFU）实验评价扩增后的细胞向各系祖细胞分化的能力。（2）将500、2500及10000个未经培养的CB来源的CD34+细胞（Unculture）,或者500、2500及10000个起始细胞经Vehicle、USK体外培养10 d扩增后的细胞分别移植给首次移植NOD-Prkdcscid Il2rgnull（NPG）受鼠,通过流式细胞术检测移植后5、8、12、16周时小鼠外周血和16周时骨髓中h CD45+的比例。（3）取首次移植10000个起始细胞组的NPG小鼠骨髓分为2×106,5×106和1×107三个数量级分别移植给二次移植NPG受鼠,通过流式细胞术检测移植后16周时小鼠骨髓中h CD45+细胞的比例。（4）通过极限稀释分析（limiting dilution analysis,LDA）计算首次移植和二次移植小鼠体内NOD-SCID小鼠再植细胞（severe-combined immunodefcient mouse-repopulating cells,SRC）的数量。（5）采用单细胞RNA测序（single cell RNA sequencing,sc RNA-seq）技术从单细胞水平解析体外扩增体系对HSC分化的影响,筛选调控HSC自我更新的关键分子,阐明其作用的信号通路。【结果】（1）UM171、SR1、K1以及USK培养后CD34+细胞的比例均高于Vehicle培养组（P均<0.001）;USK以及UM171培养后CD34+CD38-细胞的比例较Vehicle培养组明显升高（P均<0.001）,SR1及K1培养组与Vehicle培养组比较无统计学差异（P均>0.05）;USK培养后CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞比例较Vehicle培养组明显升高（P<0.001）,其他组与Vehicle培养组比较无统计学差异（P均>0.05）。USK培养后CD34+细胞的比例与Unculture组比较无统计学差异（P均>0.05）,CD34+CD38-细胞以及CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的比例均高于Unculture组（P均<0.05）。（2）USK培养组及SR1培养组CD34+细胞扩增的倍数较Vehicle组显着增多（P均<0.05）;UM171培养组CD34+CD38-细胞扩增的倍数较Vehicle组升高（P<0.05）;Vehicle、UM171、SR1、K1、USK体外培养后CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的数量较培养前初始细胞数量分别增加了（61.58±47.51）、（248.56±193.44）、（210.05±201.46）、（133.08±118.93）和（543.33±365.20）倍,USK培养组CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞扩增的倍数较Vehicle组显着增多（P<0.001）。（3）USK及SR1培养组CD3-CD56+细胞比例均较Vehicle组增加（P<0.01）;UM171培养组CD33+细胞比例较Vehicle组增加（P<0.01）;UM171培养组CD41+细胞比例较Vehicle组降低（P<0.05）;各组之间CD235a+、CD19+和CD3+细胞比例均无统计学差异（P均>0.05）。USK、UM171、K1组CFU-G、M、GM、E以及GEMM的数量与Unculture组和Vehicle组比较均无统计学差异（P均>0.05）;SR1组CFU-G和GEMM的数量均较Unculture组减少（P<0.05）;Vehicle组GEMM的数量也较Unculture组减少（P<0.05）。（4）当移植500个起始细胞时,首次移植后第5周时USK组小鼠外周血中h CD45+细胞比例较Unculture组和Vehicle组均明显增加（P均<0.05）,移植后16周时USK组小鼠外周血和骨髓中h CD45+细胞比例与Unculture组比较无统计学差异（P>0.05）;当移植2500个起始细胞时,移植后5、8、12、16周时USK和Vehicle组小鼠外周血和骨髓中h CD45+细胞比例均较Unculture组明显降低（P均<0.05）。当移植10000个起始细胞时,移植后8、12、16周时USK组小鼠外周血中h CD45+细胞比例均较Unculture组减少（P均<0.05）。（5）当移植2×106、5×106或1×107个起始骨髓细胞时,二次移植后16周时USK组以及Vehicle组小鼠骨髓中h CD45+细胞的比例与Unculture组比较均未见明显差异（P均>0.05）。（6）首次移植时USK组每个起始细胞中含有SRC的数量（1/279）较Vehicle组（1/1379）增加了约5倍（P<0.05）,较Unculture组（1/543）增加了约2倍（P>0.05）。二次移植时各组每个起始细胞中含有SRC的数量无统计学差异（P均>0.05）。（7）sc RNA-seq数据采用UMAP降维可视化后,共分为17个细胞亚群。比较CB来源的CD34+细胞经USK体外培养与Unculture细胞群的变化,结果显示:CD34+细胞经USK体外培养10 d时Cluster 4（HSC）、Cluster 16（My SC）以及Cluster 10（MESC）细胞数量较体外培养前显着减少或消失,Cluster 1（My RP）、Cluster 2（GMP）、Cluster 3（Granulocyte）、Cluster 5（EMP）、Cluster 6（Ma/Ba/Eo）、Cluster7（Monocyte/m DC）、Cluster 8（Platelet）、Cluster 15（Erythroid）的细胞数量增多;比较CD34+细胞经USK培养与Vehicle培养之间细胞群的变化,结果显示:USK体外培养后10 d时Cluster 10、Cluster 0、Cluster 1、Cluster 5、Cluster 6以及Cluster15细胞数量较Vehicle培养组增多,Cluster 3、Cluster 7、Cluster 8、Cluster 13以及Cluster 14（B/p DC）细胞数量较Vehicle组显着减少。（8）sc RNA-seq基因表达分析显示:除研究已报道的HSC特异性标记AVP以及与HSC“干性”相关转录因子KLF2、HES1、MLLT3之外,HOPX和ID1也表达于Cluster 4（HSC）和Cluster 16（My HSC）。（9）比较USK组与Vehicle组差异性表达基因结果显示:USK体外培养上调了NRIP1、PRDX1、SELENOW基因表达并下调了CYP1B基因表达。比较USK组与Unculture组差异性表达基因结果显示:USK体外培养后细胞周期和细胞增殖相关基因（MKI67、TOP2A、HIST1H4C和TUBA1B）、髓系基因（IGLL1和MPO）、线粒体基因（MT-ND1和MT-CO3）表达上调,转录因子JUN、JUND、FOS、FOSB、IRF1、REL和NFKBIA表达下调。（10）比较Cluster 0（Multi RP）、Cluster 1（My RP）、Cluster 2（GMP）、Cluster10（MESC）与Cluster 4（HSC）细胞群之间的差异性基因表达结果显示:富集的上调基因包括PCLAF、TYMS、CENPF、MPO、IGLL1、HIST1H4C、TESC和PGAM1,富集的下调基因包括JUN、JUND、FOS、FOSB、KLF2、IRF1、NFKBIA、HES1、DNAJB1、HSPH1、HSPA1A和PNRC1;GO分析结果显示Cluster 0、Cluster 1、Cluster 2、Cluster 10与Cluster 4比较主要是促进了线粒体氧化磷酸化能量代谢,抑制了细胞分化的负向调节以及细胞的黏附作用;Pathway分析显示:Cluster 0、Cluster1、Cluster 2、Cluster 10与Cluster 4比较正向调节了氧化磷酸化能量代谢通路,负向调节了MAPK信号通路、FOXO通路以及REG/GR通路。（11）采用SCENIC分析sc RNA-seq数据,结果显示:转录因子FOS、FOSB、JUN、JUND、IRF1、REL在Cluster 4（HSC）、Cluster 16（My SC）中调控强度较高;这些关键分子主要作用于HSC“干性”相关基因、核受体基因、FOXO家族、低氧相关基因、HOX家族、NF-κB信号、TGF-β信号、Notch信号、m TOR信号以及MAPK信号相关基因。【结论】（1）4种细胞因子（SCF+Flt3-L+TPO+IL-6）与3种小分子（UM171+SR1+K1）组合能够使表型为CD34+CD38-CD45RA-CD90+的细胞体外扩增约543倍,其扩增效果明显优于4种细胞因子与其他单个小分子组合。（2）小分子化合物USK组合体外扩增的CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞在NPG小鼠体内可以短期植入,但在长期植入方面与Unculture和Vehicle组比较未见优势,提示CD34+CD38-CD45RA-CD90+可能并不能作为具有长期植入能力的HSC标记。（3）CB CD34+细胞经USK以及Vehicle体外培养后HSC、My SC、MESC显着减少或消失,“再生祖细胞”数量增多;但是与Vehicle培养体系比较,USK体外培养使MESC和“再生祖细胞”数量增多,成熟细胞数量减少。表明CB CD34+细胞经USK以及Vehicle体外培养后HSC发生了不同程度的分化,但是USK扩增组比Vehicle扩增组的分化程度低。（4）HOPX和ID1有望作为人功能性HSC的表型标记。（5）FOS、FOSB、JUN、JUND、IRF1、REL是调控HSC自我更新的关键分子;通过促进转录因子FOS、FOSB、JUN、JUND、IRF1、REL的表达和调节HSC的代谢途径、线粒体功能和ROS水平可能有助于维持HSC的自我更新并抑制其分化。
