一、转化生长因子β_1与肝纤维化（论文文献综述）
唐建宏,张霓霓,黄桂林,郎家婵,崔田宁,骆勤亮[1]（2022）在《间充质干细胞源性外泌体在组织纤维化修复中的作用》文中认为背景:间充质干细胞替代疗法一直被认为是治疗纤维化疾病的有效方法之一,但安全性受到质疑,而外泌体是间充质干细胞的旁分泌产物,与间充质干细胞的疗效相似,且作为一种无细胞治疗方法,目前已成为研究者们关注的重点。目的:将间充质干细胞源性外泌体在肺、肝、心脏、肾纤维化修复中的作用进行总结,对外泌体用于修复放射性唾液腺纤维化进行展望。方法:在PubMed数据库中以"exosomes,mesenchymal stem cells,tissue fibrosis,radiation salivary glands,repair"为关键词进行相关文献检索,在CNKI数据库中以"外泌体,间充质干细胞,组织纤维化,放射性唾液腺,修复"为关键词进行检索,通过快速浏览文章题目及摘要进行筛选,排除与主题关系不密切的文章,最终筛选出46篇文献进行精读并撰写。结果与结论:外泌体主要由脂质、蛋白质、核酸等构成,具有细胞通讯、抗细胞凋亡、抗炎、抗纤维化等作用,其提取方法多样,各具优劣势。间充质干细胞源性外泌体在修复肺、肝、心脏、肾纤维化损伤疾病中起到重要作用,但运用于修复放射性唾液腺损伤引起的组织纤维化研究较少,值得深入研究和探索。
徐静,严永敏,蔡梦洁[2]（2022）在《miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化》文中认为背景:肝星状细胞活化分泌大量胶原是肝纤维化进展的主要因素,miRNA在肝星状细胞活化、凋亡等方面发挥着重要作用,miR-373调控肝星状细胞胶原分泌的作用及机制尚不清楚。目的:探讨miR-373靶向调控转化生长因子βⅡ型受体在肝星状细胞胶原分泌中的作用。方法:（1）建立Bal b/c小鼠肝纤维化模型,Masson法测定肝组织胶原,采集小鼠血清样本,提取血清总RNA,qRT-PCR定量分析小鼠mmu-miR-291a-3p（人hsa-miR-373-3p的同源序列）水平。免疫组化检测肝组织转化生长因子βⅡ型受体和αSMA表达;（2）TargetScan软件预测miR-373的靶基因转化生长因子βⅡ型受体,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-373调控转化生长因子βⅡ型受体启动子的活性;（3）用25,50 nmol/L miR-373 mimics转染人肝星状细胞（LX-2）过表达miR-373,并以转染随机miRNA序列做对照,采用Western blot和免疫荧光检测转化生长因子βⅡ型受体和成纤维细胞激活蛋白的蛋白表达。实验方案经江苏大学实验动物伦理委员会批准（批准号为UJS-IACUCAP-2020033127）。结果与结论:（1）健康对照组相比,肝纤维化组小鼠血清mmu-miR-291a-3p水平明显降低（P <0.001）,肝组织胶原合成显着增加;（2）肝纤维化组织转化生长因子βⅡ型受体和αSMA共表达显着增加;（3）miR-373显着抑制了转化生长因子βⅡ型受体启动子的活性（P <0.01）,miR-373过表达显着抑制LX-2的转化生长因子βⅡ型受体（P <0.05）和成纤维细胞激活蛋白（P <0.01）的蛋白表达;（4）结果说明,miR-373通过调控转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化和肝组织胶原沉积。
白佳萌,刘光伟,谢露,毛垚耀,何惠昌,王春景[3]（2022）在《间充质干细胞及其外泌体在肝再生领域的应用》文中提出背景:已有许多研究表明了间充质干细胞在疾病治疗和再生医学领域具有广阔的应用前景,另外,除了间充质干细胞本身,来源于间充质干细胞的外泌体也成为研究者关注的热点,有望成为新的疾病诊疗方法。目的:综述间充质干细胞及其外泌体在肝再生领域中的应用、挑战及前景,深入了解其发挥作用的治疗机制。方法:以"mesenchymal stem cells,MSCs,exosomes,liver,regenerate""间充质干细胞,外泌体,肝,再生"为检索词,检索PubMed数据库、万方数据库、CNKI数据库中发表的相关文献,通过筛选整理,排除与研究内容无关的文献、重复性研究和过早发表的文献,最终保留85篇文献进行综述。结果与结论:通过对现有的研究总结了间充质干细胞及其外泌体能够发挥肝脏保护作用并延缓疾病进展,具体机制包括减少肝细胞凋亡、调节自噬、改善炎症反应、改善氧化应激、抑制纤维化、促进血管生成等,可作为肝损伤相关疾病治疗研究的新方向。
刘勇波,陈宗波,陈燕如,张辉,游永强,周泳威,罗福权[4]（2021）在《HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清中TGF-β1、MAO、透明质酸水平与HBV-DNA载量的相关性分析》文中研究说明目的探讨乙型肝炎E抗原（HBeAg）阴性慢性乙型肝炎（CHB）患者血清中转化生长因子β1（TGF-β1）、单胺氧化酶（MAO）、透明质酸（HA）水平与乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）载量的相关性, 并研究联合检测TGF-β1、MAO、HA、HBV-DNA对HBeAg阴性CHB患者早期肝功能损害的临床意义。方法选取2017年4月至2018年5月于南海经济开发区人民医院治疗的HBeAg阴性CHB患者128例作为试验组, 男73例, 女55例, 年龄（33±14.6）岁;另外选取同期在南海经济开发区人民医院体检的100例健康体检者作为对照组, 男56例, 女44例, 年龄（33±14.8）岁。根据HBV-DNA水平分成3组, HBV-DNA>106拷贝/L为HBV高复制组, HBV-DNA在103～106拷贝/L为HBV中复制组, HBV-DNA<103拷贝/L为低复制组, 然后分别检测高、中、低3个复制组中的TGF-β1、MAO、HA水平, 并作对比分析。结果试验组血清TGF-β1、MAO、HA、HBV-DNA水平及阳性率均高于对照组（均P<0.05）。不同HBV-DNA复制组间TGF-β1、MAO、HA水平比较, 差异均有统计学意义（均P<0.05）, 且TGF-β1、MAO、HA水平均与HBV-DNA水平呈显着正相关, 其中TGF-β1与HBV-DNA水平的相关性最高（r=0.73）。联合检测TGF-β1、MAO、HA、HBV-DNA的诊断灵敏度为89.1%, 特异度为72.7%, 阳性预测值为76.5%, 阴性预测值为87.0%, 约登指数为0.62, 其中灵敏度、阴性预测值、约登指数均比单独检测高, 特异度低于单项检测。结论 HBeAg阴性CHB患者血清中TGF-β1、MAO、HA水平与HBV-DNA载量具有很好的相关性, 联合检测4项指标提高了HBeAg阴性CHB患者早期肝损害的检出率, 有利于临床医生对HBeAg阴性CHB患者肝纤维化早期诊断, 并为病情监测提供可靠的实验室依据。
李昕宇[5]（2021）在《小鼠Kupffer细胞的转分化研究》文中研究说明研究背景及目的:KCs是肝脏长期驻留的巨噬细胞,在慢性肝损伤期间KCs被激活并分泌促炎症和促纤维化细胞因子,作用于HSCs转分化形成肌成纤维细胞,最终产生胶原沉积,学术界广泛认可,HSCs是肝脏中胶原沉积的主要来源,也是肝纤维化病理过程的核心环节,而KCs除了能辅助HSCs参与纤维化以外,是否有其他途径产生胶原沉积尚未阐明。HSCs转分化成为肌成纤维细胞是肝纤维化的关键步骤,除了HSCs转分化以外,肝脏中还存在大量其他细胞转分化的现象,例如有实验研究证明了动物模型中肝细胞和胆管细胞相互转化。在肝外组织中的巨噬细胞,例如皮肤、心肌、肾脏等组织中巨噬细胞可更进一步转分化为纤维细胞并分泌胶原蛋白,和伤口损伤愈合修复密切相关。通过上述类比,提出KCs可以发生转分化的猜想,KCs转分化为类成纤维细胞后可能产生胶原沉积,甚至有可能参与肝组织损伤修复乃至肝纤维化形成。KCs的转分化理论提供了不同于传统纤维化理论着眼于HSCs的不同视角,把肝硬化的过程视为河流,HSCs的转分化可视作主干道,而KCs则可作为支流,提供了未来肝纤维化治疗的新思路和新靶点,同时给成纤维细胞提供了新的来源,完善了对肝纤维化的认识。材料和方法:首先本研究在两个不同的体外实验模型中进行平行实验:体外肝脏非实质细胞培养和精密肝切片培养。具体步骤如下:（1）构建特异性追踪KCs谱系的动物模型Emr1Cre+/-::Ribo Tag+/-的小鼠追踪KCs谱系。（2）分离KCs后进行体外培养。（3）使用精密肝切片培养技术进行精密肝片培养。（4）使用免疫荧光成像分析培养后的KCs表达的蛋白。（5）利用多聚体免疫共沉淀富集KCs,提取RNA,合成c DNA。