一、黄绿青霉素的高效液相色谱检测法的改进（论文文献综述）
李梁[1]（2020）在《赭曲霉毒素A饮用水突发污染在线监测及生物毒性评估》文中研究说明饮用水安全对居民生命健康至关重要,饮用水从供应处到居民区经历环节复杂,存在人为投毒和突发污染的安全隐患。为预防饮用水重大安全事故风险,建立水质在线监测预警、快速毒性评估及应急处理的方法已迫在眉睫。论文以潜在污染物赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）为对象,研究了OTA产毒菌在不同培养物的生长及产毒特性,建立了一种化学发光在线监测新方法,利用鳆发光杆菌法进行水质的快速监测及生物毒性评估,提出了OTA突发污染事件有效应急方法,研究结果如下:1.赭曲霉菌易于培养和产毒。在PDA、CS、YES培养平板,菌落长势最旺盛且OTA含量最高为YES平板,25℃阴暗培养8天,菌落直径为7.66 cm,OTA产量达24.67 ng/mm2。在磨碎玉米、小麦、花生、大米天然培养物,最适合OTA大量产毒及机制研究为小麦培养物,25℃阴暗培养8天,OTA产量达50.82μg/g。2.基于OTA对Luminol-Na IO4-Tween 20发光体系的抑制作用建立快速在线监测OTA流动注射化学发光新方法。响应面优化实验条件后,该方法的线性范围0.006～1.000μg/m L,检出限1.74×10-3μg/m L,加标回收率80.6%～92.4%。该法快捷简便,可用于饮用水中OTA突发性污染的在线应急预警。3.基于OTA对鳆发光细菌的生物发光抑制试验建立OTA快速监测和毒性评估新方法。研究表明鳆发光杆菌相对发光强度与OTA浓度0.01-20 mg/L有较好线性关系（R2=0.9858）,线性方程:y=-0.0474x+1.1026,加标回收率80.8%-87.4%。鳆发光杆菌对OTA毒性敏感度较高(IC50=12.71 mg/L,30 min),毒性机理表现为影响鳆发光杆菌微观形态变化,损伤细胞蛋白质及诱导细胞坏死和晚期凋亡。4.紫外辐射相比白炽灯对饮用水OTA去除效果较好,硅藻土及超声波去除作用较差,粉末活性炭吸附效果最显着。在响应面优化下,当活性炭投样量0.25g/L、吸附温度20℃、吸附12 min时,OTA去除率高达95.08%,该法可用作OTA突发污染的快速应急去除法。
金博文[2]（2020）在《玉米赤霉烯酮降解菌株的分离、鉴定及降解特性的研究》文中研究表明玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是由镰刀菌属产生的一类2,4-二羟基苯甲酸内酯类化合物,在谷类作物中的污染十分普遍。ZEN具有类似雌激素的作用,会引发机体生殖系统紊乱,肝、肾损伤,干扰免疫系统以及具有致癌性,严重危害人和动物的健康,每年都会造成养殖业巨大的经济损失。本研究旨在利用生物降解法对饲料中存在的ZEN进行快速、有效的消减,对此进行了以下工作内容:（1）通过采集新疆、盘锦等5个地区的牛粪、羊粪及土壤样品70份,以环戊酮为唯一碳源进行微生物筛选,以ZEN标准品进行复筛获得8株能够降解ZEN的降解菌株。采用高效液相色谱法检测降解前后ZEN的含量,获得1株ZEN降解率高达83%的菌株NF-PJ-5。该菌株经16S rDNA序列比对、系统发育树构建、菌落形态观察及生理生化实验鉴定,最终确定为多食鞘氨醇杆菌（Sphingobacterium multivorum）。（2）分别考察温度、pH以及菌液浓度,对多食鞘氨醇杆菌NF-PJ-5降解ZEN能力的影响。结果显示,该菌株降解ZEN的适宜温度为2832℃,适宜pH为6.57.5,菌液适宜初始浓度为2×109 CFU/mL。在30℃,pH7.0,摇床转速为160 rpm/min的培养条件下,液态发酵48 h后,该菌株对10μg/mL的ZEN标准品的降解率达83%。（3）初步探究了该菌株对ZEN的降解机理,结果表明,该菌株培养上清液对ZEN具有较强的降解能力,降解率可达75%以上。同时在菌株对ZEN吸附情况的研究过程中发现该菌株细胞壁对ZEN具有一定的吸附作用,可吸附清除20%左右的ZEN。推测该菌株通过产生具有降解ZEN能力的胞外酶以及细胞壁的吸附作用对环境中存在的ZEN起到降解清除的效果。本研究首次发现了多食鞘氨醇杆菌在降解ZEN方面的特性,进一步丰富了ZEN降解菌株的类型,为生物降解法的应用提供一定技术及理论的指导。
何旭萌[3]（2019）在《选择性吸附磺胺甲恶唑的磁性分子印迹材料的制备及性能》文中研究指明磺胺甲恶唑是一种常见的抗生素,它常常用于由细菌等微生物引起的疾病的治疗,并在自然水域和土壤被广泛检测出来。研究指出磺胺类药物对水体中的动植物有一定的毒性,并可能诱导基因变异的产生。它还可以在食物链中积聚,最终威胁到人类的健康,因此有必要建立一个针对磺胺甲恶唑的准确、有效的检测方法。本文将分子印迹技术与磁固相萃取技术相结合,以磺胺甲恶唑为模板分子,合成出对目标分子具有较高选择吸附能力的磺胺甲恶唑分子印迹聚合物;并以磁性纳米Fe3O4为负载材料,将其修饰后包覆分子印迹聚合物,最终制得所需的磁性分子印迹材料（MMIPs）和磁性非印迹材料（MNIPs）。所制备的MMIPs不仅具有对特定目标物的选择性吸附孔穴,也可以通过外部磁场的作用将其从溶液中迅速分离。本文确定了在聚合材料制备过程中的最优条件与最优材料配比,模板分子、功能单体、交联剂的投量比为1:4:50,引发剂投加量为30mg,溶剂乙腈投加量为30mL,合成出吸附效果最好的MMIPs,并对MMIPs、MNIPs等材料进行表征,主要通过扫描电镜（SEM）、傅里叶红外光谱（FTIR）来观察样品的的合成情况和微观形貌。同时对聚合物在吸附解吸实验中的实验条件进行了优化,得到吸附解吸效果最佳的实验条件。并对吸附结果进行了动力学和热力学的分析,通过对拟合结果的分析来确定吸附类型,计算出MMIPs的理论最大吸附容量为23.21 mg/g。最后,本课题研究了MMIPs的选择性吸附性,选择磺胺、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶和双酚A四种与磺胺甲恶唑结构或分子量相似的物质与目标物配制成单元、二元和多组分体系,以测试在干扰物质存在下MMIPs的选择吸附性能。并以腐殖酸作为水中有机物的代表,氯化钠作为水中阴阳离子的代表,观察MMIPs在含有不同浓度的两种物质的溶液中的选择吸附性能。结果表明,不同浓度的干扰物质会对MMIPs对于目标物的吸附效果造成一定的影响,但影响程度不大。在对实际水样的检测中,两种加标浓度的情况下,磺胺甲恶唑的回收率为75.9788.74%,RSD在4.37.3%,结果较为可靠。