杨最[3]（2020）在《地中海贫血症红细胞谱系发育分化基因筛查及机制研究》文中进行了进一步梳理地中海贫血症是世界上最常见和发生率最高的一种单基因遗传病。目前临床上地中海贫血症没有可以普遍推广的根治方法。产前诊断在地中海贫血症的预防上有重要贡献。由于产前诊断技术的局限,导致地中海贫血症稀有突变类型不能被检测,不能完全避免地中海贫血症患儿出生。而外显子测序技术有可能弥补这一缺点,因此我们运用外显子测序技术对地中海贫血症基因携带者羊水样本进行检测,既能验证临床产前诊断结果,同时也是为了发现新的变异位点。我们通过外显子测序筛选出1344个共有变异位点。通过对这些共有变异位点进行GO富集分析筛选了26个term,涵盖膜的整体成分、跨膜信号受体活性、细胞外基质结构成分、钙离子结合等;通过KEGG富集分析筛选了13条信号通路,包括糖酵解/糖异生、ECM受体相互作用、补体与凝血级联反应等。这些基因和信号通路可能与地中海贫血症的发病机制密切相关,其结果需要进一步验证。另一方面,珠蛋白基因缺陷影响红细胞发育过程。红细胞的发育起源于造血干细胞,对造血干细胞的机理研究是根治地中海贫血症等一系列血液疾病的潜在突破口。我们利用磁珠分选和流式分选的方法从脐带血样本分离纯化CD34阳性细胞,在体外运用多种细胞因子成功对造血干细胞进行诱导分化,为体外培养造血干细胞模拟体内的造血过程奠定基础。
王君[4]（2020）在《血必净注射液调节脓毒症造血干细胞功能的作用机制研究》文中进行了进一步梳理目的探索脓毒症造血干细胞、祖细胞、免疫细胞及其亚群的变化,并观察血必净注射液对脓毒症小鼠骨髓造血干细胞以及免疫功能的干预作用。方法通过集落形成实验和荧光定量PCR实验分析血必净注射液及其主要成分当归（3个不同产地）对体外小鼠骨髓细胞分化的影响。通过腹腔注射大肠杆菌脂多糖（LPS）建立脓毒症小鼠模型,并给予血必净注射液治疗:血必净组（n=20）按20mL/kg的剂量尾静脉注射血必净注射液,每日1次,连续4天;正常对照组（n=20）及模型组（n=20）均给予等量生理盐水,每日1次,连续4天。通过流式细胞术分析脓毒症小鼠骨髓造血干细胞、造血祖细胞、以及免疫细胞的变化,并分析血必净注射液对上述指标的影响,;通过荧光定量PCR分析血必净对脓毒症小鼠骨髓造血干细胞相关转录因子及信号通路mRNA表达的影响。临床收集脓毒症患者（n=8）及健康志愿者（n=5）,采集外周血（脓毒症患者共采集3次:入组第1、4、7天;健康志愿者采集1次:入组第1天）,并分离外周血单个核细胞（PBMC）,通过流式细胞术分析脓毒症患者和健康志愿者外周血造血干细胞、造血祖细胞以及免疫细胞变化。结果（1）体外实验集落形成实验结果显示:与空白对照组相比,酒当归组和血必净组集落中细胞形态都发生明显改变,细胞表面突起增多。荧光定量PCR结果显示:在三个产地的酒当归组中,GATA2、Runx1、GFi1B、LSD1基因表达均有明显下调（均P<0.05）;在血必净的所有三个浓度中,Runx1、GFi1B、FOS基因表达均有明显下调,CD5基因表达有明显上调（均P<0.05）;当血必净浓度为1mg/ml和10mg/ml时,GATA2、LSD1、CD71、CD90和CD123基因表达均有明显下调（均P<0.05）;当血必净浓度为0.1mg/ml和1mg/ml时,CD11b基因表达有明显下调（均P<0.05）;当血必净浓度为10mg/ml时,CD133基因表达有明显上调（P<0.05）。（2）动物实验造模前,各组小鼠体质量差异无统计学意义（均P>0.05）;造模后24h-48h,模型组及血必净组小鼠体质量明显减轻,造模后72h-96h,两组小鼠体质量逐渐增加,四个时间点体质量与正常对照组比较均有降低（均P<0.01）,同时,在造模后24h,血必净组小鼠体质量明显高于模型组小鼠（P<0.05）。流式检测结果显示:与正常对照组相比,模型组骨髓和脾脏中髓源抑制性细胞（MDSC）比例明显增高,T细胞和B细胞比例明显下降（均P<0.05）,应用血必净后均无明显变化,差异无统计学意义（均P>0.05）。模型组骨髓造血干细胞（LSK）比例较正常组明显升高,应用血必净注射液后造血干细胞比例明显下降（均P<0.01）;进一步分析其亚群,结果显示:与正常对照组相比,模型组和血必净组的长期造血干细胞（LT-HSC）比例明显增多,而多能造血祖细胞（MPP）比例明显减少,血必净组MPP下降较模型组更为明显（均P<0.01）。模型组造血祖细胞（LS-K）比例较正常组明显升高（P<0.01）,应用血必净注射液后造血祖细胞比例变化无统计学意义（P>0.05）;模型组红系-巨核系祖细胞（MEP）比例较正常组明显升高（P<0.05）,应用血必净注射液后比例明显下降（P<0.01）。荧光定量PCR结果显示:与正常对照组相比,模型组中GATA2、GFi1B、Runx1、FOS和LSD1基因表达均有明显下调,PU.1基因表达上调（均P<0.01）,应用血必净注射液后FOS明显下调,LSD1明显上调（均P<0.05）。（3）临床研究一般资料和基本生命体征:健康对照组与病例组年龄差异无统计学意义（P>0.05）,病例组体温及收缩压明显高于对照组（均P<0.05）。血常规检测显示:健康对照组数值均正常,病例组入组第1天（D1）、入组第4天（D4）白细胞计数、中性粒细胞百分比和中性粒细胞计数均高于对照组（均P<0.05）,且病例组入组第7天（D7）中性粒细胞百分比相较D1明显下降（P<0.05）;病例组D1、D4淋巴细胞百分比和淋巴细胞计数均低于对照组（均P<0.05）,且病例组D7淋巴细胞百分比相较于D1明显上升（P<0.05）。外周血流式检测结果显示:病例组D1、D4的T细胞和CD4+T细胞比例明显低于对照组（均P<0.01）,且在病例组D7时T细胞和CD4+T细胞比例相较于D1有明显上升（均P<0.05）;病例组D1、D4、D7的CD8+T细胞比例明显低于对照组（均P<0.05）,且相比于病例组D1、D4,病例组D7时CD8+T细胞比例明显增加（均P<0.05）;同时,与健康对照组相比,病例组D4时CD34+细胞、造血祖细胞（CD34+CD38+）和髓系祖细胞（CMP）比例都有明显增加（均P<0.05）。结论1.血必净注射液可通过影响体外小鼠骨髓细胞转录因子的表达,促进骨髓细胞的分化。2.脓毒症小鼠造血干细胞异常增殖,免疫功能下降,血必净注射液可通过改善脓毒症小鼠骨髓造血干细胞的分化障碍,减少异常增殖,其机制可能与LSD1等基因的表达上调有关。3.脓毒症患者外周血造血祖细胞异常增殖,而免疫细胞（T细胞）数量下降。
郑夏[5]（2020）在《儿童骨髓增生异常综合征临床特点和预后 ——单中心临床病例分析》文中研究指明研究目的:探讨单中心儿童骨髓增生异常综合征（MDS）的临床特点、危险分层和预后,为儿童MDS规范性诊治提供临床依据。对象与方法:回顾性总结苏州大学附属儿童医院血液科2011年1月1日至2017年12月31日收治的53例初发诊断为骨髓增生异常综合征（MDS）患儿的临床特点、危险分层和不同治疗方案对预后的影响,采用Cox回归模型分析风险因素,并以Kaplan-Meier生存曲线方法预测患儿1年、3年总生存率（OS）和无事件生存率（ESF）。结果:（1）53例患儿中,患儿性别比例1.4:1.0（男31例/女22例）,男性略多于女性;中位年龄:4.8岁（0岁-15岁）。其中:儿童难治型血细胞减少症（MDS-RCC）24例（45%）:难治性贫血伴原始细胞增多（MDS-RAEB）9例（17%）;RAEB向白血病转化或转化中的RAEB（MDS-RAEB-T）7例（13%）;幼年型粒-单核细胞白血病（JMML）13例（25%）。（2）染色体异常11例,约占总病例数21%,其中单独7q-有6例、单独Y缺失1例、单独cen8三体异常2例、7q-合并Y缺失的1例、5q-合并7q-1例。（3）病例中51例,完善了基因学检查,12例异常（25%,12/51）,主要相关突变基因包括:PTPN11（NF1、D61Y、Q272）、ASXL1、TET2F8682（T>G）/U2AF1S34（C>T）、WT1、EVL、MPL。其中还有合并范可尼基FANCA突变1例,WAS基因阳性1例。（4）除13例JMML病例,其余40例MDS全部病例依据IPSS、WPSS及IPSS-R三种方法分类。图表分析以上3类风险评估方法对儿童MDS风险评估都有局限性,不能全面评估儿童MDS预后。