（6）实时定量PCR（Fludigm）。其次在小鼠肝切片中进行胶原沉积研究,使用氯膦酸盐脂质体耗竭KCs,进行精密肝切片培养,对肝切片进行Masson三色染色和RT-PCR基因表达分析。最后使用IL1r敲除小鼠和Nlrp3基因敲除小鼠,使用精密肝切片培养技,实时定量PCR分析基因表达,使用LDH检测套盒定量分析肝片中细胞死亡情况。结果:（1）随着体外培养时间的推移,体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均发生:KCs的特征基因以及调控其表达的转录因子表达下调。（2）随着体外培养时间的推移,体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均发生:KCs中纤维化相关的基因以及调控其表达的转录因子表达上调。上述效应在非实质细胞培养和肝组织切片培养之间是高度一致的。（3）清除KCs后肝切片中胶原沉积减少。（4）Il-1r敲除小鼠的肝片中细胞死亡相关基因表达与对照组没有显着差异。（5）Nlrp3敲除小鼠肝片中细胞死亡相关基因表达与对照组没有显着差异。结论:KCs转分化在体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均有发生。KCs的转分化在体外培养中相对保守反应,转分化为类似成纤维细胞样的细胞,可以分泌胶原沉积相关蛋白。
张冰冰,梁健,邓鑫,张艳培,徐粤娟[6]（2021）在《中医药抗肝纤维化作用机制研究进展》文中进行了进一步梳理肝纤维化是由于各种原因（如各种慢性肝病、乙醇中毒等）引起肝细胞受损后分泌多种细胞因子,从而刺激肝星状细胞（HSC）活化并转化为成纤维细胞（MFB）,最终使肝内细胞外基质（ECM）的累积过度,导致纤维瘢痕形成的病理过程[1]。据研究,肝纤维化的进程是可以延缓甚至逆转的,早期有效地控制肝纤维化的进展可降低肝硬化甚至是肝癌的发病率[2]。近年来研究者发现中药在逆转肝纤维及抑制肝纤维化进展方面有其独特优势,并且大量研究已在机制上肯定了其作用。因
王晓玲[7]（2021）在《β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1转录因子调控肝星状细胞改善肝脏纤维化的机制研究》文中研究表明肝纤维化是肝脏组织急性或慢性细胞损伤引起的可逆性伤口愈合反应,反映了肝脏修复和瘢痕形成之间的平衡[1]。目前肝脏慢性纤维化疾病的总负担不断增长,全世界每年约有200万人因此死亡[2,3]。然而,尽管对纤维化病理生理机制取得了实质性进展,但在确定抗纤维化靶点并转化为有效治疗方面仍为空白[3,4],因此,减轻或逆转肝纤维化的研究具有直接的临床意义[5]。肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）作为肝纤维化发病机制的主要调节因子,旁分泌或自分泌转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）,调控肝纤维化过程中胶原纤维等细胞外基质的合成、沉积、降解[4,6,7]。近期研究表明,TGF-β/SMAD信号通路中,SMADs需要与其它DNA结合转录因子相互作用,即β-catenin与T细胞因子（T cell factor,TCF）、叉形头转录因子O1（Forkhead box O1,FOXO1）和乏氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1,HIF-1）相互作用,调控TGF-β/SMAD信号通路,其相对活性取决于结合β-catenin的“转录伴侣”[8]。当β-catenin与TCF结合时,促进细胞增殖和纤维化[9],然而在与FOXO1结合后,发挥抗增殖、促凋亡、促进细胞在氧化应激下的存活[10,11]。在人类结肠癌细胞中发现FOXO1与TCF竞争结合β-catenin[12],在肾脏纤维化的研究中发现[8],β-catenin/FOXO1转录复合物形成可以促进TGF-β诱导的调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）foxp3的表达[8,13],发挥抗炎作用,然而β-catenin不同“转录伴侣”在HSCs及其肝脏纤维化中的作用仍不清楚。因此,本研究从细胞、动物、人体多水平,正向、反向多角度探讨TGF-β信号通路转录因子β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1调控HSCs增殖活化的作用机制,并在体内实验中探讨转录因子复合物β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1对HSCs增殖活化、细胞外基质沉积、肝脏组织免疫调节的作用及其机制,发现转录因子复合物TCF、FOXO1竞争结合β-catenin,可以调节TGF-β促纤维化生物学效应开关,导致不同的生物事件结局,为精准靶向抑制肝脏纤维化的临床研究提供基础及思路。目的:1.结合细胞水平和动物水平实验,阐明肝脏纤维化过程中,TGF-β信号通路中β-catenin与不同“转录伴侣”FOXO1、TCF形成的不同转录因子复合物在肝纤维化病程中的作用机制;研究通过调控HSCsβ-catenin转录因子复合物,启动TGF-β多重生物学效应开关,导向不同生物学事件结局的思路在改善肝脏纤维化中的应用。2.在人体肝纤维化组织中分析β-catenin与不同“转录伴侣”FOXO1、TCF形成的不同转录复合物β-catenin/FOXO1、β-catenin/TCF与纤维化进展之间的关系,丰富肝纤维化疾病进展的病理生理基础,为肝纤维化的治疗提供了新的思路和策略,为进一步探索其在肝脏以及其它器官纤维化治疗中的临床应用提供支撑。方法:1.体外实验:人肝星状细胞LX2体外培养,分对照组、TGF-β诱导分化组、TGF-β诱导分化+ICG-001干预组、TGF-β诱导分化+ICG-001+AS1842856组通过Western Blotting、RT-q PCR检测各组细胞外基质α-SMA和COL-I水平以及HSCs细胞周期、氧化应激功能,应用Western Blotting、Co IP、PLA方法分析HSCs活化后,各组β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1转录复合物水平变化。2.体内实验:根据肝纤维化的不同病因,构建四氯化碳（CCl4）和胆总管结扎（BDL）两种肝纤维化小鼠模型,观察小鼠肝脏外观,速率法检测丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶,同时对肝纤维化不同时期进行肝脏组织切片、染色,提取RNA及逆转录、RT-q PCR,分析肝纤维化小鼠模型不同时期的纤维化以及炎症因子水平,判断不同模型的干预时间;采用邻位连接技术（PLA）分析肝纤维化不同时期β-catenin转录复合物变化规律。3.在以上实验的基础上,对两种肝纤维化小鼠模型应用β-catenin/TCF抑制剂ICG-001进行干预,分别设立对照组、模型组、ICG-001干预组,观察小鼠肝脏外观,计算肝重、体重比,应用小鼠肝酶血清学水平检测、组织学染色、免疫组化、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和1型胶原蛋白（COL-1）RNA表达水平检测相结合的方法,评价ICG-001干预后是否抑制小鼠肝脏纤维化,并应用ELISA方法检测了BDL各组肝脏组织炎症因子IL-10、IL-17、TNF-α、IL-6水平。4.为正反两个角度进一步探索TGF-β信号通路转录因子复合物在抑制肝脏纤维化中的作用机制,BDL小鼠肝纤维化动物模型中增加TGF-β组、FOXO1抑制剂干预组,采用免疫组化、Western blotting、RT-q PCR、Co IP、PLA实验,分析以β-catenin为核心的转录复合物β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1之间的转换关系;应用组织免疫荧光共定位、组织HSCs特异细胞PLA实验分析体内TGF-β信号通路转录因子复合物对HSCs细胞的作用,并应用RT-q PCR检测了foxp3、TNF-α、P27kip1表达水平。5.最后在胆道闭锁患者不同肝纤维化分期的肝脏组织中开展免疫组化、RTq PCR、PLA实验,分析人体肝脏组织中TGF-β水平、细胞增殖水平、IL-10、β-catenin/FOXO1、β-catenin/TCF与肝纤维化分期是否相关,为重新定向TGF-β信号通路转录因子复合物β-catenin/FOXO1、β-catenin/TCF治疗肝纤维化的临床策略提供依据。结果:1.