吴事正[4]（2018）在《黄绿青霉素饮用水突发性污染在线监测及毒性评估》文中研究指明饮用水安全问题日益严峻,突发性水污染对饮用水安全构成了巨大威胁。因此,有必要建立有效在线监测技术及应急机制来预防和应对饮用水中突发性污染。本文选择黄绿青霉素作为研究对象,采用鲁米诺-过氧化氢-纳米氧化铜化学发光体系及发光细菌法,探索在线监测及预警饮用水中黄绿青霉素突发性污染的方法。主要研究内容包括:（1）流动注射化学发光法对饮用水中黄绿青霉素的在线检测;（2）发光细菌法快速检测饮用水中黄绿青霉素及毒性评估;（3）饮用水中黄绿青霉素的去除。主要结果如下:1.利用黄绿青霉素对鲁米诺-过氧化氢-纳米氧化铜化学发光体系的抑制作用检测饮用水中可能出现的突发性污染,并对测定体系的条件进行优化。单因素试验和响应面试验结果表明:在优化的实验条件下,黄绿青霉素检测线性范围0.0053 mg/L,检出限8.2×10-55 mg/L。对质量浓度为0.005 mg/L的黄绿青霉素进行平行测定11次,得到相对标准偏差2.3%,黄绿青霉素加标回收率范围7891%。2.青海弧菌Q67菌液的相对发光强度随着黄绿青霉素浓度的增大而呈线性关系减小,黄绿青霉素浓度在0.00050.01 mg/L范围内线性关系良好（R2>0.98）,线性方程y=-70.516x+0.966。对浓度为0.005 mg/L的黄绿青霉素溶液进行11次平行测定,得到相对标准偏差3.2%,回收率平均值8893%,说明该方法准确性好,精确度高,可应用于实际检测。鳆发光杆菌菌液的相对发光强度随着黄绿青霉素浓度的增大而呈线性关系减小,黄绿青霉素浓度在0.000050.1 mg/L范围内线性关系良好（R2>0.97）,线性方程y=-7.2994x+0.8347。对浓度为0.05 mg/L的黄绿青霉素溶液进行11次平行测定,得到相对标准偏差3.5%,回收率平均值8491%之间,说明该方法准确性好,精确度高,可应用于实际检测。3.紫外线照射、白炽灯照射和粉末活性炭对黄绿青霉素的去除均有良好效果。响应面优化结果表明,粉末活性炭去除黄绿青霉素时,温度20℃、时间11min、活性炭加样量1.1 g/L时去除效果最佳。活性炭吸附结合紫外线近距离照射,可用于饮用水中黄绿青霉素的去除。流动注射化学发光法简便快捷、实用性强,可应用于饮用水中黄绿青霉素突发性污染在线快速检测。建立黄绿青霉素的发光细菌检测的分析方法,可用于饮用水中黄绿青霉素的快速检测、早期安全预警及黄绿青霉素的毒性研究。饮用水一旦发生黄绿青霉素突发性污染,可用粉末活性炭进行快速去除。
孙涛[5]（2017）在《黄绿青霉素对肺癌细胞增殖和凋亡的调节作用》文中认为目的观察黄绿青霉素（Citreoviridin,CIT）对A549肺癌细胞增殖和凋亡的调节作用。方法1.用含10%胎牛血清的1640培养基在体外培养A549肺癌细胞,当细胞生长到对数期时用CIT染毒,随机分为对照组（0 mg/L）、低浓度组（0.3mg/L）、高浓度组（0.6mg/L）,分别在染毒处理24h、48h、72h后,用MTT法检测各组细胞的相对增殖率,比较不同染毒剂量和不同作用时间,肺癌细胞的相对增殖率差异,并选择最佳的染毒时间进行荧光素PI标记。2.用上述方法培养A549肺癌细胞,当细胞生长到对数期时用CIT染毒,随机分为对照组（0mg/L）、低浓度组（0.3mg/L）、高浓度组（0.6mg/L）,根据上一步选择最佳的染毒测定时间,通过荧光素PI标记法检测各组细胞的细胞周期分布数据,比较不同染毒剂量细胞周期分布差异。3.用上述方法培养A549肺癌细胞,当细胞生长到对数期时用CIT染毒,随机分为对照组（0mg/L）、低浓度（0.3mg/L）、高浓度（0.6mg/L）,分别染毒处理24h、48h后,用Annexin V-FITC/PI双染标记法检测,比较不同染毒剂量和不同作用时间,CIT诱导A549肺癌细胞发生凋亡的差异。结果1.MTT法检测结果显示,用CIT染毒24h后各组相对增殖率分别为对照组（1.000±0.076%）,低剂量组（0.814±0.104%）,高剂量组（0.753±0.097%）,低剂量组、高剂量组低于对照组（P<0.05）;CIT染毒48h后各组相对增殖率分别为照组（1.000±0.010%）,低剂量组（0.840±0.045%）,高剂量组（0.783±0.043%）,低剂量组、高剂量组低于对照组（P<0.05）,同时高剂量组低于低剂量组（P<0.05）;CIT染毒72h后各组相对增殖率分别为照组（1.000±0.066%）,低剂量组（0.890±0.054%）,高剂量组（0.809±0.074%）,低剂量组、高剂量组低于对照组（P<0.05）,同时高剂量组低于低剂量组（P<0.05）;根据结果选择染毒后24h作为荧光素PI标记法测定的时间点。2.荧光素PI标记法检测结果显示,用CIT染毒24h后显示G0/G1期细胞数百分比:对照组（62.27±1.72%）,低剂量组（68.93±1.03%）,高剂量组（73.92±1.81%）,低剂量组、高剂量组高于对照组（P<0.05）,同时高剂量组高于低剂量组（P<0.05）;S期细胞数百分比:对照组（8.41±0.58%）,低剂量组（7.30±0.83%）,高剂量组（5.09±1.95%）,高剂量组低于对照组（P<0.05）;G2期细胞数百分比:对照组（29.32±1.39%）,低剂量组（23.77±1.19%）,高剂量组（20.99±2.90%）,低剂量组、高剂量组低于对照组（P<0.05）,同时高剂量组低于低剂量组（P<0.05）。3.Annexin V-FITC/PI双染标记的方法结果,24h早期凋亡率:对照组（1.57±0.39%）,低剂量组（4.27±0.76%）,高剂量组（5.66±0.53%）,低剂量组、高剂量组高于对照组（P<0.05）,同时高剂量组高于低剂量组（P<0.05）;24h晚期凋亡率:对照组（2.19±044%）,低剂量组（3.19±0.83%）,高剂量组（4.74±2.66%）,各组之间没有显着差异;48h早期凋亡率:对照组（3.76±0.81%）,低剂量组（7.46±0.23%）,高剂量组（10.40±2.5%）,低剂量组、高剂量组高于对照组（P<0.05）;48h晚期凋亡率:对照组（3.75±1.21%）,低剂量组（5.01±1.59%）,高剂量组（6.77±1.68%）,低剂量组、高剂量组高于对照组（P<0.05）,同时高剂量组高于低剂量（P<0.05）;24h与48h总凋亡相比:48h低剂量组总凋亡率高于24h低剂量组总凋亡率（P<0.05）,48h高剂量组总凋亡率与24h高剂量组总凋亡率没有显着性差异（P>0.05）。结论1.CIT抑制了A549肺癌细胞的增殖,且随剂量的增高作用增强。2.CIT通过将A549细胞周期阻滞在G0/G1期来抑制细胞增殖。3.CIT可诱导A549肺癌细胞凋亡,且随剂量增高作用增强。