（5）结局:接受造血干细胞移植术（HSCT）16例,移植成功后存活10例,移植失败死亡5例,移植成功后失访1例;未接受HSCT的其余37名患儿中,单纯接受药物治疗的有27例,其中5例存活,15例死亡,7例失访;其余10例确诊后放弃治疗死亡。接受HSCT治疗和非HSCT治疗的1年总体生存率（OS）、无事件生存率（ESF）分别为:（75.0%±10.8%）%vs（66.7%±9.1%）（P=0.565）;（68.8%±11.6%）%vs（18.5%±7.5%）%（P=0.007）;3年的总体生存率（OS）、无事件生存率（ESF）分别为:（72.2%±12.2%）%vs（35.3%±10.2%）（P=0.039）;（68.2%±11.8%）%vs（12.5%±6.6%）%（P=0.001）。（6）Cox回归分析53例患儿:年龄小于7岁（P=0.0333）、骨髓活检出现不成熟前体细胞异常定位（ALIP）（P=0.0168）、初诊血小板小于50×109/L（P=0.007）、存在复杂核型和/或基因突变（P=0.0002）和未接受HSCT治疗（P=0.016）是影响儿童MDS预后的高危因素。其余如性别、骨髓存在小巨核细胞、初诊血红蛋白低于80g/L、初诊LDH升高（大于320U/L）及初诊骨髓存在病态造血等均对预后无影响（P>0.05）。结论:（1）儿童MDS以儿童难治性血细胞减少症（MDS-RCC）多见。Cox多因素分析显示:年龄小于7岁、骨髓活检出现ALIP、初诊血小板小于50×109/L、存在复杂核型和/或基因突变和未接受HSCT治疗是影响预后的高危因素。（2）HSCT是目前根治儿童MDS的最有效手段。（3）目前临床评估儿童MDS预后的IPSS-R等方法有明显局限性。
杨隽[6]（2020）在《低剂量ATG联合低剂量PTCy预防GvHD的研究》文中研究指明背景:目前常用的单倍体外周血干细胞移植（Haplo-PBSCT）GvHD预防方案包括以4天ATG为基础和以PTCy方案为基础的（移植后2天CTX）预防方案,移植后a GvHD的发生率仍在40%左右;HLA相合无关供体（URD）移植最常用的是以ATG为基础的预防方案,但移植后a GvHD发生率在24%-30%之间。因此有必要设计新的GvHD预防方案。目的:评价低剂量ATG（5 mg/kg）联合移植后低剂量PTCy（50mg/kg）（低剂量ATG/PTCy）预防异基因外周血干细胞移植（Allo-PBSCT）GvHD疗效和安全性。方法:Haplo-和URD-（包括8-9/10相合血缘）PBSCT均采用低剂量ATG/PTCy方案联合钙调素抑制剂、霉酚酸预防GvHD。Haplo-和URD-PBSCT各入组32例患者,年龄大于55岁的患者采用减低强度预处理（RIC）,余均采用清髓性预处理（MAC）,观察移植后急慢性GvHD、免疫重建、复发及生存情况。同时比较分析Haplo-PBSCT中,31例使用低剂量ATG/PTCy预防与36例既往用ATG为基础方案预防患者移植后急慢性GvHD及生存情况。结果:单倍体移植前瞻性研究:100天内II-IV度a GvHD的发生率为19.4%（95%CI,5.5-33.3%）,III-IV度a GvHD发生率为6.9%（95%CI 0-16.3%）。1年内c GvHD的发生率为18.8%（95%CI,3.9%-33.7%）,NRM为9.4%,180天内CMV和EBV再激活率分别为37.5%（95%CI,19.8%-55.2%）和40.6%（95%CI,22.6%-58.6%）。1年累计RI为25.1%（95%CI,7.3%-42.9%）,DFS和OS分别59%（95%CI,33.3%-84.7%）和78.4%（95%CI,63%-93.8%）。单倍体移植回顾性比较分析:低剂量ATG/PTCy组180天内II-IV度a GvHD和1年内中重度c GvHD发生率显着低于标准剂量ATG组（17.0%vs 40.2%P=0.042;11.2%vs 40.1%,P=0.029）。低剂量ATG/PTCy组1年NRM显着低于ATG组（12.9%vs 36.2%;P=0.038）。CMV和EBV病毒再激活率低剂量ATG/PTCy组与标准剂量ATG组相比有较强的下降趋势（41.9%vs 63.8%,P=0.072;45.2%vs 66.7%,P=0.076）。低剂量ATG/PTCy组移植后1年RI高于标准剂量ATG组（22.8%vs 8.7%,P=0.042）。1年LFS和OS两组无显着差异（67.0%vs 59.2%P=0.540;74.9%vs 59.4%P=0.255）。HLA相合移植前瞻性研究（URD）:100天内II-IV度a GvHD发生率为3.1%（0-6.2%）;中位随访6（0.5-16）月,2例轻度皮肤c GvHD。1年内NRM为12.5%,1年累计RI 21.1%（95%CI,11.1%-30.7%）,1年DFS和OS分别78.8%（95%CI,71%-86.6%）和86.3%（95%CI,79.9%-92.7%）。结论:低剂量ATG/PTCy可以有效预防Haplo-和URD-（包括8-9/10相合血缘）PBSCT后急慢性GvHD,未见复发率增加,值得进一步研究。
崔洁媛[7]（2020）在《1型糖尿病肠道微生态学变化及相关临床征象的系列研究》文中研究表明第一部分1型糖尿病模型大鼠肠道微生态学变化及机制研究目的:观察1型糖尿病模型大鼠肠道微生态学变化,并探讨其可能机制。方法:通过一次性腹腔注射链脲菌素（streptozocin,STZ）,建立经典1型糖尿病大鼠模型。分为正常对照组（A组）、糖尿病模型组（B组）和糖尿病胰岛素干预组（C组）,每组各12只。监测一般情况包括体重、血糖等变化。在实施干预措施第14天时处死三组所有大鼠,留取静脉血、结肠粪便及结肠组织,结肠粪便组织DNA文库制备、高通量测序、生物信息学分析肠道微生态结构的变化,采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）技术检测血清胰高血糖素样肽-1（glucagon like peptide 1,GLP-1）、胰高血糖素样肽-2（glucagon like peptide 2,GLP-2）和胰岛素（insulin,INS）水平,免疫蛋白印迹（western blot）技术检测结肠组织GLP-1和GLP-2蛋白表达水平,组织病理技术分析结肠组织形态学改变。结果:1.链脲菌素1型糖尿病大鼠模型建立成功。2.肠道菌群变化:收集A、B、C三组共36份大鼠粪便样本测序分析,其中35份样本测序成功（97.22%）,A组中1份样本未能获得测序结果（2.78%）,alpha和beta多样性均无统计学差异（P>0.05）。共检出17个菌门、76个菌科和21个菌属。A、B、C三组大鼠肠道细菌在门、科、属水平的丰度比较均有差异（P<0.05）。在门水平Proteobacteria有差异;在科水平Prevotellaceae、Eggerthellaceae和Lactobacillaceae有差异;在属水平Helicobacter、Prevotella、Parabacteroides、Blautia和Others有差异。3.结肠组织结构的观察:A组大鼠结肠粘膜结构完整,隐窝结构明显,未见肠粘膜上皮细胞间连接损坏;B组大鼠结肠粘膜完整性明显受损,隐窝结构部分消失,肠粘膜上皮细胞间连接部分破损,杯状细胞减少;C组大鼠结肠粘膜结构基本完整,隐窝结构存在,肠粘膜上皮细胞间连接基本连续存在。4.血清GLP-1水平:A、B、C三组大鼠血清GLP-1分别为0.82±0.26ng/ml、0.58±0.14 ng/ml、0.70±0.17 ng/ml,其中A组明显高于B组（P<0.05）;血清GLP-2水平:A、B、C三组大鼠血清GLP-2分别为2.10±0.68ng/ml、1.64±0.21 ng/ml、1.79±0.28 ng/ml,其中A组明显高于B组（P<0.05）。5.结肠组织GLP-1、GLP-2免疫蛋白印迹结果变化趋势与二者血清水平相同。结论:1.采用腹腔注射链脲菌素（streptozocin,STZ）法成功建立1型糖尿病大鼠模型。2.1型糖尿病大鼠结肠病理损伤主要体现在结肠粘膜完整性明显受损,隐窝结构部分消失,肠粘膜上皮细胞间连接部分破损,表明结肠结构和粘膜屏障功能受损,胰岛素干预能部分改善这种受损状态。3.1型糖尿病大鼠肠道微生物群结构偏离于正常大鼠,主要表现在以Proteobacteria（变形菌门）,Lactobacillaceae（乳杆菌科）,Prevotellaceae,Helicobacter（缠绕杆菌属）和Parabacteroides（副杆状菌属）丰度增加,Prevotella（普氏菌属）丰度下降,胰岛素干预虽能部分改善这种偏离的状态,但仍未完全扶正。4.1型糖尿病模型大鼠血清和结肠组织GLP-1、GLP-2表达量降低,表明1型糖尿病大鼠模型肠道内分泌激素合成和分泌减少。5.1型糖尿病模型大鼠肠道微生态这种适应性变化趋势可能与GLP-1、GLP-2水平变化存在关联。第二部分1型糖尿病合并中性粒细胞减少症临床特征及机制研究（一）儿童1型糖尿病合并中性粒细胞减少症临床报道目的:阐明儿童1型糖尿病合并中性粒细胞减少症的临床特征。