体外实验:β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1参与肝星状细胞的增殖活化1.1β-catenin/TCF抑制剂ICG-001干预活化的LX2细胞,WB结果显示,ICG-001组LX2细胞α-SMA蛋白表达水平与TGF-β组相比显着下降;ICG-001+AS1842856组与ICG-001组比较,α-SMA蛋白表达水平显着高于ICG-001组;而ICG-001组与对照组相比,α-SMA蛋白表达水平差异不具有统计学意义,ICG-001+AS1842856组与TGF-β组相比,α-SMA表达水平差异不具有统计学意义。说明ICG-001可以抑制活化的HSCs转分化为肌成纤维细胞。1.2 Mn SOD、p27kip1 RT-q PCR结果显示,ICG-001组LX2细胞Mn SOD、p27kip1表达水平的变化趋势与α-SMA、COL-I WB结果相反。说明ICG-001干预活化的HSCs使HSCs细胞周期阻滞,抗氧化应激水平增强。1.3以β-catenin作为Co IP抗体的免疫共沉淀结果显示,ICG-001组与TGF-β组相比,β-catenin结合的TCF水平显着下降,FOXO1水平显着升高。β-catenin、TCF、FOXO1 PLA结果显示,ICG-001组LX2细胞β-catenin/TCF互作与TGF-β组相比显着下降,β-catenin/FOXO1结果与β-catenin/TCF相反。综合与β-catenin结合的TCF、FOXO1水平,应用TF ratio（β-catenin/TCF versusβ-catenin/FOXO1）指标分析各组之间转录因子水平的差异,结果显示TF ratio水平变化趋势与LX2细胞活化的特异性标记物α-SMA表达水平一致,LX2细胞的活化与TF ratio水平升高密切相关。以上结果说明β-catenin/TCF可以促进TGF-β诱导的HSCs增殖、活化。2.体内实验;小鼠肝纤维化动物模型以及β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1与肝纤维化病程关系初探2.1 CCl4肝纤维化小鼠模型在造模4w时,ALT、AST水平达到最高,随着造模时间延长,6w、8w时点ALT、AST水平呈现下降趋势;小鼠肝脏组织HE染色、网状纤维染色结果显示,在造模4w时纤维组织增生逐渐显着,网状纤维增粗、断裂,纤维间隔初步形成,随着造模时间延长,纤维间隔显着;小鼠肝脏α-SMA免疫组织化学结果显示,随着CCl4注射时间延长至4w,α-SMA表达水平与对照组相比显着升高。小鼠肝脏组织IL-6、TNF-αm RNA表达水平在模型4w时达到高峰,foxp3表达水平在模型初期逐步增加,6w时达到高峰,8w时下降。2.2 BDL肝纤维化小鼠模型BDL术后1w,ALT、AST与Sham相比显着升高,术后2w时达到顶峰,术后3w、4w呈现下降趋势;小鼠肝组织HE染色、网状纤维染色、Masson染色、亮绿-天狼星红染色分别从炎症细胞浸润、网状纤维、胶原纤维增生不同维度检测结果显示,BDL术后1周可见毛细胆管增生,汇管区增大,肝细胞轻度水肿变性,少量中性粒细胞及淋巴细胞浸润,随着术后时间延长,可见局灶性坏死,毛细胆管数量增多,肝细胞空泡样变加重;小鼠肝脏α-SMA免疫组织化学结果显示,BDL术后1w汇管区α-SMA表达水平与对照组相比显着增加,随着BDL术后胆总管结扎时间延长,α-SMA表达水平持续升高,。小鼠肝脏组织TNF-αm RNA表达水平在模型1w、2w、3w时逐步上升,foxp3表达水平在模型初期逐步增加,2w、3w时显着升高。以上结果说明CCL4、BDL两种不同机制导致的小鼠肝纤维化模型分别在造模4w、1w时即出现炎症细胞浸润,纤维组织增生。2.3 CCL4、BDL模型不同时期对小鼠肝脏石蜡组织切片进行原位PLA实验,检测β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1转录复合物在病程不同阶段的变化,结果显示β-catenin/TCF水平在CCl4造模4w时显着增高,β-catenin/FOXO1则在对照组呈现最高水平,在CCl4造模4w时显着下降;β-catenin/TCF水平在BDL手术造模1w时显着增高,β-catenin/FOXO1则在对照组呈现最高水平,术后1w时下降。说明在两种模型中β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1转录复合物水平与肝纤维化病程相关。3.抑制β-catenin/TCF改善CCL4、BDL小鼠模型肝纤维化3.1 CCl4、BDL肝纤维化小鼠模型分别应用ICG-001干预1w、2w,对肝脏外观、肝重/体重比、肝酶、组织学、α-SMA、COL-I m RNA及蛋白水平进行了比较,结果显示,CCl4、BDL模型中ICG-001干预1w时,肝重体重比较模型组无显着差异,干预2w时,肝重体重比与模型组相比显着下降。两种模型1w、2w干预组小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）与模型组相比均显着下降。CCl4模型肝脏组织HE染色、网染结果显示,ICG-001组与同期CCL4模型组相比,炎性细胞浸润减少,纤维间隔包绕肝细胞团与同期模型组相比减少。BDL模型肝脏组织HE、Masson、网状纤维、天狼星红染色结果显示,ICG-001组与同期BDL模型组相比,毛细胆管增生及纤维化减少,炎性细胞浸润减轻,I型胶原、III型胶原数量显着降低,网状纤维断裂、肝细胞板增厚程度减轻;BDL模型天狼星红染色半定量结果显示,ICG-001组胶原沉积显着低于同期模型组。RT-q PCR结果显示两种模型ICG-001组2w时COL-I、α-SMA阳性比例与同期模型组相比显着下降。免疫组化结果显示CCl4模型ICG-001组COL-I水平显着低于同期模型组,干预2w COL-I水平与干预1w时相比显着下降;BDL模型ICG-001组α-SMA水平显着低于同期模型组,干预2w时α-SMA水平与干预1w相比显着下降。以上结果说明抑制β-catenin/TCF 1w或2w,均可改善肝纤维化。3.2 CCl4、BDL模型在ICG-001干预后foxp3水平与模型组相比显着升高,p27kip1水平与模型组相比显着升高。3.3 BDL模型,ICG-001干预2w时,IL-6水平与同期模型组相比显着下降;TNF-α、IL-17变化趋势与IL-6一致,IL-10则显着增加。4.BDL模型研究β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1调控肝纤维化的分子机制4.1 BDL模型中,腹腔注射AS1842856抑制FOXO1后,免疫组化、WB检测小鼠肝脏组织α-SMA水平,结果显示,应用AS1842856干预后,α-SMA水平显着增加,肝脏纤维化加重;当在ICG-001基础上应用AS1842856干预时,α-SMA阳性细胞数与ICG-001组相比显着增加。α-SMA和COL-I WB及半定量分析结果显示:术后给予ICG-001,α-SMA和COL-I蛋白表达水平与BDL组相比显着下降,在此基础上应用AS1842856,α-SMA和COL-I蛋白表达水平与ICG-001组相比显着增加。4.2各组小鼠肝脏组织核蛋白IP实验结果显示BDL组与Sham组相比,β-catenin/TCF升高、β-catenin/FOXO1降低,ICG-001干预后,与Sham组趋于一致,在此基础上应用AS1842856,β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1与Sham组相比均显着下降。各组小鼠肝脏组织石蜡切片进行PLA实验,结果显示各组TCF、FOXO1与β-catenin互作的变化趋势与肝脏核蛋白Co IP实验结果基本一致,BDL术后以及TGF-β的作用下,β-catenin、TCF互作呈现增长趋势,而β-catenin、FOXO1互作显示下降,与肝脏纤维化进展相关。ICG-001干预后β-catenin、TCF结合减弱,β-catenin、FOXO1结合增强,而在ICG-001+AS1842856组,β-catenin与TCF、FOXO1的互作关系均减弱,与肝脏核蛋白Co IP实验结果一致。4.3组织免疫荧光结果显示BDL模型组HSCs增殖活化水平显着高于Sham组,ICG-001组显着低于模型组,TGF-β组HSCs数量及活化较BDL模型组增强,ICG-001干预TGF-β组HSCs增殖活化水平显着下降,与ICG-001组相比无显着差异。BDL模型组HSCs细胞β-catenin/TCF ligation与Sham组相比显着增加,ICG-001干预后与BDL组比较显着下降;TGF-β组β-catenin/TCF与BDL组相比显着增加,ICG-001干预TGF-β组,β-catenin/TCF ligation较TGF-β组显着下降。