陈秀芳[6]（2016）在《酵母相马尔尼菲青霉黑素的生成和TYR基因的关系及次级代谢产物的研究》文中研究表明目的（1）探索LDOPA对酵母相马尔尼菲青霉（Penicillium marneffei,PM）的作用,从观察培养基的颜色、菌落形态和颜色、光学显微镜下形态和荧光定量PCR仪检测目的基因酪氨酸酶基因（TYR）表达的角度初步探讨不同培养基在有或无L-DOPA对酵母相马尔尼菲青霉的作用。（2）建立同时测定黄曲霉素、胶霉素、交沙霉素3种有效成分的量的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）分析方法及检测酵母相马尔尼菲青霉（PM）能否产生如黄曲霉素、胶霉素、交沙霉素等次级代谢产物。方法（1）将2株马尔尼菲青霉菌株分别在含和不含1.0 mM L-DOPA的沙氏培养基、脑心浸汁培养基（BHI）以及含10%的胎牛血清的高糖固体培养基（DMEM）进行酵母相避光培养3天,观察菌落、培养基颜色及镜下观察形态学的变化以及荧光定量PCR测定酪氨酸酶基因（TYR）的表达。（2）采用Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 （2.1×50mm,1.8μm）色谱柱；选择含甲醇（A）-0.1%甲酸的水（B）为流动相,体积流量为0.3mI/ min。在电喷雾电离正离子模式下采用MRM检测。将PM标准株FRR和临床人分离株GXMUDXR分别在含10%的胎牛血清的高糖液体培养基进行酵母相培养7天,经前处理后检测黄曲霉素、胶霉素、交沙霉素这三种有效成分。结果（1）2株受试菌株在沙氏固体培养基中37。C避光培养3天,含L-DOPA和不含L-DOPA的PM菌株菌落颜色均无明显改变；（2）2株受试菌株在脑心浸膏培养基（BHI）上37。C避光培养3天,不含L-DOPA培养基上的菌落较含L-DOPA培养基的菌落颜色浅；（3）2株受试菌株在含10%胎牛血清高糖固体培养基上37。C避光培养3天,不含L-DOPA培养基上的菌落颜色浅,而含L-DOPA培养基上的菌落颜色变黑,且含L-DOPA不含PM菌株的培养基颜色也变黑；（4）光学显微镜下观察结果：2株受试菌株在沙氏培养基、含和不含L-DOPA的BHI培养基、含和不含L-DOPA的10%胎牛血清的DMEM上37。C培养3天后,各个培养基上的PM酵母细胞的形态、大小基本一致,均未见到被染成黑色；（5）荧光定量PCR检测酪氨酸酶基因的表达：a.BHI培养基组：含和不含L-DOPA的竹鼠分离株PM及临床人分离株PM中TYR基因的表达量均高于同组沙氏培养基组,差异有统计学意义（P<0.05）；且同组中含L-DOPA的BHI组中TYR的表达量高于不含L-DOPA的BHI组,差异有统计学意义（P<0.05）。b.含10%胎牛血清的DMEM组：结果显示含和不含L-DOPA的标准株PM及临床株PM中TYR基因的表达量与同组沙氏培养基组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。且同组含和不含L-DOPA的10%胎牛血清的DMEM组相互比较,两者TYR的表达差异无统计学意义（P>0.05）。（5）与标准品比较,酵母相马尔尼菲青霉菌未检测出与黄曲霉素、胶霉素类似的目标峰,但各个样品甚至是空白对照,均出现与交沙霉素类似的目标峰,但强度远远小于标准品。结论（1）PM菌株在含有L-DOPA的BHI培养基中可以利用L-DOPA产生黑色素。（2）在BHI培养基中添加外源L-DOPA能提高PM菌株酪氨酸酶基因的表达。（3）本实验未能检出马尔尼菲青霉菌中黄曲霉素、胶霉素、交沙霉素这三种次级代谢产物成分。
应永飞[7]（2014）在《碳纳米管分散固相萃取结合液质联用测定饲料中β-受体激动剂、霉菌毒素和抗菌类药物的研究》文中研究表明饲料中p-受体激动剂、抗菌类药物等非法添加以及饲料中霉菌毒素污染等三大影响饲料安全的最主要问题,影响到肉、蛋、奶等动物产品的品质,制约了畜牧业的可持续发展,并危害到消费者的健康。因此,建立饲料中三大类主要化学污染物的检测方法,在此基础上对饲料质量进行监测和控制具有重要意义。但是,由于饲料样品基质的复杂性,已建立的饲料中化学污染物检测方法存在前处理过程复杂、单组分检测费时费力、结果准确性差、检测效率低、前处理成本很高、有机试剂用量大等问题。本研究旨在建立饲料中p-受体激动剂、霉菌毒素、抗菌类药物等三大类主要化学污染物快速、高效、多组分同步检测技术,有效保障饲料质量安全。本论文以玉米赤霉烯酮类霉菌毒素（雷索酸内酯）、p-受体激动剂、磺胺类和喹诺酮类药物等为研究对象,深入研究了饲料中化学污染物多组分同步检测的样品前处理技术和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析方法。在样品前处理方法研究中使用了近年来引起广泛关注的碳纳米管材料和分散固相萃取技术,有效提高了前处理效率。仪器分析过程中采用UPLC进行快速分离,用串联质谱进行定性、定量检测。同时,运用同位素稀释定量技术进行校准,提高了定量方法的准确度和精密度。主要研究内容及结果如下：1.β-受体激动剂质谱裂解机理研究本研究以克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等为代表,阐明p-受体激动剂在正离子软电离模式下的裂解机理。采用AB SCIEX5500QTRAP三重四级杆电喷雾质谱仪,运用IDA-EPI技术,对p-受体激动剂类化合物裂解规律进行研究解析。结果表明,由于β-受体激动剂均属于苯乙醇胺类化合物,但苯环上及氨基连接官能团有差异,所以它们的ESI-MS/MS行为存在着相似性和差异性。在ESI正电离模式下p-受体激动剂容易获得H+而形成[M+1]+准分子离子峰,该结构易丢失水分子（H20）,继而与氨基结构相连的碳氮键（-C-N-）键发生断裂,形成与苯环共轭的（Ph-CH=CH-NH+-）离子结构。本研究为同类化合物的结构解析研究提供可靠的依据,为跟踪新型β-受体激动剂提供有力手段,具有较强的理论意义和实用价值。2.多壁碳纳米管分散固相萃取结合LC-MS/MS测定饲料中11种β-受体激动剂研究采用多壁碳纳米管（MWCNTs）为吸附剂,建立分散固相萃取（dSPE）净化、超高效液相色谱-串联质谱测定饲料中11种p-受体激动剂（克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、苯乙醇胺A、氯丙那林、妥布特罗、西马特罗、特布他林、马布特罗、班布特罗和喷布特罗）的方法。本研究对样品前处理方法进行了系统优化,包括MWCNTs用量和类型、提取液pH值、MWCNTs提取时间以及洗脱液体积等,以提高检测方法通量和灵敏度。以0.1%甲酸溶液和甲醇为梯度洗脱流动相,采用ESI+模式电离,在MRM模式下建立了LC-MS/MS测定方法,内标法校准定量。