方法:临床总结了2016年01月至2018年12月河北医科大学第三医院儿科和河北省儿童医院收治的1型糖尿病患儿,分析其血常规中性粒细胞变化情况,对于合并粒细胞减少症者检测其血清粒细胞集落刺激因子（Granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF）和粒-单细胞集落刺激因子（Granulocyte macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF）水平。结果:1.2016年至2018年河北医科大学第三医院儿科及河北省儿童医院共诊治38例儿童1型糖尿病,其中6例（15.79%）合并中性粒细胞减少症,男、女各3例,诊断时年龄为5～12岁,其中5例（83.3%）合并酮症酸中毒。2.6例糖尿病合并中性粒细胞减少症患儿中性粒细胞减少出现时间在病程的2～3周（14～21天）和开始胰岛素治疗后3～11天,持续5～9天自行缓解。3.6例患儿血清G-CSF和GM-CSF水平在胰岛素治疗前较正常对照组升高（P<0.05）,胰岛素治疗后下降至正常对照组水平（P>0.05）。4.随访6～40月,6例患儿中性粒细胞数目均维持正常。结论:1.收集的38例1型糖尿病患儿,其中6例合并中性粒细胞减少症,发生率15.79%。2.6例儿童1型糖尿病合并中性粒细胞减少症的时间多发生在开始胰岛素治疗后3～11天,持续5～9天可自行恢复正常,无需要特殊处理。3.儿童1型糖尿病合并中性粒细胞减少症的可能机制与胰岛素治疗导致血清G-CSF和GM-CSF水平下降有关。（二）1型糖尿病模型大鼠中性粒细胞变化及机制研究目的:探索1型糖尿病模型大鼠中性粒细胞变化及与粒细胞集落刺激因子（Granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF）和粒-单细胞集落刺激因子（Granulocyte macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF）的相关性。方法:对于建立的1型糖尿病模型大鼠,胰岛素干预第14天时处死所有大鼠,静脉采血查血常规、血清G-CSF和GM-CSF水平及血淋巴细胞G-CSF和GM-CSF蛋白表达水平。结果:1.胰岛素治疗第14天时,A、B、C三组大鼠中性粒细胞计数,分别为6.87±2.02×109/L、7.15±2.34×109/L和4.65±1.43×109/L,C组低于A、B组（P<0.05）。2.血清G-CSF水平:A、B、C三组大鼠分别为20.34±4.37 pg/ml、48.65±10.93 pg/ml和28.72±8.13 pg/ml,B组高于A、C组（P<0.05）;血清GM-CSF水平:A、B、C三组大鼠分别为为4.60±0.78pg/ml、9.72±3.20 pg/ml和5.85±1.36 pg/ml,B组高于A、C组（P<0.05）。3. 血淋巴细胞G-CSF、GM-CSF免疫蛋白印迹变化趋势与二者血清水平相同。结论:1.1型糖尿病模型大鼠,胰岛素干预治疗14天时可出现中性粒细胞下降。2.1型糖尿病模型大鼠,血清和淋巴细胞G-CSF和GM-CSF水平较正常对照组明显升高,经胰岛素干预后明显下降。3.1型糖尿病模型大鼠出现中性粒细胞下降的机制可能与胰岛素治疗导致血清G-CSF和GM-CSF水平下降有关。
杨子洵[8]（2020）在《趋化因子受体Ⅲ的缺失对于造血系统以及造血重建的影响》文中提出造血干细胞（hematopoietic stem cells,HSCs）是机体内血液系统中所有细胞系的起源细胞,该类细胞具有自我更新增殖和持续分化能力,担负着维持机体内血液系统动态平衡和机体应激反应下重建造血系统等重要生理功能。造血干细胞骨髓微环境（Niche）是位于血管窦周围靠近骨小梁区域附近,由骨髓间充质基质细胞（MSC）及内皮细胞组成的一系列特殊的细胞群体并负责维持和调节造血干细胞生理功能的一种特殊的微环境。在骨髓微环境中,其组成细胞通过细胞粘附分子和细胞膜表面信号分子来与造血干细胞直接或间接接触从而调控造血干细胞的自我更新、增殖、分化等一系列生物学功能。CXCR3在正常情况下可诱导不同类型细胞的趋化和增殖,也可抑制迁移和增殖并诱导细胞凋亡。在某些情况下,它可能有利于肿瘤的生长和进展。G-CSF在体内与受体结合后能特异性地调节粒系祖细胞与下游细胞的分化、增殖与存活。并与血管内皮细胞的分泌有关,增强血管的形成,并且其可以将骨髓中的造血干细胞和成熟粒细胞动员至外周血中。本论文包括四部分内容:（1）CXCR3、GCSFR单基因敲除以及G-CSFR&CXCR3双基因敲除小鼠小鼠造血细胞表型的检测;（2）体外培养CXCR3基因敲除小鼠分离出C-kit阳性细胞观察其基因的缺陷对干细胞体外分化的影响;（3）CXCR3基因敲除小鼠以及G-CSFR&CXCR3双敲除小鼠体内全骨髓竞争性移植和机体应激反应下的造血重建能力的影响;（4）CXCR3基因的缺失影响造血干/祖细胞分裂分化的分子机制。研究结果如下:1:我们首先检测了CXCR3基因敲除小鼠,G-CSFR基因敲除小鼠以及CXCR3、G-CSFR双基因敲除小鼠外周血以及骨髓中造血细胞的比例及数量,结果发现:CXCR3基因的缺失导致造血干细胞相较于普通野生型小鼠,处于分裂状态的细胞更少,并且发现在血液系统下游谱系分化中发现B细胞数量有了明显的降低,也就意味着CXCR3基因的缺失在一定程度上抑制了造血干细胞的自我增殖能力和向成熟B细胞分化的能力。GCSFR基因的缺陷导致其下游谱系分化的粒细胞以及T细胞的数量有了较为明显的下降。而在两者都敲除的情况下发现,无论是下游谱系的粒细胞,T细胞还是B细胞,以及上游造血干、祖细胞,均恢复到了与野生型小鼠相差无几的水平。2:体外培养CXCR3基因敲除小鼠分离出的C-ki+细胞,培养第十天发现,CXCR3基因敲除小鼠的C-kit+细胞数量远多于正常野生型,并且在培养十天后B细胞数量依旧明显少于正常野生型细胞。更进一步说明了CXCR3基因抑制干细胞增殖且向成熟B细胞分化的能力。3:我们将CXCR3基因敲除小鼠的全骨髓细胞竞争性移植至受体CD45.1小鼠中,发现CXCR3基因敲除小鼠组的外周血及骨髓中移植嵌合率、B淋巴细胞、T淋巴细胞以及Gr-1+CD11b+粒细胞的比例均低于正常野生组,造血干/祖细胞呢?使用5-氟尿嘧啶处理CXCR3基因敲除小鼠和正常野生型小鼠后,分别在第3,5,7,8,9,10天收集骨髓细胞并检测其造血恢复功能,其中B细胞分群明显,且对比野生型小鼠,CXCR3基因敲除型小鼠B细胞分化能力明显下降,CXCR3基因敲除小鼠中造血干祖细胞的数量低于正常野生型小鼠。4:我们最后将CXCR3基因敲除小鼠的造血干细胞分选出来,并使用微量细胞RNA提取并进行转录组水平测序,发现CXCR3基因敲除小鼠中与发育密切相关的Gpr55、Ubqln3等基因上调,而Gbx2、Emilin2等基因有了下调的变化。本研究首次探讨了CXCR3和G-CSFR基因在正常造血发生过程中的作用,揭示了CXCR3基因对造血干细胞的生长发育以及其分化的影响,后期将从转录组水平上探究该基因缺陷所造成的影响,为进一步揭示CXCR3如何调节造血干细胞的功能提供资料。
杨小玉[9]（2020）在《Ronin调控造血干细胞功能与机制研究》文中研究说明THAP11是THAP转录因子家族的成员,广泛参与多种生物学过程。Ronin是THAP11在小鼠中的同源基因,DNA序列同源性高达83%。据报道Ronin通过与转录辅助因子结合调控基因特异性表达,进而影响胚胎干细胞干性维持、线粒体电子传递链以及细胞代谢等生理过程。Ronin全身性敲除的小鼠胚胎在E7.0天时发育停滞,在心脏特异敲除Ronin则会导致小鼠心脏发育不全并且功能障碍,视网膜细胞条件敲除小鼠视网膜发育障碍以及斑马鱼Ronin缺失后导致颅面发育畸形等,表明Ronin对于多种器官的发育至关重要。但Ronin在造血系统中的研究尚未有报道,我们实验前期发现THAP11调节红系与巨核系分化平衡,并且发现在人CD34+细胞中敲低THAP11导致体内重建造血能力降低。在造血系统特异敲除Ronin导致小鼠胚胎期死亡,表明Ronin对小鼠胚胎造血系统发育具有重要调控作用。本研究利用Ronin条敲（Ronin conditional knockout,Ronin CKO）小鼠模型系统评估了Ronin对胚胎造血的调控作用。首先通过分析E13.5-E15.5天小鼠胚胎外周血红细胞数量、血红蛋白含量、红系发育标记物、红细胞脱核情况以及检测胎肝中红系相关基因表达等,明确Ronin对胚胎红系造血的影响。其次通过流式细胞术分析造血干/祖细胞及其他谱系的分布情况;利用集落形成实验检测Ronin CKO小鼠胎肝造血干细胞（HSC）体外功能,同时进行竞争、非竞争移植实验与救治急性放射病模型评估Ronin CKO小鼠胎肝造血干细胞体内功能;通过流式及Seahorse XF分析仪等检测Ronin CKO小鼠造血干细胞的细胞周期、凋亡、线粒体能量供应能力以及ROS情况。最后利用RNA-Seq检测Ronin CKO胎肝Lin-sca1+c-kit+（LSK）细胞中基因表达变化,并整合人CD34+细胞中THAP11ChIP-seq数据,预测Ronin调控造血干细胞功能的机制。本研究结果显示,造血系统缺失Ronin可导致小鼠胎肝红细胞数量明显减少、血红蛋白含量降低、红细胞脱核比例降低以及红系相关基因表达明显下调,表明贫血是胚胎死亡的直接原因,同时发现红系发育R3期数量明显降低,表明红系发育阻滞在R3时期。