β-catenin/FOXO1ligation BDL组显着低于Sham组,ICG-001干预后与BDL组比较显着升高;TGF-β组β-catenin/FOXO1与BDL组相比显着增加,ICG-001干预TGF-β组,β-catenin/FOXO1 ligation较TGF-β组显着升高。TF ratio作为β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1的比值,可以综合评价与β-catenin竞争结合的TCF、FOXO1之间的动态变化,BDL模型组HSCs细胞中TF Ratio与Sham组相比显着增加,ICG-001干预后与BDL组比较显着下降;TGF-β组与BDL组相比无显着差异,ICG-001干预TGF-β组,TF Ratio较TGF-β组显着下降,与ICG-001组无差异。结合本部分2.1结果显示TF ratio下降,肝纤维化程度减轻,反之则加重。4.4 BDL模型组小鼠肝脏组织RT-q PCR结果显示TNF-α、foxp3表达水平与Sham组比较显着升高,ICG-001干预后TNF-α显着下降,foxp3进一步增加,在ICG-001基础上应用AS1842856抑制FOXO1后,TNF-α水平显着升高,foxp3表达下降。4.5 ICG-001干预后p27kip1水平与BDL模型组相比显着升高,在ICG-001基础上应用AS1842856抑制FOXO1后,p27kip1水平发生显着下降。5.人体肝脏组织β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1转录复合物与纤维化进展的关系5.1经过彩色多普勒超声初诊,腹腔镜胆囊插管造影确诊的16例胆道闭锁以及其它患者,依据HE、Masson、天狼星红染色结果进行纤维化程度的Ishak评分分期,其中0期3例,1期4例,2期、3期、4期各3例。5.2不同分期患者肝脏组织Masson染色、IL-10、Ki67半定量分析结果显示,肝脏组织纤维化程度逐渐加重,IL-10水平S0-S2期显着升高,细胞增殖S2-S4期显着增强,这些指标均与TGF-β表达水平逐渐升高相关。5.3患者肝脏组织石蜡切片PLA结果显示,S0、S1、S2、S3期β-catenin/TCF ligation S0-S2期逐渐增多;β-catenin/FOXO1 S0期最高,S0-S2期逐渐下降;TF ratio与患者肝脏纤维化程度变化趋势一致。结论:1.体外人肝星状细胞LX2实验中,TCF、FOXO1竞争结合β-catenin,形成不同转录因子复合物,调控TGF-β诱导的LX2转分化及细胞周期、氧化应激水平。2.体内动物实验中,TGF-β通路下游转录因子TCF、FOXO1同样存在竞争结合β-catenin;β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1作为TGF-β通路不同生物学效应的开关导致促纤维化和抗炎、细胞抑制--不同的生物学事件结局。体内通过调控HSCs TF ratio,可以抑制HSCs细胞的增殖活化,减少细胞外基质沉积,同时调节肝脏组织免疫反应,减轻组织慢性损伤,改善肝纤维化。3.β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1相对水平即TF Ratio水平升高与BA患者肝脏纤维化病程早期进展相关。
田园硕[8]（2021）在《活血软坚扶正方干预乙肝后肝纤维化的临床疗效研究及机制探索》文中进行了进一步梳理研究目的:本研究通过网络药理学方法筛选活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化的作用靶点、信号通路;通过临床研究观察活血软坚扶正方对气虚血瘀型乙肝后肝纤维化患者的有效性和安全性,并通过对人转化生长因子β 1、金属蛋白酶抑制因子1浓度的测定,探讨活血软坚扶正方干预本病的可能疗效机制,为临床应用提供科学依据。研究方法:1.网络药理学研究:采用 TCMSP、TCMID、SwissTargetPrediction、PubChem、DisGeNET、OMIM、GeneCards等数据库筛选活血软坚扶正方活性成分及与乙肝后肝纤维化相关靶基因,采用Cytoscape软件构建“方药-成分-靶点-疾病”网络图,采用String数据库构建蛋白质相互作用网络,采用Metascape对活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化关键作用靶点进行GO富集分析和KEGG富集分析,获取活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化的主要生物过程和信号通路。2.临床试验研究:采用随机数分组方法,将符合纳入标准、不符合排除标准的63例气虚血瘀型乙肝后肝纤维化患者随机分为中药组和对照组,中药组33例（后脱落3例）,对照组30例。在抗病毒治疗的基础上,中药组予活血软坚扶正方,对照组予复方鳖甲软肝片,连续干预6个月。两组均于治疗前后记录中医证候评分、检测肝弹性值,检查肝功能、血清蛋白、凝血功能、肝纤四项、人转化生长因子β1、血清金属蛋白酶抑制因子1,计算无创肝纤维化指标（APRI、FIB-4）,并在治疗前、治疗3个月、治疗6个月时检测血、尿、便常规等安全性指标。观察比较两组患者治疗前后的肝弹性值、肝纤四项、APRI、FIB-4、肝功能、血清蛋白、凝血功能、人转化生长因子β1、血清金属蛋白酶抑制因子1、中医证候评分以及相关安全性指标的变化,并统计分析。研究结果:1.网络药理学研究结果研究最终共筛选获取33个活性成分,129个作用靶点与活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化密切相关。活血软坚扶正治疗乙肝后肝纤维化主要涉及生物过程、细胞组成、分子功能等多层次功能,通过调节PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路、phospholipase D信号通路、HIF-1α信号通路、FoxO信号通路、JAK-STAT信号通路、IL-17信号通路、MAPK信号通路、AMPK信号通路、TNF信号通路、PPARγ信号通路等多个通路等来发挥治疗作用。2.临床试验研究结果（1）影像学肝纤维化指标:中药组和对照组组内对比均能够显着降低患者的肝弹性值（P<0.01）,且中药组疗效优于对照组（P<0.05）。（2）血清学肝纤维化指标:中药组能显着降低血清中CIV的水平（P<0.01）,对照组治疗前后CIV无明显差异（3）无创肝纤维化指标:中药组和对照组组内对比均能降低FIB-4的水平（P<0.05）,且中药组疗效优于对照组（P<0.05）;中药组可显着降低APRI的水平（P<0.01）,对照组治疗前后APRI无显着差异。（4）肝功能相关指标:中药组和对照组组内对比均能显着降低血清中TBIL的水平（P<0.05）,且两组组间无明显差异;中药组可显着降低AST的水平（P<0.01）,对照组治疗前后AST无显着差异。（5）血清蛋白相关指标:两组治疗前后组内对比ALB和GLO水平无显着差异。（6）凝血功能相关指标:中药组可显着升高的PTA和PLT的水平（P<0.01）,对照组无明显PTA和PLT升高。（7）TIMP-1和TGF-β1:中药组可降低血清中TIMP-1的浓度（P>0.05）,对照组能够降低血清中TGF-β1的浓度（P>0.05）,但TIMP-1和TGF-β1组内、组间差异均无统计学意义。（8）中医证候指标:中药组和对照组均能明显降低患者的中医证候评分（P<0.01）,且中药组疗效优于对照组（P<0.01）。结论:1.网络药理学研究提示:活血软坚扶正方改善乙肝后肝纤维化具有多层次、多系统和整体干预的特点。2.通过影像学、血清学、无创肝纤维化指标三种方式的比较,发现:活血软坚扶正方可有效抑制乙肝后肝纤维化的形成。3.活血软坚扶正方能够显着改善气虚血瘀型乙肝后肝纤维化患者的症状、减轻肝脏炎症,调节凝血功能。4.活血软坚扶正方干预血清中金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）和人转化生长因子β1（TGF-β1）的作用不显着,药物对其可能存在一定抑制作用,但是否是主要干预因子尚存疑,需进一步的研究进行验证。