研究结果表明,11种p-受体激动剂在0.1-20μg/L浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数r2均大于0.997,猪配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料样品中LOQ为0.05-0.48μg/kg；添加水平为0.5-100μg/kg时,11种p-受体激动剂的回收率在89.6%-112.9%,RSD均小于15%。该检测方法与农业部1486号公告的方法进行了比较,两种方法检测结果一致,说明新建立的多壁碳纳米管分散固相萃取结合LC-MS/MS测定饲料中11种β-受体激动剂的方法操作简便、稳定性好、准确度和精密度高。3.多壁碳纳米管结合LC-MS/MS测定饲料中6种玉米赤霉烯酮类霉菌毒素研究以多壁碳纳米管（MWCNTs）为吸附剂,建立分散固相萃取（dSPE）净化、液相色谱-串联质谱测定饲料中6种玉米赤霉烯酮类霉菌毒素（α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮）的方法。本研究对样品前处理方法进行了优化,包括提取液pH值、MWCNTs提取时间与MWCNTs用量和类型以及洗脱液体积等,以提高检测方法通量和灵敏度。以水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用ESI-模式电离,在MRM模式下建立LC-MS/MS测定方法,内标法校准定量。研究结果表明,6种玉米赤霉烯酮类霉菌毒素在1.0-500μg/L浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数r2均大于0.9991；LOD为0.12-0.27μg/kg,LOQ为0.40-0.90μg/kg;在1.0μg/kg-500μg/kg添加浓度水平上,猪配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料样品中平均回收率在94.6%-107.2%,批内RSD在2.6%-8.5%之间,批间RSD在4.5%-9.2%之间。将本方法检测结果与农业行业标准NY/T2071的方法进行了比较,两种方法阳性样品检测结果RSD在15%以内,表明新建立的多壁碳纳米管结合LC-MS/MS测定饲料中6种玉米赤霉烯酮类霉菌毒素的方法简便、快速、准确度和精密度高。4.碳纳米管分散固相萃取结合LC-MS/MS测定饲料中22种磺胺类和喹诺酮类药物研究建立多壁碳纳米管（MWCNTs）为吸附剂的分散固相萃取（dSPE）净化、液相色谱-串联质谱测定饲料中22种磺胺类和喹诺酮类药物（磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹恶林、磺胺氯哒嗪、氟甲喹、诺氟沙星、环丙沙星、氟罗沙星、奥比沙星、洛美沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、二氟沙星）的方法。本研究对样品前处理方法进行了系统优化,包括MWCNTs用量和类型、提取液pH值、MWCNTs提取时间以及洗脱液体积等,以提高检测方法通量和灵敏度。以0.1%甲酸溶液和乙腈为梯度洗脱流动相,采用ESI+模式电离,在MRM模式下建立了LC-MS/MS测定方法,内标法校准定量。研究结果表明,22种磺胺类和喹诺酮类药物在1.0-1000μg/L浓度范围内呈良好的线性关系,线性相关系数r2均大于0.992,LOD为3.0-10μg/kg, LOQ为10-25μg/kg,猪和鸡的配合饲料、预混合饲料和浓缩饲料中添加水平为0.05-50mg/kg时,其回收率在71.5%-114.7%之间,批内RSD在1.5%-12.5%之间。利用该方法对本中心保留的1份磺胺喹恶啉阳性饲料样品进行了检测,并与GB/T19542的方法进行了比较,两种方法检测结果一致,表明新建立的碳纳米管分散固相萃取结合LC-MS/MS测定饲料中22种磺胺类和喹诺酮类药物的方法检测效率高、成本低、结果准确可靠。
金妮[8]（2014）在《抗黄绿青霉素单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的建立》文中研究表明黄绿青霉素（Citreoviridin,CIT）是一种主要由黄绿青霉菌（Penicllium citreonigrum）分泌产生的具有毒性的次级代谢产物,广泛的存在于谷类农作物及其相关的农副产品中。它具有心脏血管毒性、神经毒性、遗传毒性和致畸性。但是目前国内外还没有报道基于抗CIT单克隆抗体的免疫检测方法。本研究以建立一种快速有效的免疫检测方法为目的,制备特异性强、亲和力高的抗CIT单克隆抗体。通过琥珀酸酐和碳二亚胺两步法成功地制备了人工完全抗原CIT-KLH和CIT-BSA。以CIT-KLH作为免疫抗原免疫Balb/c小鼠,CIT-BSA作为检测抗原包被酶标板,检测和筛选抗CIT的抗体。取抗血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后来制备杂交瘤细胞。两次细胞融合实验的融合率均为100%,阳性率分别为3.77%和5.0%。通过亚克隆最终获得8株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为1A12、3B4、3H6、8D8、8G5、6B8、8D6和10C9,其中8D8亚型为IgG1,其他7株的都属于IgM。将8D8单克隆细胞株经过扩大培养,体内诱生腹水,采用辛酸-硫酸铵法纯化获得较纯的IgG抗体,其蛋白浓度为6.6mg/mL,效价为1:1.28×105,亲和力为4.57×108L/mol。以优化条件建立ic-ELISA标准曲线的检测线性范围为11.02～2370.48ng/mL,最低检出限为11.86 ng/mL,批间和批内样品回收率分别为86.83%～92.28%,85.0%～95.72%,变异系数均小于5%。本研究通过基于抗CIT单克隆抗体建立ic-ELISA方法最佳工作条件为:包被原CIT-BSA最佳工作浓度为0.5 μg/mL,包被时间为37℃,2 h或者4℃过夜;最佳封闭液为5%PBSM,37℃封闭2 h;单克隆抗体最佳稀释度为1:40000;酶标二抗（HRP-IgG）的最佳稀释度1:8000;加底物显色时间为10 min。本研究获得的单克隆抗体为快速检测出CIT奠定了坚实的基础,可用于制备基于单克隆抗体ELISA检测试剂盒、胶体金快速检测试纸条和免疫传感器法等。