进一步发现Ronin CKO小鼠胚胎中全谱系血细胞减少,LSK细胞比例和数量增多,多能祖细胞（Multipotent progenitors,MPP）数量增多,而造血祖细胞（Hematopoietic progenitor cells,HPC）以及各定向祖细胞（CMP,GMP,MEP等）均数量降低,表明Ronin调控小鼠造血干祖细胞发育。对胎肝HSC功能分析发现,Ronin缺失后小鼠胎肝HSC细胞体外集落形成能力明显降低、体内重建造血能力丧失,救治急性放射病的能力明显降低,说明Ronin CKO小鼠胚胎HSC功能严重障碍。此外,我们分析细胞周期发现,Ronin CKO小鼠胚胎LSK细胞G0/G1期比例减少,S期比例明显增多,G2/M期比例减少,表明Ronin参与调控小鼠胎肝HSC的细胞周期。Ronin CKO小鼠胎肝造血干祖细胞呼吸方式偏向糖酵解、最大呼吸能力明显降低并且备用呼吸能力为0,表明Ronin调控小鼠胎肝HSPC细胞线粒体功能,ROS检测发现Ronin缺失后胎肝LSK细胞ROS量明显增多。Ronin条敲后LSK细胞基因表达差异主要集中在细胞周期、线粒体、甲基化调控、乙酰化以及造血作用相关基因等。将小鼠LSK细胞RNA-seq数据与ChIP-seq（人CD34+细胞、小鼠ES细胞等）数据整合分析发现,THAP11（Ronin）作为转录因子结合的DNA序列高度保守,高通量测序结果分析Ronin富集结合序列为-CTGGGAYKTGTAGT-（Y为G或A,K为T或A）。综上,Ronin是小鼠胚胎造血发育过程中必不可少的转录因子,可通过染色体上特异结合位点调控多种造血干细胞发育基因的表达。
王晶[10]（2020）在《脐血造血干细胞输注修复放射后小鼠造血系统损伤的实验研究》文中研究表明研究背景核放射物质与核辐射技术在人们社会生活中的应用越来广泛,但意外曝露于核辐射中或接触放射性物质,对人们的造成的危害也是巨大的。在医学治疗手段中放化疗可使患者的造血系统发生严重损害。造血干细胞对辐射尤为敏感,放射剂量为（0.7-10Gy）累及造血系统[1]造成骨髓型急性放射病（Acute radiation sickness,ARS）,主要表现为贫血、出血、感染,甚至死亡。轻中度骨髓型ARS可门诊随访、使用细胞因子、输血输液等治疗可缓解达到治愈。重度及极重度骨髓型ARS致死率极高,造血干细胞移植是治疗重度及极重度骨髓型ARS的重要选择。但选择供者及处理移植物抗宿主病（Graft versus host disease,GVHD）等对重度及极重度骨髓型ARS患者的治疗是不利的。及时降低或修复放射对人体造血系统的损伤,提高患者生存率,在治疗过程中尤为重要。造血微环境主要由骨髓中邻近造血干细胞的支持细胞（成骨细胞、内皮细胞、脂肪细胞、巨噬细胞及间充质干细胞等）构成[2-3],参与造血干细胞的自我更新、增殖和分化。研究表明:放射不仅对造血干细胞（HSCs,Hematopoietic stem cells）产生损伤,对HSCs赖以生存的造血微环境也造成一定影响[4]。目的脐血造血干细胞主要应用于恶性及非恶性血液系统疾病。脐血造血干细胞可以促进放射后造血干祖细胞的增殖分化,修复放射后骨髓造血微环境,本研究的目的探究人脐血造血干细胞在放射后造血系统损伤的小鼠模型中治疗效果。方法选取清洁的C57BL/6雄性小鼠54只,通过直线加速器照射,建立辐射损伤模型。随机分为放射未治疗组（A组）、放射脐血治疗组（B组）及放射脐血治疗加强组（C组）,B组在放射后12 h后通过尾静脉注射方式输注脐血造血干细胞（输注剂量5.52-6.07×106/kg）,C组小鼠分别在TBI后12h、24h进行脐血造血干细胞输注（每次输注剂量5.52-6,07×106/kg）。观察TBI后各组小鼠的存活率及观察有无脱毛、弓背、腹泻等放射损伤症状,通过病理学检查评估脐血造血干细胞治疗放射对脾脏、小肠、皮肤及骨髓损伤后的效果。同时对各组小鼠放射后在第1、3、7、11、14、17、21、28d检测外周血细胞计数分析,体外培养各组小鼠骨髓单个核细胞并计数,采用流式细胞术检测骨髓单个核中CD34+细胞的比例,并用CFU-GM克隆实验检测造血祖细胞短期的增殖能力。同时同时进行体外培养骨髓间充质干细胞,分别用油红o和茜素红s染色,并用实时定量PCR测定OCN、ALP、RUNX2、PPAR、CEBP-α以检测骨髓间充质干细胞向成骨细胞及脂肪分化的能力。使用流式细胞术分析骨髓中CD68、IL-10标记的巨噬细胞表型变化,用ELISA法检骨髓中白细胞介素-4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）的浓度变化,同时使用ELISA法分析骨髓微环境中粒-单细胞集落刺激因子（G-CSF）、干细胞因子（SCF）的表达。结果1、实验发现在放射后输注脐血造血干细胞显着升高小鼠的放射诱导的生存率:A的小鼠28d的存活率为0%,B组小鼠的存活率78%,而C组的存活率为90%,对比三组小鼠的存活率,具有统计学意义（P<0.05）。在TBI后A组小鼠的体重持续下降,第17d死亡时平均体重（11.21±0.24g）。B、C两组在TBI后第11d达到最低值分别为（14.75±0.27）g、（14.93±0.26）g,两者对比无统计学意义（P>0.05）。TBI后第3d,三组小鼠均出现脱毛,暴躁易攻击、弓背等症状。A组小鼠症状持续加重,因腹泻等原因死亡。B、C两组小鼠在第21d基本恢复正常,但仍有脱毛等症状。2、组织病理图片可示:第A组小鼠皮肤病理切片可见基底层细胞大量变性坏死,小肠黏膜结构坏死,结构完全消失,可见大量炎性细胞浸润,脾脏病理切片仅可见皮质,未见髓质及其他结构。B组小鼠皮肤可见基底层轻度增生,小肠部分可见肠绒毛纤维素样坏死,脾脏部分髓质分布不均匀。C组小鼠皮肤仅见少量细胞坏死,可见肠绒毛结构相对完整。,脾脏可见髓质分布均匀。取小鼠胸骨进行病理切片,A组小鼠骨髓腔内造血细胞明显减少,纤维化结构增多。B组小鼠骨髓腔内造血部分减少,可见恢复趋势。而C组小鼠可见幼稚红细胞及粒细胞再生。三者可见显着性对比。3、TBI后A、B、C三组小鼠外周血检测:白细胞计数在7d降至最低,三者进行对比具有统计学意义P<0.05。第28d检测B组为（9.12±1.22）×1012/L,C组为（10.14±1.31）×1012/L,两组对比差异有统计学意义（P<0.05）。血红蛋白计数在第14d降至最低,A、B、C组分别为（54.00±1.42）g/L、（70.67±4.50）g/L、（98.66±2.08）g/L,三组两两对比（P<0.01、P<0.01、P<0.05）。B、C两组小鼠血红蛋白计数在21d,两组对比P<0.05,具有统计学意义。对比A、B、C三组小鼠血小板计数,差异有统计学意义（P<0.05）,在第14天达到最低点,A、B、C组小鼠血小板计数最低值分别为（56.00±4.25）×1012/L、（141.33±22.36）×1012/L、（207.33±12.10）×1012/L。三组对比差异有统计学意义（P<0.05）。随后B、C两组在第28d基本恢复正常对比P>0.05。4、骨髓造血干/祖细胞的检测:检测骨髓单个核细胞计数,A、B、C三组进行两两对比差异均有统计学意义（P<0.01）,而对比7d、14d,三组小鼠骨髓单个核细胞的数量均有增长,但A组小鼠增长缓慢,两个时间点的计数不具有统计学意义（P>0.05）;B、C两组增长较快具有统计学意义（P<0.05,P<0.05）。在TBI后第7d,FCM检测CD34+细胞在骨髓单个核中所占的比例。A、B、C三组小鼠CD34+细胞在BM-MSNs中所占比例分别为0.57%、1.56%、1.90%,三者进行对比有显着差异,具有统计学意义（P<0.05）。在7d、14d,三组CFU-GM分别进行对比,差异具有显着差异（P<0.05,P<0.05）。5、TBI后第7、14d,A组小鼠BM-MSCs中的OCN、ALP、RUNX2基因表达水平分别为:（1.22±0.06）、（1.66±0.08）、（1.39±0.04）均低于B、C组两组小鼠BM-MSCs,差异有显着性意义（P<0.05）,C组小鼠BM-MSCs中OCN、ALP、RUNX2基因表达水平分别为（1.61±0.05）、（3.12±0.16）、（2.71±0.09）与B组小鼠BM-MSCs中OCN基因表达水平（1.44±0.07）、ALP（2.72±0.10）、RUNX2（2.61±0.33）相比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。茜素红染色后倒置显微镜下观察,A组小鼠BM-MSCs可见散在的橘红色矿化结节,而B、C组小鼠BM-MSC中橘黄色矿化结节呈片状分布,第14d,A组小鼠BM-MSC成骨矿化较差,只在部分细胞聚集处有红染现象。B、C两组可见较多均匀的红染矿化结节,未见明显差异。A组小鼠PPAR、CEBP-α基因的表达均高于B、C组中的表达,差异具有统计学意义（P<0.05）。7d、14d两个时间点对比,三组均具有统计学意义。油红O染色结果显示:7d,A组散布着橙红色的脂滴颗粒,B、C组可见散布较为均匀的脂滴颗粒,但C组较B组脂肪油滴数量减少。在14d,A组中红色脂肪油滴成簇状,几乎占满整个视野。