张兴旺[9]（2021）在《CCL4诱导小鼠肝纤维化模型基因芯片整合分析及核心基因的筛选验证研究》文中研究指明背景与目的:肝硬化（Liver cirrhosis）是肝脏在慢性炎症刺激的作用下肝小叶重建、假小叶和纤维结节形成所导致的病理改变,可能进一步发展为肝癌。肝硬化是一个世界性的卫生问题,它可由多种病因引起,在肝硬化的形成过程中,肝纤维化（Liver fibrosis）是其必经阶段。目前的研究普遍认为肝纤维化是可逆的,随着测序技术的进步和基因数据库中测序数据的不断增加,人们通过对数据的分析发现在肝纤维化病变过程中涉及到部分基因及通路的改变,并且在针对性的增强或抑制某些基因的表达后,肝纤维化得到了不同程度的逆转,这些实验证明通过调控基因表达来治疗肝纤维化是可行的。目前已有许多相关研究揭示了一些重要的基因及通路,如TGF-β（Transforming growth factor-β）通路等,但目前尚无特异性治疗肝纤维化的药物,因此在疾病进展过程中针对基因表达改变的研究仍存在一定的空白和进一步探索的空间。本研究使用生物信息学方法探索并分析小鼠肝纤维化进程中的关键性致病基因,并通过PCR实验验证生物信息学分析结果,为肝纤维化的早期诊断和个体化治疗提供依据。方法:1.在NCBI（National Center for Biotechnology Information）的GEO（Gene Expression Omnibus）数据库中筛选并下载CCL4诱导的小鼠肝纤维化基因芯片数据GSE27640和GSE55747,使用R语言对芯片数据进行进一步的探索,找出其中的差异表达基因,使用David数据库分析差异表达基因参与的细胞功能及通路,使用Cytoscape软件构建调控网络筛选出位于结点的10个核心致病基因,并在NCBI的Gene数据库中查询核心致病基因的功能及研究进展;2.使用CCL4诱导构建小鼠肝纤维化模型,取实验组小鼠肝硬化组织及对照组小鼠健康肝脏健康组织通过PCR实验观察基因表达情况验证我们生物信息学方法分析的结果。结果:1.将两组GEO数据整合分析后得到117个共同差异表达基因（其中108个基因表达上调,9个基因表达下调）。2.对共同差异表达基因进行功能富集分析后发现差异表达基因功能和信号通路在以下几个方面明显富集:1)在生物学进程（biological process,BP）中,共同上调基因明显富集在凋亡过程、转化、蛋白质折叠等过程。2)在分子功能（molecular function,MF）里,共同上调基因在蛋白质结合、poly（A）RNA结合、蛋白质同源二聚化活性等功能中明显富集。3)在细胞组分（cellular component,CC）里,共同上调基因主要见于细胞质、胞外体、细胞外间隙等。对差异表达基因进行信号通路富集分析结果显示共同上调基因主要富集在以下通路:内质网中的蛋白质加工、精氨酸和脯氨酸代谢等通路。3.对差异表达基因绘制蛋白质-蛋白质互作（protein-protein interaction,PPI）网络图,使用Cytoscape软件最终筛选出10个核心致病基因:Lgals3,Actb,Anxa5,Lyz2,Sec61a1,Anxa2,Isg15,Timp1,P4hb,Rpl37。4.PCR验证结果显示筛选出的10个核心基因中有9个在转录水平表达与我们在GEO数据库中下载的基因芯片数据生物信息学分析的结果基本相符。结论:1.整合两组基因芯片数据使用生物信息学方法分析我们得到了117共同差异表达基因,其中上调的108个基因参与细胞凋亡、蛋白质结合等过程;2.从筛选出的共同差异表达基因中我们筛选出了10个核心致病基因,根据在NCBI的Gene数据库中查询到的研究结果如下:1)已明确有文献报道与肝纤维化有关的基因如Lgals3、Actb、Timp-1,2)文献报道与其他器官组织纤维化相关的基因如Lyz2、Anxa2,3)目前研究结果未发现与肝纤维化相关的基因如Anxa5、Isg15、P4hb、Rpl37、Sec61a1;3.通过构建小鼠肝纤维化模型并进行PCR实验,验证了我们生物信息学分析的结果,证明我们筛选出的核心致病基因,可作为肝纤维化诊断、治疗的靶标。
陈凯[10]（2021）在《miR-876调控POSTN促进肝癌进展和纤维化的机制研究》文中研究指明一、研究背景肝细胞性肝癌（HCC）是世界范围内最常见恶性肿瘤之一,目前在最致命肿瘤中致死率排名第二。在过去的几十年,针对肝癌已经有了众多治疗手段,如精准的肝段切除术,肝移植术,肝动脉栓塞化疗及肝癌射频消融术等,但是肝癌患者的预后仍然不令人满意,据统计,肝癌患者5年总生存率低于20%。肝癌起病隐匿,肿瘤进展快,容易复发和肝内转移都是导致肝癌预后较差的可能原因。因此,探究肝癌进展,转移的分子学机制有利于寻找潜在的肝癌治疗分子靶点,开发可能的早期肝癌诊断标志物对肝癌的系统治疗非常重要。微小RNA（miRNA）是以由一类进化保守的,由约22个核苷酸组成的非编码小RNA,微小RNA可结合在靶基因信使RNA（m RNA）的3?端的非翻译区（UTR区）通过降解信使RNA或抑制信使RNA翻译的方式发挥转录后调控作用。研究显示微小RNA几乎参与了肿瘤细胞发生发展的全部过程,包括细胞的干性,肿瘤发生,细胞的增殖,细胞的凋亡,细胞的迁移和侵袭,细胞的转移等等。也有越来越多的研究显示各种肿瘤中均有不同微小RNA的异常表达,包括肝癌。例如,miR-876被发现在胆管癌（CCA）中表达降低,并能通过抑制BCL-XL的表达诱导细胞的增殖;miR-589被发现在肝细胞性肝癌中表达增高并能通过STAT3信号通路来促进细胞的干性和化疗抵抗。然而,在肝细胞性肝癌中异常表达和对诊断或者预后有指示作用的miRNA仍然缺乏有待进一步研究。骨膜蛋白（POSTN）,也称为成骨细胞特异性因子2,是一大小为93.3k Da的细胞外基质（ECM）蛋白。POSTN能通过和众多其他蛋白如纤维结合蛋白,胶原蛋白及腱生蛋白等互相联系进而对细胞外基质进行改造。POSTN对胶原纤维的发生,细胞粘附,细胞迁移和上皮间质转换等都有重要作用。目前研究发现多种肿瘤中亦有POSTN的异常表达,包括头颈部肿瘤,肺癌,神经纤维瘤,乳腺癌,结直肠肿瘤及肝细胞性肝癌等,对肿瘤细胞的生存,上皮间质转换,血管生成和肿瘤微环境的形成都有重要作用。例如:研究发现胰腺癌细胞能刺激间质细胞分泌POSTN,进而促进肿瘤基质成绩和上皮间质转化进而促进肿瘤进展。然后,在肝细胞性肝癌中POSTN的表达及调控机制的研究尚少,有待进一步研究。在本文中,我们通过对TCGA数据库中异常表达的miRNA进行筛选,鉴定出了一异常表达的miRNA,即miR-876。我们还进一步探求了其细胞功能和对下游靶基因的调节机制。我们还在众多临床肝细胞性肝癌的临床组织标本中监测了miR-876和其靶基因POSTN的表达,分析了他们的表达和肝细胞性肝癌患者的临床病理参数和预后的关系。我们的研究提示miR-876及POSTN在肝细胞性肝癌中异常表达,可能作为一潜在的诊断性分子标志物和治疗靶点。二、研究方法1.分析49对肝癌及对应的癌旁样本的TCGA数据库,分析异常表达的miRNA,筛选出表达差异倍数最高的前20个微小RNA。2.收集了从2006年到2010年在西南医院肝胆科因患原发性肝细胞性肝癌而行原发性肝癌切除术的共计127例患者的组织样本,本研究说包含的所有病人术前均未接收放疗或者化疗。所有患者术后均定期性影像学（即超声或CT）即血液AFP检测。本研究团队及西南医院临床研究中心完成患者的预后随访,随访为结合到我院复查情况,定期（每2-3月）电话随访。3.采用实时定量PCR的方法检测了肝癌组织样本中miR-876和POSTN的表达水平;采用免疫组化（IHC）方法在原发性肝细胞性肝癌组织样本中检测了样本中POSTN及EMT标志物（E钙粘蛋白,N钙粘蛋白,波形蛋白）的表达情况,并在肝癌合并肝硬化样本中检测了POSTN的表达。4.采用Kaplan-Meier曲线分析（单因素）和Cox回归（多因素）方法分析了影响HCC患者预后的危险因素及独立危险因素,并进一步分析了miR-876和POSTN共表达对HCC预后的影响。5.采用了生物信息学及双荧光素酶报告基因实验研究了miR-876可能的调控靶基因,并进一步采用实时定量PCR及Western Blotting（WB）方法进行验证。6.Mi R-876的具体体内生物学行为在裸鼠实验中进行检测,最终成瘤效果以活体成像方式进行检测验证。7.采用WB方法分析了miR-876的表达对EMT标志物的影响,并在人肝星状细胞系LX-2中检测了纤维化蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,胶原蛋白-I的表达。采用transwell小室侵袭实验研究了miR-876对肝癌细胞系的侵袭能力的影响。三、研究结果1.通过对49对肝癌患者的TCGA数据库进行分析,我们筛选出了表达差异倍数排名前20的高表达及低表达miRNA,进一步筛选鉴定出miR-876。2.我们发现miR-876在肝癌细胞系及肝癌组织中低表达。首先,我们发现miR-876在人正常肝细胞系L02中表达高,而在肝癌细胞系SMMC-7721,Hep G2,Huh-7及HCC-LM3中表达较低;接下来我们在50对肝癌及癌旁样本中检测了miR-876的表达,发现miR-876在肝癌组织/癌旁组织的比率62%有降低,16%变化不明显,而仅有22%表达升高。