阙善进[9]（2012）在《黄绿青霉素人工抗原的制备及酶联免疫吸附法的建立》文中研究说明黄绿青霉素（CIT）是主要由黄绿青霉菌分泌产生的一种具有很强生物活性的次级代谢产物，黄绿青霉菌是很容易引起粮食作物和饲料发生霉变的真菌之一。人类或者动物摄入被真菌毒素污染的食品，或者通过口腔呼吸系统吸入和皮肤接触等都可能引发多种症状，如幻觉、呕吐、出血、皮炎、神经受损，甚至死亡。在很多科学研究表明，毒素在体内积累后会导致畸形、癌症、突变、白细胞缺失等对机体造成伤害，因此世界各国都非常高度重视对食品中毒素残留量的控制与检测。研究出一种具有快速、灵敏、特异、经济、样品的纯度要求不高、适合于大批量样本的检测方法变得极其重要。本为旨在建立CIT的酶联免疫检测法（ELISA）。CIT是一种小分子化合物，不具有免疫原性的半抗原，使得它必须通过与载体蛋白偶联才能获得免疫原性，然后用其免疫刺激小鼠产生抗体。本文通过高碘酸钠氧化法制备了偶联化合物，用作免疫抗原CIT-BSA和包被抗原CIT-KLH。通过紫外扫描、红外扫描、SDS-PAGE等方法对偶联产物验证分析，随后免疫BALB/c小鼠，制备了抗体，并对ELISA进行条件的优化。根据ELISA方法得到酶标二抗最佳稀释倍数为1:7000，ELISA甲醇溶剂浓度为5%。CIT抗体的IC50是0.56μg/ml，抗体对其他真菌毒素的交叉反应率均小于0.05%，显示出较好的特异性。CIT在大米粉中的添加回收率在70.5±0.08%95.4±0.18%之间，批间变异系数小于18.7%，批内变异系数小于18.3%。通过本课题的研究，我们成功的制备了CIT的人工完全抗原，并且制备了相应的抗体，利用这些抗体，建立了酶联免疫吸附法，为最终开发单克隆抗体、单链抗体为依托的检测试剂盒与胶体金检测卡奠定基础。
张萍,王甫丽,陈丁龙,张东红,郧海丽[10]（2010）在《高效液相色谱在农副产品检测中的应用》文中研究指明高效液相色谱由于其高效、高灵敏度和分析速度快等特点,在农副产品检测中得到了广泛应用.笔者对高效液相色谱技术在农副产品检测中检测营养成分、农药残留、细菌毒素和兽药残留及其发展前景进行了综述和展望.
二、黄绿青霉素的高效液相色谱检测法的改进（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、黄绿青霉素的高效液相色谱检测法的改进（论文提纲范文）
（1）赭曲霉毒素A饮用水突发污染在线监测及生物毒性评估（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 饮用水安全 |
| 1.2 饮用水突发性污染 |
| 1.3 赭曲霉毒素 A 的特性、来源及危害 |
| 1.4 赭曲霉毒素A检测方法 |
| 1.5 流动注射化学发光法 |
| 1.6 发光细菌法 |
| 1.7 论文研究依据、内容及意义 |
| 1.8 技术路线 |
| 第二章 赭曲霉菌培养及产毒特性研究 |
| 2.1 材料与设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 流动注射化学发光法在线监测饮用水OTA突发污染 |
| 3.1 材料与设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 发光细菌法快速监测OTA及生物毒性评估 |
| 4.1 材料与设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 饮用水中赭曲霉毒素A去除 |
| 5.1 材料与设备 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 硕士在读期间学术成果及学术交流 |
| 作者简介 |
| 导师 |
| 致谢 |
（2）玉米赤霉烯酮降解菌株的分离、鉴定及降解特性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 霉菌毒素与人类疾病 |
| 1.2 玉米赤霉烯酮的结构与理化性质 |
| 1.3 玉米赤霉烯酮的分析检测 |
| 1.3.1 气相色谱 |
| 1.3.2 高效液相色谱法 |
| 1.3.3 液质联用法 |
| 1.3.4 薄层色谱法 |
| 1.3.5 酶联免疫吸附法 |
| 1.4 饲料中ZEN的污染状况 |
| 1.5 ZEN的毒性 |
| 1.5.1 生殖毒性 |
| 1.5.2 免疫毒性 |
| 1.5.3 肝肾毒性 |
| 1.5.4 致癌性 |
| 1.6 ZEN的解毒方法及降解机理 |
| 1.6.1 物理吸附法 |
| 1.6.2 生物降解法 |
| 1.6.3 ZEN的降解机理 |
| 1.7 本论文的选题依据和研究内容 |
| 2 玉米赤霉烯酮降解菌的分离及鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 样品和培养基 |
| 2.2.2 主要试剂及仪器设备 |
| 2.2.3 HPLC检测ZEN的条件 |
| 2.2.4 ZEN标准曲线的绘制 |
| 2.2.5 菌株的筛选 |
| 2.2.6 菌株降解ZEN能力的测定 |
| 2.2.7 菌株的分类学鉴定 |
| 2.3 ZEN降解菌株的筛选及鉴定 |
| 2.3.1 标准曲线的绘制 |
| 2.3.2 ZEN降解菌株筛选 |
| 2.3.3 菌株ZEN降解率测定 |
| 2.3.4 ZEN降解菌株的鉴定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 影响NF-PJ-5 号菌降解ZEN能力因素的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 培养基及溶液 |
| 3.2.2 NF-PJ-5 号菌株菌液浓度与OD600值关系的测定 |
| 3.2.3 温度对NF-PJ-5 号菌降解ZEN能力的影响 |
| 3.2.4 pH对 NF-PJ-5 号菌降解ZEN能力的影响 |
| 3.2.5 菌液浓度对NF-PJ-5 号菌降解ZEN能力的影响 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 NF-PJ-5 号菌株菌液浓度与OD600值关系结果 |
| 3.3.2 温度对NF-PJ-5 号菌降解ZEN能力的影响结果 |
| 3.3.3 pH对 NF-PJ-5 号菌降解ZEN能力的影响结果 |
| 3.3.4 不同菌液浓度对NF-PJ-5 号菌降解ZEN能力的影响结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 NF-PJ-5 号菌株的培养上清液、细胞壁及内容物对ZEN的降解能力 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 培养基及溶液 |