B、C两组中的脂肪油滴差异较小,但对比第7d明显减少。6、分离提取BM中巨噬细胞,通过FCM检测第7、14d巨噬细胞中CD68、IL-10的表达。在相同的时间点,A、B、C三组的小鼠骨髓CD68的表达量进行对比差异具有统计学意义（P<0.05）。在相同的时间点,A、B、C三组的小鼠骨髓IL-10的表达量进行对比差异具有统计学意义（P<0.05）,三组小鼠IL-10的表达两两组分别进行相比较有统计学差异（P<0.01）。对比第7d、14d,三组均有所上升,对比三组的升高率差异具有统计学意义（P<0.05）。用ELISA法进行检测骨髓中IL-4的浓度,在相同时间点,A、B、C三组进行对比P<0.05具有统计学意义。ELISA检测骨髓中IFN-γ的浓度值,对比三组小鼠IFN-γ的变化值P<0.05。7、ELISA法检测骨髓细胞中G-CSF及SCF浓度变化值。相同时间点对比小鼠骨髓中G-CSF浓度,差异具有统计学意义（P<0.05）。三组小鼠骨髓中SCF的浓度值的变化P<0.05,具有统计学意义。结论一、通过输注脐血造血干细胞可以改善TBI后小鼠腹泻、脱毛等辐射损伤症状,提高辐射后小鼠的生存率。二、病理组织切片可示:脐血造血干细胞可以改善TBI后小鼠皮肤、小肠及脾脏等组织的损伤程度。三、通过实验提示脐血造血干细胞的输注使TBI后小鼠骨髓单个核细胞计数明显增多,骨髓单个核细胞中CD34+细胞的比例升高,CFU-GM结果说明脐血造血干细胞促进造血干祖细胞的增殖分化,从而加快造血系统的恢复。四、TBI后输注脐血造血干细胞可以提高BM-MSCs向成骨转化能力,降低其诱导成脂能力,加快造血干细胞归巢,促进造血系统的恢复。五、脐血造血干细胞减少TBI后骨髓巨噬细胞促炎性因子IFN-γ的释放,增加抗炎因子IL-4的释放,增强骨髓巨噬细胞对造血系统的双向调节作用,降低炎性因子对血细胞生成的影响。同时上调TBI后G-CSF及SFC的浓度,促进早期造血恢复,从而缓解TBI对骨髓造血微环境的破坏。
二、自身外周造血干细胞移植时粒系集落刺激因子的应用研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、自身外周造血干细胞移植时粒系集落刺激因子的应用研究（论文提纲范文）
（1）粒细胞集落刺激因子受体调控造血干细胞功能和慢性髓系白血病发病进程的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1 造血干细胞 |
| 1.1 造血干细胞概述 |
| 1.2 造血干细胞与调控因子 |
| 2 GCSF-GCSFR信号通路概述 |
| 2.1 粒细胞集落刺激因子及其受体概述 |
| 2.2 粒细胞集落刺激因子动员造血干细胞 |
| 2.3 GCSF-GCSFR信号通路与血液病 |
| 3 慢性髓系白血病 |
| 4 本研究的目的及意义 |
| 第2章 Csf3r缺失对造血细胞影响的生物学分析 |
| 前言 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 小鼠 |
| 1.1.2 试剂及配方 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 小鼠组织DNA获取及PCR鉴定 |
| 1.2.2 小鼠外周血采集 |
| 1.2.3 小鼠骨髓单细胞悬液的制备 |
| 1.2.4 小鼠脾脏单细胞悬液的制备 |
| 1.2.5 台盼蓝染色计数 |
| 1.2.6 流式抗体细胞染色 |
| 1.2.7 统计学分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 Csf3r~(-/-)小鼠基因型鉴定 |
| 2.2 流式分析Csf3r~(-/-)小鼠造血细胞的生物学表型 |
| 2.2.1 Csf3r~(-/-)对造血干/祖细胞的影响 |
| 2.2.2 Csf3r~(-/-)对造血谱系细胞的影响 |
| 2.2.3 敲除Csf3r基因促使B220+细胞群在骨髓中累积 |
| 3 讨论 |
| 第3章 Csf3r~(-/-)HSPCs功能分析 |
| 前言 |
| 1 实验材料及方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 小鼠 |
| 1.1.2 试剂、配方及设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 小鼠骨髓单细胞悬液的制备 |
| 1.2.2 克隆集落形成实验 |
| 1.2.3 造血干/祖细胞增殖率检测 |
| 1.2.4 验证Csf3r~(-/-)小鼠BM Niche的骨髓移植实验 |
| 1.2.5 竞争性骨髓移植实验 |
| 1.2.6 非竞争性骨髓移植实验 |
| 1.2.7 流式抗体细胞染色 |
| 1.2.8 统计学分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 Csf3r~(-/-)损伤造血干/祖细胞的体外克隆集落形成能力 |
| 2.2 Csf3r~(-/-)阻滞造血干祖细胞增殖能力 |
| 2.3 Csf3r基因缺失的骨髓微环境支持造血干细胞长期重建造血的能力 |
| 2.4 敲除Csf3r基因损伤造血干细胞长期重建造血的能力 |
| 2.5 非竞争性骨髓移植试验 |
| 3 讨论 |
| 第4章 Csf3r基因对CML发病进程的作用 |
| 前言 |
| 1 实验材料及方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 细胞及质粒 |
| 1.1.2 试剂及配方 |
| 1.1.3 实验设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞培养 |
| 1.2.2 质粒抽提及鉴定 |
| 1.2.3 病毒包被 |
| 1.2.4 BCR-ABL1 白血病细胞株的构建 |
| 1.2.5 建立CML小鼠模型 |
| 1.2.6 慢性髓系白血病小鼠的病理学分析 |
| 1.2.7 发病小鼠骨髓、脾脏和外周血的流式分析 |
| 1.2.8 统计学分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 Migr1-BCR-ABL1-GFP质粒鉴定 |
| 2.2 CML小鼠模型发病进程的研究 |
| 2.3 CML小鼠造血组织和器官的流式分析 |
| 3 讨论 |
| 第5章 总结与展望 |
| 1 总结 |
| 2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（2）单细胞水平解析体外扩增对脐带血造血干细胞自我更新和分化的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1.细胞因子在HSC体外扩增中的研究现状 |
| 2.小分子化合物扩增HSC的研究现状 |
| 3.调节HSC自我更新的信号通路 |
| 4.单细胞RNA测序技术在HSC研究中的应用现状 |
| 第一章 脐带血造血干细胞体外扩增体系的建立 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 USK小分子组合体外培养增加了HSPC和LT-HSC 的比例和数量 |
| 1.2.2 USK体外培养促进了HSPC向NK细胞分化 |
| 1.2.3 USK体外培养维持了HSPC向各系祖细胞分化的能力 |
| 1.3 讨论 |
| 第二章 动物体内评价扩增后HSC的植入和自我更新能力 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 移植低数量级USK扩增后的细胞在首次移植早期的植入能力增加 |
| 2.2.2 USK扩增后的细胞在二次移植NPG小鼠体内的植入未见优势 |
| 2.2.3 USK扩增后的细胞在首次移植小鼠体内SRC数量增加 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 单细胞水平解析体外扩增体系对HSC功能的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 scRNA-seq数据质控结果 |
| 3.2.2 脐带血来源的CD34+细胞无监督聚类分群 |
| 3.2.3 scRNA-seq揭示了体外扩增体系对HSC谱系分化的影响 |
| 3.2.4 USK体外培养促进了HSPC特异性基因的表达 |
| 3.2.5 USK体外培养前后差异性基因的表达 |
| 3.2.6 scRNA-seq揭示了影响HSC自我更新的关键基因和信号通路 |
| 3.2.7 scRNA-seq揭示了调控HSC自我更新和分化的关键分子 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 造血干细胞体外扩增策略及分子机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（3）地中海贫血症红细胞谱系发育分化基因筛查及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 |