3.miR-876的低表达和肝硬化、癌栓及肝癌TNM分期相关。我们在127例HCC组织样本中检测了miR-876的表达,分析了其表达水平和HCC患者临床病理参数的相关性。发现miR-876的表达和肝硬化（P=0.026）、肝癌癌栓形成（P=0.031）及TNM分期（P=0.021）相关。而和其他病理参数,如患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤数量、乙肝、AFP水平、肝Child分级未发现显着相关性。我们还进一步在肝硬化及癌栓患者中检测了miR-876的表达水平,发现miR-876在肝硬化组织样本中表达较非肝硬化患者显着低（P=0.0294）,而其在有肝癌癌栓患者中表达亦显着低（P=0.0367）。4.miR-876抑制细胞侵袭、EMT及细胞纤维化。我们通过构建了miR-876过表达及干扰细胞株,通过transwell细胞侵袭实验发现过表达miR-876的肝癌细胞侵袭力减弱,而干扰miR-876后侵袭力增强,进一步通过WB实验发现过表达miR-876后N-钙粘蛋白及波形蛋白表达减弱,而干扰miR-876后E-钙粘蛋白表达亦减弱。在人星状细胞系LX-2中干扰miR-876表达后发现α-SMA及胶原蛋白-I表达减弱。5.miR-876靶向POSTN,并抑制其表达。我们通过生物信息学分析发现POSTN的3?UTR存在2个能与miR-876种子区结合的序列,进一步双荧光素酶报告基因实验发现野生型p GL3 POSTN荧光素酶质粒和miR-876共转染入293细胞后其萤火虫荧光信号/海肾荧光素酶荧光信号比值显着性降低,进一步WB实验证实当干扰miR-876后HCC细胞POSTN表达升高,而过表达组POSTN显着降低。我们进一步在127例肝癌临床组织标本中同时检测了miR-876和POSTN的表达,发现两者表达呈显着负相关,R值为-0.477,相关线性方程为y=-0.486x+0.394。6.miR-876通过POSTN抑制EMT及细胞纤维化。首先,我们发现过表达POSTN的肝癌细胞侵袭力增强,并促进了EMT标志物及纤维化标志物的表达。其次,我们在过表达POSTN的基础上转染了miR-876,发现共转染miR-876后抵消了侵袭力增加及EMT及纤维化标志物蛋白的表达。7.miR-876在体内动物实验下减弱HCC细胞肿瘤成瘤能力及抑制肿瘤进展。HCC细胞其miR-876过表达的HCC细胞被注入裸鼠肝包膜下,进行动物实验,1月后行活体成像检测,我们发现对照组（无干预的HCC细胞）成瘤数量多,活体成像荧光强度强,而实验组行miR-876过表达后,裸鼠原位肝脏成瘤明显减少,活体检测荧光信号弱,表明在体内实验条件下,miR-876能抑制HCC的成瘤及肿瘤进展。8.POSTN和肝组织EMT及肝硬化相关。我们进一步在127例肝癌组织中检测了POSTN的表达,发现同miR-876类似,POSTN表达和肿瘤数量、肝硬化、肝癌癌栓形成及TNM分期相关,而和其他临床标识物未发现明显相关性,进一步非参数检验验证了肝硬化或肿瘤癌栓组HCC患者的POSTN表达明显增高。IHC实验发现POSTN主要表达与肝癌间质,部分肝癌细胞亦有表达,POSTN高表达的样本N钙粘蛋白及波形蛋白表达增高,而E钙粘蛋白表达降低。而在肝癌伴肝硬化标本中发现POSTN亦有强表达。9.miR-876和POSTN和肝癌患者术后预后相关。进一步KM单因素生存分析发现肿瘤大小（P=0.037）、肝硬化（P=0.041）、肝癌癌栓状态（P=<0.01）、TNM分期（P=0.001）、miR-876低表达（P=0.022）及POSTN高表达（P=0.012）均是影响HCC患者预后的危险因素,多因素回归分析发现肝癌癌栓（风险比=2.530,95%CI区间=1.433-4.468,P=0.001）及POSTN的表达（风险比=1.717,95%CI区间=1.008-2.926,P=0.047）是影响肝癌预后的独立危险因素。进一步共表达分析提示miR-876低表达和POSTN高表达的HCC患者预后较之于miR-876低表达和POSTN高表达更差。四、研究结论综上所述,我们从公开的TCGA数据库中鉴定出了肝癌中一显着性低表达的miRNA,即miR-876。并探索了其对细胞的功能,即能抑制细胞侵袭,EMT和纤维化。而miR-876这些功能是通过调控POSTN的表达实现的。miR-876在体内动物实验下能抑制肝癌的成瘤及进展;我们还在众多肝癌临床标本中从m RNA及蛋白水平证明了miR-876和POSTN的异常表达和肝癌的EMT水平,纤维化水平及进展相关,而miR-876和POSTN的异常表达和HCC的预后相关,而联合miR-876和POSTN检测可能更好预测HCC的预后以及作为潜在的治疗靶点。
二、转化生长因子β_1与肝纤维化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、转化生长因子β_1与肝纤维化（论文提纲范文）
（2）miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 材料 |
| 1.3.1 主要试剂、仪器和动物 |
| 1.3.2 实验动物 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 动物实验 |
| 1.4.2 细胞学实验 |
| 1.5 主要观察指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 实验动物数量分析 |
| 2.2 miR-373在肝纤维化血清中表达增加 |
| 2.3 肝纤维化组织中肝星状细胞TGFβR2表达增加 |
| 2.4 miR-373调控肝星状细胞TGFβR2表达 |
| 3 讨论Discussion |
（3）间充质干细胞及其外泌体在肝再生领域的应用（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 资料提取与文献质量评价 |
| 2 结果Results |
| 2.1 间充质干细胞及其外泌体的生物学特性 |
| 2.2 不同来源间充质干细胞及其外泌体对肝细胞再生的影响 |
| 2.2.1 骨髓间充质干细胞及其外泌体对肝细胞再生的影响 |
| 2.2.2 脂肪间充质干细胞及其外泌体对肝细胞再生的影响 |
| 2.2.3 脐带间充质干细胞及其外泌体对肝细胞再生的影响 |
| 2.2.4 其他干细胞及其来源外泌体对肝细胞再生的影响 |
| 2.3 间充质干细胞促进肝再生的临床应用 |
| 2.4 间充质干细胞及其来源外泌体促进肝再生的可能作用机制 |
| 2.4.1 减少肝细胞凋亡 |
| 2.4.2 调节自噬 |
| 2.4.3 改善炎症反应 |
| 2.4.4 改善氧化应激 |
| 2.4.5 抑制纤维化 |
| 2.4.6 血管形成 |
| 3 总结与展望Summary and prospects |
| 3.1 该领域存在的一些问题 |
| 3.2 展望 |
（5）小鼠Kupffer细胞的转分化研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩写词对照表 |
| 前言 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 肝脏概述 |
| 1.2 肝脏纤维化 |
| 1.2.1 肝细胞的死亡与凋亡 |
| 1.2.2 肝纤维化发展 |
| 1.2.3 肝纤维化中肌成纤维细胞的组成 |
| 1.3 KCs在肝脏学中的研究进展 |
| 1.3.1 KCs的起源 |
| 1.3.2 KCs在肝脏结构中的定位 |
| 1.3.3 KCs的免疫作用 |
| 1.3.4 KCs的异质性 |
| 1.3.5 KCs的可塑性 |
| 1.3.6 KCs与肝脏疾病 |
| 1.4 细胞谱系追踪技术 |
| 1.4.1 细胞谱系追踪技术的基本原理 |
| 1.4.2 细胞谱系追踪的标记方法 |
| 1.4.3 细胞谱系追踪在肝脏研究中的应用 |
| 1.4.4 细胞谱系追踪的未来 |
| 1.6 细胞的转分化 |
| 1.6.1 细胞转分化概述 |
| 1.6.2 自然发生的转分化 |
| 1.6.3 实验性转分化 |
| 1.6.4 肝脏中的转分化 |
| 1.6.5 转分化应用于再生医学的优点和局限性 |
| 第2章 KCs在体外非实质细胞培养过程中的形态和表型变化研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 2.2.4 主要实验试剂配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 非实质细胞分离 |
| 2.3.2 收集培养的非实质细胞 |