| 4.2.2 NF-PJ-5 号菌的培养上清液、细胞壁及内容物的ZEN降解率测定 |
| 4.2.3 NF-PJ-5 号菌细胞壁对ZEN吸附情况研究 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 菌株清除ZEN机理的初步研究 |
| 4.3.2 菌株细胞壁吸附情况 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（3）选择性吸附磺胺甲恶唑的磁性分子印迹材料的制备及性能（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题来源与研究背景 |
| 1.2 抗生素磺胺甲恶唑的简介 |
| 1.2.1 磺胺甲恶唑的性质及应用现状 |
| 1.2.2 磺胺甲恶唑在水环境中的分布现状 |
| 1.2.4 磺胺甲恶唑的检测方法 |
| 1.2.5 磺胺甲恶唑环境样品的前处理方法 |
| 1.3 磁性分子印迹技术的简介 |
| 1.3.1 分子印迹技术 |
| 1.3.2 磁性分子印迹技术 |
| 1.4 课题研究的意义及主要内容 |
| 1.4.1 课题研究的目的和意义 |
| 1.4.2 课题主要研究内容 |
| 1.4.3 技术路线 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 目标污染物的性质 |
| 2.1.2 实验所需化学试剂 |
| 2.1.3 实验所需仪器 |
| 2.2 检测方法 |
| 2.3 磺胺甲恶唑磁性分子印迹材料的合成方法 |
| 2.3.1 分子印迹材料的合成方法 |
| 2.3.2 磁性纳米Fe_3O_4 的合成方法 |
| 2.3.3 磁性Fe_3O_4@SiO_2@MPS复合材料的制备 |
| 2.3.4 磁性分子印迹材料的制备 |
| 2.3.5 制备条件的优化方法 |
| 2.4 材料表征方法 |
| 2.4.1 傅里叶红外光谱(FTIR) |
| 2.4.2 扫描电镜(SEM) |
| 2.5 MMIPS和 MNIPS吸附及解吸条件优化方法 |
| 2.5.1 吸附和解吸方法 |
| 2.5.2 吸附条件的优化方法 |
| 2.5.3 解吸条件的优化方法 |
| 2.6 MMIPS和 MNIPS吸附性能评价 |
| 2.6.1 吸附动力学模型拟合研究方法 |
| 2.6.2 吸附热力学模型拟合研究方法 |
| 2.6.3 再生实验方法 |
| 2.7 选择吸附性实验方法 |
| 2.7.1 单体系吸附选择性实验研究方法 |
| 2.7.2 二元体系吸附选择性实验研究方法 |
| 2.7.3 多元体系吸附选择性实验研究方法 |
| 2.7.4 环境中常见物质干扰影响研究方法 |
| 第3章 磺胺甲恶唑磁性分子印迹材料制备与表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 磺胺甲恶唑磁性分子印迹聚合物制备方法的优化 |
| 3.2.1 目标物与功能单体的配比优化 |
| 3.2.2 目标物与交联剂的配比优化 |
| 3.2.3 引发剂投加量的优化 |
| 3.2.4 溶剂投加量的优化 |
| 3.2.5 反应温度的优化 |
| 3.3 磺胺甲恶唑磁性分子印迹聚合物的表征 |
| 3.3.1 傅里叶红外光谱表征 |
| 3.3.2 扫描电镜表征 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 磁性分子印迹聚合物吸附磺胺甲恶唑性能 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 磺胺甲恶唑磁性分子印迹聚合物吸附条件的优化 |
| 4.2.1 吸附时间的优化 |
| 4.2.2 吸附温度的优化 |
| 4.2.3 吸附pH的优化 |
| 4.3 磺胺甲恶唑磁性分子印迹聚合物解吸条件的优化 |
| 4.3.1 解吸剂种类的优化 |
| 4.3.2 解吸时间的优化 |
| 4.3.3 解吸次数的优化 |
| 4.4 磁性分子印迹聚合物吸附磺胺甲恶唑的动力学分析 |
| 4.5 磁性分子印迹聚合物吸附磺胺甲恶唑的热力学分析 |
| 4.5.1 Langmuir吸附等温方程拟合 |
| 4.5.2 Freundlich吸附等温方程拟合 |
| 4.6 磁性分子印迹聚合物再生性实验 |
| 4.7 本章小结 |
| 第5章 磁性分子印迹聚合物的选择吸附性 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 磁性分子印迹聚合物在单体系中的选择吸附性 |
| 5.3 磁性分子印迹聚合物在二元体系中的选择吸附性 |
| 5.3.1 MMIPs和 MNIPs在 SMX与 SAN二元体系中的吸附性能 |
| 5.3.2 MMIPs和 MNIPs在 SMX与 SD二元体系中的吸附性能 |
| 5.3.3 MMIPs和 MNIPs在 SMX与 SM2 二元体系中的吸附性能 |
| 5.3.4 MMIPs和 MNIPs在 SMX与 BPA二元体系中的吸附性能 |
| 5.4 磁性分子印迹聚合物在多元体系中的选择吸附性 |
| 5.5 环境中常见干扰物质对磺胺甲恶唑选择吸附性影响 |
| 5.5.1 腐殖酸对选择吸附性的影响 |
| 5.5.2 阴阳离子对选择吸附性的影响 |
| 5.6 磁性分子印迹聚合物在实际环境中的应用 |
| 5.7 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）黄绿青霉素饮用水突发性污染在线监测及毒性评估（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 饮用水安全现状及突发性水体污染事件 |
| 1.2 天然毒素及危害 |
| 1.3 黄绿青霉素来源、特性和危害 |
| 1.4 黄绿青霉素检测 |
| 1.5 饮用水在线检测技术 |
| 1.6 流动注射化学发光法 |
| 1.7 发光细菌 |
| 1.8 论文研究目的、内容和意义 |
| 第二章 流动注射化学发光法对饮用水中黄绿青霉素的在线检测 |
| 2.1 材料和设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 发光细菌法快速检测黄绿青霉素及毒性评估 |
| 3.1 材料和设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 饮用水中黄绿青霉素去除 |
| 4.1 材料与设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 全文讨论 |
| 5.1 流动注射化学发光法检测饮用水中黄绿青霉素 |