| 1.2 地中海贫血的定义和分类 |
| 1.2.1 α地中海贫血 |
| 1.2.2 β地中海贫血 |
| 1.3 地中海贫血的治疗现状和预防 |
| 1.3.1 常规疗法 |
| 1.3.2 造血干细胞移植 |
| 1.3.3 基因活化疗法 |
| 1.3.4 地中海贫血预防现状 |
| 1.4 造血调控与造血干细胞的研究 |
| 1.4.1 血细胞发生的基本概念 |
| 1.4.2 造血细胞发育阶段和鉴别方法 |
| 1.4.3 早期造血的三个阶段 |
| 1.4.4 早期造血胎儿红细胞生成和血红蛋白合成 |
| 1.4.5 多能造血干细胞维持自我更新的分子基础 |
| 1.4.6 造血干细胞多态性 |
| 1.4.7 造血祖细胞多态性 |
| 1.4.8 造血干细胞和祖细胞的主要区别 |
| 1.4.9 造血干细胞和造血祖细胞表面标志 |
| 1.4.10 造血干细胞的体外和体内检测方法 |
| 1.4.11 造血干细胞和祖细胞富集方法 |
| 1.4.12 造血干细胞移植问题 |
| 1.4.13 造血干细胞体外扩增问题 |
| 1.5 造血调控的关键:细胞因子 |
| 1.5.1 最早研究的细胞因子:集落刺激因子 |
| 1.5.2 作用于早期造血细胞的细胞因子 |
| 1.5.3 其他类型参与造血调控的细胞因子 |
| 1.5.4 与红系分化相关的调控因子 |
| 1.5.5 转录因子在造血调控中的作用 |
| 1.6 红细胞系统发育以及相关调控 |
| 1.6.1 红系祖细胞阶段 |
| 1.6.2 红系前体细胞阶段 |
| 1.6.3 红细胞脱核和释放成熟阶段 |
| 1.6.4 红细胞生成的调控机制 |
| 1.7 本文的主要研究内容 |
| 第2章 实验方法与材料 |
| 2.1 样本来源 |
| 2.2 主要试剂和耗材 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 羊水细胞培养 |
| 2.4.2 细胞冻存 |
| 2.4.3 细胞计数 |
| 2.4.4 脐带血分离单个核细胞 |
| 2.4.5 磁珠分选CD34阳性细胞 |
| 2.4.6 流式细胞仪分析和分选不同阶段的红细胞 |
| 2.4.7 体外造血集落检测 |
| 2.4.8 WES数据分析 |
| 第3章 地中海贫血携带者基因型调查研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 羊水细胞体外培养 |
| 3.3 地中海贫血携带者外显子测序结果 |
| 3.3.1 地中海贫血携带者临床和基因分类 |
| 3.3.2 全外显子组测序结果和数据分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 脐带血造血干细胞体外诱导分化研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 脐带血造血干细胞的分离纯化和鉴定 |
| 4.3 脐带血造血干细胞体外诱导分化和造血集落检测 |
| 4.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）血必净注射液调节脓毒症造血干细胞功能的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 ABSTRACT 英文缩略词 第一部分 文献综述 |
| 综述一 脓毒症免疫功能紊乱的机制研究进展 |
| 1 概述 |
| 2 免疫应答 |
| 3 髓源抑制性细胞(MDSC) |
| 4 造血干细胞(HSC)异常增殖 |
| 5 总结和展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 血必净注射液治疗脓毒症的作用机制研究进展 |
| 1 概述 |
| 2 调控炎症反应 |
| 3 调节免疫功能 |
| 4 改善凝血功能 |
| 5 其他 |
| 6 总结与展望 |
| 参考文献 前言 第二部分 实验研究 |
| 实验一 血必净注射液对正常小鼠骨髓细胞分化的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 血必净注射液对脓毒症小鼠骨髓细胞和免疫细胞分化的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 第三部分 临床研究 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 结语 参考文献 致谢 在学期间主要研究成果 |
（5）儿童骨髓增生异常综合征临床特点和预后 ——单中心临床病例分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 研究对象与方法 |
| 一、病例选择 |
| 二、研究方法 |
| 三、预后积分系统评价 |
| 四、治疗方法 |
| 五、疗效判断标准及随访 |
| 六、统计学方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 儿童骨髄增生异常综合征（MDS)的诊断及治疗 |
| 参考文献 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（6）低剂量ATG联合低剂量PTCy预防GvHD的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 低剂量抗胸腺细胞球蛋白(ATG)联合移植后低剂量环磷酰胺(PTCy)预防单倍体外周血造血干细胞联合脐血移植后移植物抗宿主病 |
| 绪论 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 低剂量抗胸腺细胞球蛋白(ATG)联合移植后低剂量环磷酰胺(PTCy)与标准剂量ATG预防单倍体外周血造血干细胞联合脐血移植移植物抗宿主病的回顾性研究 |
| 绪论 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 低剂量抗胸腺细胞球蛋白(ATG)联合移植后低剂量环磷酰胺(PTCy)预防无关供体全相合外周血造血干细胞移植后移植物抗宿主病 |
| 绪论 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文小结 |
| 综述 移植后大剂量环磷酰胺(PTCy)预防异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 科研成果 |
（7）1型糖尿病肠道微生态学变化及相关临床征象的系列研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 1型糖尿病模型大鼠肠道微生态学变化及机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 1型糖尿病合并中性粒细胞减少症临床特征与机制研究 |
| (一)儿童1型糖尿病合并中性粒细胞减少症临床报道 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| (二)1型糖尿病模型大鼠中性粒细胞变化及机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 |
| 综述一 糖尿病与肠道微生态学研究进展 |
| 综述二 糖尿病肠道内分泌激素与肠道微生态学相关性研究进展 |
| 综述三 糖尿病与G-CSF、GM-CSF关联性研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）趋化因子受体Ⅲ的缺失对于造血系统以及造血重建的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 造血干细胞概述 |
| 1.2 造血干细胞与骨髓微环境 |
| 1.3 CXCR3 基因概述 |
| 1.4 G-CSFR基因概述 |
| 1.5 JAK-STAT信号通路的作用 |
| 1.6 本研究的目的及意义 |
| 第2章 CXCR3和G-CSFR在小鼠造血系统中的作用 |
| 2.0 前言 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验试剂及耗材 |
| 2.1.3 实验设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物组织DNA提取(NaOH提取法) |
| 2.2.2 PCR鉴定基因敲除小鼠表型 |
| 2.2.3 小鼠骨髓单细胞悬液的制备 |
| 2.2.4 小鼠外周血单细胞悬液的制备 |
| 2.2.5 台盼蓝染色计数 |
| 2.2.6 流式抗体染色 |
| 2.2.7 流式分析仪操作 |
| 2.2.8 流式细胞术分析外周血与骨髓中造血细胞的谱系分化 |
| 2.2.9 流式细胞术分析骨髓中造血干/祖细胞 |
| 2.2.10 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 基因敲除条带分析 |