| 2.3.3 多聚体免疫共沉淀 |
| 2.3.4 RNA提取 |
| 2.3.5 基因表达分析 |
| 2.3.6 免疫荧光成像 |
| 2.3.7 统计学方法 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 精密肝切片培养实验过程中,KCs特征性基因表达下调 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 3.2.4 主要实验试剂配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 在精密肝切片培养和体外非实质细胞培养实验中,KCs中纤维化相关基因表达分析研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 主要实验试剂 |
| 4.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 KCs在培养过程中转录因子基因表达研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 结果 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第6章 KCs与肝片中胶原沉积的初步探索研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.1.1 实验动物 |
| 6.1.2 实验试剂 |
| 6.1.3 主要实验耗材与设备 |
| 6.1.4 主要实验试剂配制 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 KCs耗竭 |
| 6.2.2 肝片培养、基因分析等方法同前所述 |
| 6.3 结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 本实验创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（6）中医药抗肝纤维化作用机制研究进展（论文提纲范文）
| 1 抑制肝脏炎症反应 |
| 2 抑制细胞外基质的合成 |
| 3 抑制肝星状细胞活化和促进肝星状细胞凋亡 |
| 3.1 抑制肝星状细胞活化 |
| 3.1.1 转化生长因子 |
| 3.1.2 血小板衍生生长因子 |
| 3.2 促进肝星状细胞凋亡 |
| 4 抑制肝窦毛细血管化 |
| 5 小结与展望 |
（7）β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1转录因子调控肝星状细胞改善肝脏纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1 参与肝星状细胞的增殖活化 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器及试剂盒 |
| 1.2 实验试剂配制 |
| 1.3 LX2 细胞培养及细胞传代 |
| 1.4 rhTGF-β诱导LX2 细胞活化增殖 |
| 1.5 ICG-001、AS1842856 干预活化的LX2 细胞 |
| 1.6 实验方法 |
| 1.7 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1 调控LX2 增殖活化表型 |
| 2.2 β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1 调控LX2 细胞增殖活化的作用机制 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 小鼠肝纤维化动物模型构建以及β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1 与肝纤维化病程关系初探 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器及试剂盒 |
| 1.2 实验试剂配制 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 动物模型建立及实验分组 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 CCl_4、BDL模型不同时点的小鼠一般状况 |
| 2.2 CCl_4、BDL模型不同时点的肝脏外观改变 |
| 2.3 CCl_4、BDL模型不同时点的肝功能变化 |
| 2.4 CCl_4、BDL模型不同时点的组织学改变 |
| 2.5 CCl_4、BDL模型不同时点α-SMA免疫组织化学结果 |
| 2.6 CCl_4、BDL模型不同时点炎症因子表达水平 |
| 2.7 CCl_4、BDL模型不同时点β-catenin/FOXO1、β-catenin/TCF转录复合物变化. |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 抑制β-catenin/TCF改善CCL4、BDL小鼠模型肝纤维化 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器及试剂盒 |
| 1.2 实验试剂配制 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 动物模型建立及实验分组 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 抑制CCl_4、BDL模型β-catenin/TCF1 w、2 w时小鼠一般状况 |
| 2.2 抑制CCl_4、BDL模型β-catenin/TCF1 w、2 w时肝脏外观及肝重体重比 |
| 2.3 抑制CCl_4、BDL模型β-catenin/TCF1 w、2 w时血清肝功能水平 |
| 2.4 抑制CCl_4、BDL模型β-catenin/TCF1 w、2 wS时肝脏组织学变化 |
| 2.5 抑制CCl_4、BDL模型β-catenin/TCF1 w、2 w时 COL-I、α-SMA水平 |
| 2.6 抑制CCl_4、BDL模型β-catenin/TCF2 w促进FOXO1 靶基因foxp3、p27~(kip1)表达 |
| 2.7 抑制BDL模型β-catenin/TCF时肝脏组织炎症因子水平 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四部分 BDL模型研究β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1 调控肝纤维化的分子机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器及试剂盒 |
| 1.2 实验试剂配制 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 动物模型建立及实验分组 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 β-catenin/TCF、FOXO1 共同调控肝纤维化进展 |
| 2.2 肝脏核蛋白中TCF、FOXO1与β-catenin竞争结合形成不同转录复合物 |
| 2.3 体内HSCs中 TCF、FOXO1与β-catenin形成不同转录复合物调控肝纤维化进展 |
| 2.4 β-catenin/TCF、FOXO1 调节肝脏组织炎症因子水平 |
| 2.5 β-catenin/TCF、FOXO1 调节肝脏组织细胞周期抑制蛋白p27~(kip1) |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第五部分 探讨人体肝脏组织β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1 转录复合物与纤维化进展的关系 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器及试剂盒 |
| 1.2 临床组织标本收集 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 胆道闭锁导致胆汁淤积性肝纤维化患者基本信息统计 |
| 2.2 患者肝脏组织石蜡切片HE、Masson、天狼星红染色结果及纤维化分期 |
| 2.3 不同分期患者肝脏组织TGF-β、IL-10、Ki67 水平 |