| 5.2 发光细菌法检测饮用水中黄绿青霉素及毒性评估 |
| 5.3 饮用水中黄绿青霉素的去除 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 硕士在读期间发表论文、作者及导师简介 |
| 致谢 |
（5）黄绿青霉素对肺癌细胞增殖和凋亡的调节作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附论文一篇 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（6）酵母相马尔尼菲青霉黑素的生成和TYR基因的关系及次级代谢产物的研究（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 主要英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 酵母相马尔尼菲青霉黑素的生成和TYR基因的关系 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 展望 |
| 第二部分 酵母相马尔尼菲青霉次级代谢产物的研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（7）碳纳米管分散固相萃取结合液质联用测定饲料中β-受体激动剂、霉菌毒素和抗菌类药物的研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 饲料中化学污染物的种类及危害 |
| 1.1 违禁药物和非法添加物 |
| 1.2 霉菌毒素 |
| 1.3 抗生素和抗菌类药物 |
| 第二节 饲料中化学污染物检测前处理技术 |
| 2.1 固相萃取技术 |
| 2.2 基质固相分散技术 |
| 2.3 免疫亲和色谱技术 |
| 2.4 分散固相萃取技术 |
| 2.5 分子印迹技术 |
| 第三节 饲料中化学污染物的检测方法 |
| 3.1 免疫分析法 |
| 3.2 气相色谱法 |
| 3.3 气相色谱-质谱法 |
| 3.4 高效液相色谱法 |
| 3.5 液相色谱-串联质谱法 |
| 第四节 本研究的目的、意义和研究内容 |
| 4.1 本研究的目的和意义 |
| 4.2 研究内容 |
| 第二章 β-受体激动剂质谱裂解机理研究及饲料中11种β-受体激动剂LC-MS/MS测定 |
| 摘要 |
| 第一节 β-受体激动剂质谱裂解机理探讨 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果与讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第二节 多壁碳纳米管分散固相萃取结合LC-MS/MS测定饲料中11种β-受体激动剂研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 多壁碳纳米管结合LC-MS/MS测定饲料中6种玉米赤霉烯酮类霉菌毒素 |
| 摘要 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 多壁碳纳米管分散固相萃取结合LC-MS/MS测定饲料中22种磺胺类和喹诺酮类药物 |
| 摘要 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 小结、创新点与研究展望 |
| 1 小结 |
| 2 创新点 |
| 3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 作者筒历及取得的科研成果 |
（8）抗黄绿青霉素单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1. 黄绿青霉素研究概况 |
| 1.1 黄绿青霉菌的生长及产毒 |
| 1.2 黄绿青霉素的理化性质 |
| 1.3 黄绿青霉素的毒理作用 |
| 1.4 黄绿青霉素的检测方法 |
| 2. 单克隆抗体技术 |
| 2.1 单克隆抗体研究背景 |
| 2.2 杂交瘤技术原理简述 |
| 2.2.1 动物免疫 |
| 2.2.2 细胞融合 |
| 2.2.3 杂交瘤细胞的筛选 |
| 2.3 单克隆抗体的大量制备 |
| 2.3.1 小鼠体内诱生单克隆抗体 |
| 2.3.2 体外培养法 |
| 2.3.3 体内体外结合法 |
| 2.4 单克隆抗体的应用前景 |
| 2.5 国内外抗体药物产业现状 |
| 3. 本课题的研究目的及意义 |
| 第二章 黄绿青霉素人工完全抗原的制备 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 实验仪器设备 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 黄绿青霉素人工完全抗原的制备 |
| 2.2 人工完全抗原制备的鉴定 |
| 2.2.1 人工完全抗原的薄层层析检测 |
| 2.2.2 BCA法测定偶联物的蛋白浓度 |
| 2.2.3 人工完全抗原的非变性琼脂糖凝胶电泳分析 |
| 2.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定人工完全抗原 |
| 2.2.5 人工完全抗原的紫外光谱扫描检测 |
| 2.2.6 人工免疫抗原的红外光谱扫描检测 |
| 2.2.7 人工完全抗原的免疫效果分析 |
| 3. 实验结果与分析 |
| 3.1 人工完全抗原的合成原理 |
| 3.2 人工完全抗原薄层层析检测结果分析 |
| 3.3 人工完全抗原蛋白浓度测定结果分析 |
| 3.4 人工完全抗原的非变性琼脂糖凝胶电泳结果分析 |
| 3.5 人工完全抗原的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果分析 |
| 3.6 人工完全抗原的紫外分光光度检测结果分析 |
| 3.7 人工完全抗原的红外光谱检测结果分析 |
| 3.8 人工完全抗原的免疫效果结果分析 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 关于人工完全抗原构建的问题 |
| 4.2 关于偶联载体的选择 |
| 4.3 关于完全抗原偶联方法的问题 |
| 4.4 关于人工完全抗原的鉴定 |
| 5. 小结 |
| 第三章 抗黄绿青霉素单克隆抗体的制备 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 小鼠免疫 |
| 2.2 抗血清的采集 |
| 2.3 血清效价的测定 |