| 2.3.2 CXCR3 基因敲除对B细胞以及粒细胞的影响 |
| 2.3.3 CXCR3 基因缺失对造血干/祖细胞的影响 |
| 2.3.4 G-CSFR和 CXCR3&G-CSFR双缺失对下游细胞分化的影响 |
| 2.3.5 CXCR3&G-CSFR双基因缺失对造血干/祖细胞的影响 |
| 2.3.6 讨论与分析 |
| 第3章 C-kit细胞中CXCR3 基因的缺失对造血干细胞体外扩增的影响 |
| 3.0 前言 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验小鼠 |
| 3.1.2 实验试剂及耗材 |
| 3.1.3 实验设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 实验试剂的配置 |
| 3.2.2 C57BL/6J小鼠骨髓单细胞悬液的制备 |
| 3.2.3 C-kit细胞磁珠分选 |
| 3.2.4 台盼蓝染色计数 |
| 3.2.5 C-kit细胞体外培养 |
| 3.2.6 流式分析操作 |
| 3.2.7 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 培养细胞扩增数量对比 |
| 3.3.2 流式细胞术分析CXCR3 缺失的C-kit细胞Lineage分化影响 |
| 3.3.3 讨论与分析 |
| 第4章 CXCR3 基因的缺失对小鼠造血重建的影响 |
| 4.0 前言 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验小鼠 |
| 4.1.2 实验试剂及耗材 |
| 4.1.3 实验设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 小鼠骨髓单细胞悬液的制备 |
| 4.2.2 细胞计数 |
| 4.2.3 竞争性移植实验 |
| 4.2.4 小鼠骨髓及外周血细胞采集 |
| 4.2.5 小鼠骨髓及外周血细胞流式分析 |
| 4.2.6 5-氟尿嘧啶化疗处理小鼠 |
| 4.2.7 小鼠骨髓及外周血细胞采集 |
| 4.2.8 小鼠骨髓及外周血细胞流式分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 CXCR3 缺失对放疗后造血重建的影响 |
| 4.3.2 CXCR3 缺失对5-FU化疗后造血重建的影响 |
| 4.3.3 讨论与分析 |
| 第5章 CXCR3 缺失影响造血干细胞扩增的分子机制的研究 |
| 5.0 前言 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验小鼠 |
| 5.1.2 实验试剂及耗材 |
| 5.1.3 实验设备 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 流式分选造血干细胞 |
| 5.2.2 微量RNA提取 |
| 5.2.3 转录组测序 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 CXCR3 基因的缺失对造血干细胞转录组水平的影响 |
| 5.3.2 讨论与分析 |
| 第6章 结论与展望 |
| 参考文献 |
（9）Ronin调控造血干细胞功能与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1.前言 |
| 1.1 小鼠胚胎造血发育与调控 |
| 1.2 红细胞发育与调控 |
| 1.3 Ronin简介 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验试剂和试剂盒 |
| 2.1.3 实时荧光定量PCR所用引物 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.1.5 实验抗体 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 小鼠交配策略 |
| 2.2.2 小鼠胚胎基因型快速鉴定 |
| 2.2.3 Western Blot检测Ronin蛋白表达 |
| 2.2.4 胚胎外周血血象分析 |
| 2.2.5 胎肝细胞HSPC分析 |
| 2.2.6 qPCR检测相关基因表达 |
| 2.2.7 胎肝细胞计数 |
| 2.2.8 集落形成能力检测 |
| 2.2.9 胎肝细胞竞争性移植实验 |
| 2.2.10 胎肝细胞非竞争性移植实验 |
| 2.2.11 条件敲除小鼠胎肝细胞救治急性放射病能力检测 |
| 2.2.12 受体小鼠外周血嵌合率分析 |
| 2.2.13 凋亡检测 |
| 2.2.14 细胞周期分析 |
| 2.2.15 线粒体压力测试 |
| 2.2.16 ROS检测 |
| 2.2.17 RNA-seq样品制备 |
| 2.2.18 CD34~+细胞ChIP-seq |
| 2.2.19 实验数据处理与统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 Ronin造血系统敲除小鼠因贫血发生胚胎期死亡 |
| 3.1.1 Ronin造血系统敲除小鼠的制备与鉴定 |
| 3.1.2 Ronin造血系统敲除小鼠因贫血发生胚胎期死亡 |
| 3.1.3 Ronin敲除导致胚胎期红系发育障碍 |
| 3.2 Ronin调控小鼠胚胎造血干/祖细胞发育 |
| 3.2.1 Ronin 造血系统敲除小鼠巨噬细胞中性粒细胞数量减少 |
| 3.2.2 Ronin造血系统敲除小鼠HSPC发育异常 |
| 3.4 Ronin造血系统敲除小鼠胚胎HSC功能障碍 |
| 3.4.1 Ronin敲除导致胎肝HSPC体外集落形成能力降低 |
| 3.4.2 Ronin敲除导致小鼠胚胎HSC造血重建能力缺失 |
| 3.4.3 Ronin敲除的HSC丧失救治急性放射病的能力 |
| 3.5 Ronin造血系统敲除小鼠HSPC细胞周期改变 |
| 3.5.1 Ronin敲除不引起HSC凋亡 |
| 3.5.2 Ronin敲除导致HSPC细胞S期增多 |
| 3.6 Ronin造血系统敲除小鼠胎肝HSPC线粒体功能障碍 |
| 3.7 RNA-Seq分析Ronin调控HSC功能相关基因 |
| 3.8 利用ChIP-seq鉴定THAP11 在人脐带血CD34~+细胞中结合的基因 |
| 3.8.1 建立CD34~+细胞THAP11-ChIP实验体系 |
| 3.8.2 THAP11 ChIP-seq数据分析 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 附录 个人简历 |
| 致谢 |
| 综述 造血干细胞功能的研究进展 |
| 参考文献 |
（10）脐血造血干细胞输注修复放射后小鼠造血系统损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略语 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 实验方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、数据处理 |
| 第三章 实验结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 文献综述 造血干细胞治疗骨髓型急性放射病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、自身外周造血干细胞移植时粒系集落刺激因子的应用研究（论文参考文献）
- [1]粒细胞集落刺激因子受体调控造血干细胞功能和慢性髓系白血病发病进程的研究[D]. 张中豪. 上海师范大学, 2021(07)
- [2]单细胞水平解析体外扩增对脐带血造血干细胞自我更新和分化的影响[D]. 文瑞婷. 军事科学院, 2020(02)
- [3]地中海贫血症红细胞谱系发育分化基因筛查及机制研究[D]. 杨最. 哈尔滨工业大学, 2020(01)
- [4]血必净注射液调节脓毒症造血干细胞功能的作用机制研究[D]. 王君. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]儿童骨髓增生异常综合征临床特点和预后 ——单中心临床病例分析[D]. 郑夏. 苏州大学, 2020(02)
- [6]低剂量ATG联合低剂量PTCy预防GvHD的研究[D]. 杨隽. 上海交通大学, 2020
- [7]1型糖尿病肠道微生态学变化及相关临床征象的系列研究[D]. 崔洁媛. 河北医科大学, 2020(01)
- [8]趋化因子受体Ⅲ的缺失对于造血系统以及造血重建的影响[D]. 杨子洵. 上海师范大学, 2020(07)
- [9]Ronin调控造血干细胞功能与机制研究[D]. 杨小玉. 安徽医科大学, 2020(02)
- [10]脐血造血干细胞输注修复放射后小鼠造血系统损伤的实验研究[D]. 王晶. 锦州医科大学, 2020(05)
标签：造血干细胞论文; 糖尿病论文; 骨髓增生异常综合征论文; 细胞分化论文; 骨髓细胞论文;