| 2.4 不同分期患者肝脏组织β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1 水平 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文总结 |
| 创新点与不足之处 |
| 1.本研究的特色与创新点 |
| 2.本研究不足之处及进一步的研究设想 |
| 参考文献 |
| 综述 转化生长因子-β信号通路与纤维化 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（8）活血软坚扶正方干预乙肝后肝纤维化的临床疗效研究及机制探索（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 文献综述 TGF-β1相关通路在乙肝后肝纤维化方面研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 网络药理学研究 |
| 第一节 资料与方法 |
| 1 活血软坚扶正方活性化学成分与作用靶点的获取和筛选 |
| 2 乙肝后肝纤维化相关作用靶点的筛选 |
| 3 药物-活性成分-疾病相关靶点网络的构建 |
| 4 蛋白相互作用网络的构建与核心靶标筛选 |
| 5 生物过程与信号通路富集分析 |
| 第二节 活血软坚扶正方网络药理学研究结果 |
| 1 活血软坚扶正方活性成分的筛选 |
| 2 疾病相关靶点预测 |
| 3 药物-活性成分-疾病相关靶点网络构建 |
| 4 蛋白相互作用网络的构建与核心靶标筛选 |
| 5 GO基因功能富集分析 |
| 6 KEGG通路富集分析 |
| 第三节 小结与讨论 |
| 1 活血软坚扶正方有效活性成分讨论 |
| 2 活血软坚扶正方抗乙肝后肝纤维化相关靶标蛋白讨论 |
| 3 活血软坚扶正方抗乙肝后肝纤维化相关信号通路讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 临床研究 |
| 第一节 资料与方法 |
| 1 一般资料 |
| 2 诊断标准 |
| 3 纳入标准 |
| 4 排除标准 |
| 5 退出标准 |
| 6 剔除标准 |
| 7 中止标准 |
| 8 治疗方法 |
| 9 观察指标 |
| 10 统计学方法 |
| 第二节 研究结果 |
| 1 基线情况 |
| 2 疗效比较 |
| 3 安全性指标检测 |
| 4 脱落病例分析 |
| 第三节 小结与讨论 |
| 1 讨论 |
| 2 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）CCL4诱导小鼠肝纤维化模型基因芯片整合分析及核心基因的筛选验证研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 综述 肝纤维化基因诊断及治疗技术的研究进展 |
| 2.1 肝纤维化的基因诊断 |
| 2.1.1 传统肝纤维化诊断方法 |
| 2.1.2 MiRNA与肝纤维化进展的关系 |
| 2.2 肝纤维化的基因治疗策略 |
| 2.2.1 反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotides,ODNs)治疗策略 |
| 2.2.2 基于siRNA(Small interfering RNA)的治疗 |
| 2.2.3 基于miRNA的治疗 |
| 2.2.4 LncRNA在肝硬化基因治疗中扮演的角色 |
| 2.2.5 诱饵ODN疗法 |
| 2.2.6 三股螺旋结构寡核苷酸 (triplehehx forming oligonucleotide,TFO) 策略 |
| 2.3 总结 |
| 第3章 材料和方法 |
| 3.1 基因芯片分析方法和步骤 |
| 3.1.1 筛选差异表达基因 |
| 3.1.2 GO分析和KEGG通路富集分析 |
| 3.1.3 蛋白质-蛋白质互作网络分析和筛选核心基因 |
| 3.2 主要实验器材与试剂 |
| 3.2.1 实验器材 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验动物及给药方案 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 RNA提取 |
| 3.3.2 PCR验证 |
| 第4章 结果 |
| 4.1 肝硬化差异表达基因筛选 |
| 4.2 肝硬化差异表达基因GO分析 |
| 4.3 肝硬化差异表达基因信号通路分析 |
| 4.4 核心基因和信号通路的蛋白蛋白互作分析(PPI)和模块分析 |
| 4.5 核心基因表达水平变化 |
| 第5章 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（10）miR-876调控POSTN促进肝癌进展和纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 HCC中抑癌miR-876从TCGA数据库的筛选鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 miR-876在HCC细胞及组织中低表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 miR-876 的异常表达和HCC进展及纤维化相关 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 miR-876 抑制HCC的 EMT及纤维化 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 miR-876 靶向调控POSTN |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 miR-876 通过POSTN抑制HCC的 EMT及纤维化 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.2 结果 |
| 7.3 讨论 |
| 7.4 小结 |
| 第八章 POSTN高表达和HCC组织EMT及肝硬化相关 |
| 8.1 材料与方法 |
| 8.2 结果 |
| 8.3 讨论 |
| 8.4 小结 |
| 第九章 miR-876及POSTN的异常表达和HCC预后相关 |
| 9.1 材料与方法 |
| 9.2 结果 |
| 9.3 讨论 |
| 9.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 骨膜蛋白(POSTN)的结构功能及其在肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
四、转化生长因子β_1与肝纤维化（论文参考文献）
- [1]间充质干细胞源性外泌体在组织纤维化修复中的作用[J]. 唐建宏,张霓霓,黄桂林,郎家婵,崔田宁,骆勤亮. 中国组织工程研究, 2022(25)
- [2]miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化[J]. 徐静,严永敏,蔡梦洁. 中国组织工程研究, 2022(05)
- [3]间充质干细胞及其外泌体在肝再生领域的应用[J]. 白佳萌,刘光伟,谢露,毛垚耀,何惠昌,王春景. 中国组织工程研究, 2022(19)
- [4]HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清中TGF-β1、MAO、透明质酸水平与HBV-DNA载量的相关性分析[J]. 刘勇波,陈宗波,陈燕如,张辉,游永强,周泳威,罗福权. 国际医药卫生导报, 2021(19)
- [5]小鼠Kupffer细胞的转分化研究[D]. 李昕宇. 吉林大学, 2021(01)
- [6]中医药抗肝纤维化作用机制研究进展[J]. 张冰冰,梁健,邓鑫,张艳培,徐粤娟. 湖南中医杂志, 2021(08)
- [7]β-catenin/TCF、β-catenin/FOXO1转录因子调控肝星状细胞改善肝脏纤维化的机制研究[D]. 王晓玲. 山西医科大学, 2021(01)
- [8]活血软坚扶正方干预乙肝后肝纤维化的临床疗效研究及机制探索[D]. 田园硕. 北京中医药大学, 2021(08)
- [9]CCL4诱导小鼠肝纤维化模型基因芯片整合分析及核心基因的筛选验证研究[D]. 张兴旺. 吉林大学, 2021(01)
- [10]miR-876调控POSTN促进肝癌进展和纤维化的机制研究[D]. 陈凯. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
标签：转化生长因子-β论文; β-catenin论文; 肝纤维化指标检查论文; 细胞生长因子论文; 肝癌症状论文;