| 2.4 iELISA筛选体系的建立 |
| 2.4.1 羊抗鼠HRP-IgG最佳抗体浓度的确定 |
| 2.4.2 最佳包被抗原与抗血清浓度的确定 |
| 2.4.3 最佳封闭液的选择 |
| 2.4.4 一抗的最佳稀释液选择 |
| 2.4.5 二抗的最佳稀释液的选择 |
| 2.5 小鼠血清特异性的检测 |
| 2.6 细胞的复苏 |
| 2.7 细胞的冻存 |
| 2.8 饲养细胞的制备 |
| 2.9 骨髓瘤细胞培养 |
| 2.10 细胞融合准备 |
| 2.10.1 制备骨髓瘤细胞 |
| 2.10.2 脾细胞的制备 |
| 2.10.3 细胞融合 |
| 2.11 融合细胞的培养 |
| 2.12 融合细胞的筛选 |
| 2.13 杂交瘤细胞的亚克隆 |
| 2.14 杂交瘤细胞的克隆化 |
| 2.15 单克隆细胞株的扩大培养 |
| 2.16 杂交瘤细胞的冻存 |
| 3. 实验结果与分析 |
| 3.1 免疫抗原的制备 |
| 3.2 血清效价的测定 |
| 3.3 筛选体系的建立 |
| 3.3.1 最佳HRP-IgG酶标二抗的确定 |
| 3.3.2 抗原最佳包被与抗血清浓度的确定 |
| 3.3.3 最佳封闭液的确定 |
| 3.3.4 一抗稀释液的确定 |
| 3.3.5 二抗稀释液的确定 |
| 3.4 小鼠血清的特异性检测 |
| 3.5 细胞融合及筛选 |
| 3.5.1 融合前细胞的培养及观察 |
| 3.5.2 杂交瘤细胞的培养与观察 |
| 3.5.3 细胞克隆化培养 |
| 3.5.4 杂交瘤细胞的筛选结果 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 动物免疫 |
| 4.2 细胞融合注意事项 |
| 4.3 杂交瘤细胞的冻存和复苏 |
| 5. 小结 |
| 第四章 抗黄绿青霉素单克隆抗体的鉴定 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 实验动物与细胞 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 单克隆抗体亚类鉴定 |
| 2.2 杂交瘤细胞培养上清效价测定 |
| 2.3 细胞染色体分析 |
| 2.4 小鼠体内诱生抗体 |
| 2.5 单克隆抗体效价的测定 |
| 2.6 单克隆抗体的纯化 |
| 2.7 用SDS-PAGE检测纯化抗体纯度 |
| 2.8 抗体的亲和力测定 |
| 2.9 腹水纯化前后的单克隆抗体浓度的测定 |
| 2.10 单抗特异性测定 |
| 3. 实验结果与分析 |
| 3.1 单克隆抗体的亚类鉴定 |
| 3.2 杂交瘤细胞培养上清效价测定 |
| 3.3 细胞染色体结果分析 |
| 3.4 单克隆抗体的纯化结果分析 |
| 3.5 腹水纯化前后蛋白浓度测定 |
| 3.6 腹水纯化前后的效价测定 |
| 3.7 抗体亲和力测定 |
| 3.8 单抗特异性测定 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 单克隆抗体亚类 |
| 4.2 抗体纯化 |
| 5. 小结 |
| 第五章 黄绿青霉素ELISA检测方法的建立 |
| 1. 材料 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 HRP-IgG酶标二抗最佳浓度的确定 |
| 2.2 最佳包被抗原浓度与抗体工作浓度的确定 |
| 2.3 抗原包被条件的确定 |
| 2.4 最佳封闭液和封闭时间的选择 |
| 2.5 一抗作用方式的确定 |
| 2.6 二抗作用时间的确定 |
| 2.7 显色时间的确定 |
| 2.8 绘制竞争标准曲线 |
| 2.9 抗体稳定性的测定 |
| 2.10 玉米样品的前处理 |
| 2.11 精确度的测定 |
| 2.12 样品回收率的测定 |
| 2.13 实际样品的检测 |
| 3. 实验结果分析 |
| 3.1 HRP-IgG酶标二抗最佳稀释度的确定 |
| 3.2 包被原最佳包被浓度及抗体最佳工作浓度的确定 |
| 3.3 抗原包被条件的确定 |
| 3.4 最佳封闭液的选择 |
| 3.5 最佳封闭时间的选择 |
| 3.6 一抗竞争方式的确定 |
| 3.7 酶标二抗最佳作用时间的确定 |
| 3.8 TMB显色时间的确定 |
| 3.9 优化后的间接竞争ELISA参数 |
| 3.10 绘制标准曲线 |
| 3.11 抗体稳定性的测定 |
| 3.12 样品回收率及精密度的测定 |
| 3.13 实际样品的测定 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 关于封闭 |
| 4.2 关于CIT的ELISA检测方法 |
| 4.3 关于标准曲线的拟合 |
| 5. 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在读期间的科研成果 |
| 致谢 |
（9）黄绿青霉素人工抗原的制备及酶联免疫吸附法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 引言 |
| 1 黄绿青霉素的研究概况 |
| 1.1 黄绿青霉菌的生长及其毒素的产生 |
| 1.2 CIT的理化性质 |
| 1.3 CIT的毒理作用与代谢 |
| 1.4 CIT的提取方法及检测技术 |
| 1.4.1 CIT的提取及纯化 |
| 1.4.2 CIT的检测方法 |
| 1.4.2.1 薄层色谱法 |
| 1.4.2.2 高效液相色谱法 |
| 1.4.2.3 气相色谱法 |
| 1.4.2.4 酶联免疫吸附法 |
| 2 抗体技术在检测体系中的应用 |
| 2.1 多克隆抗体 |
| 2.2 单克隆抗体 |
| 2.3 基因工程抗体 |
| 3 预防毒素污染及中毒的可行性控制措施 |
| 4 本研究的目的及意义 |
| 第二章 黄绿青霉素人工免疫抗原的制备与鉴定 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验材料与试剂 |
| 1.2 实验仪器设备 |
| 1.3 主要缓冲溶液的配置（见附录） |
| 2 实验方法 |
| 2.1 过碘酸盐氧化法制备人工抗原 |
| 2.2 偶联产物的透析 |
| 2.3 人工免疫抗原的鉴定 |
| 2.3.1 BCA 法蛋白浓度的测定 |
| 2.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定人工免疫抗原 |
| 2.3.3 紫外光谱扫描仪检测偶联产物 |
| 2.3.4 红外光谱扫描仪检测偶联产物 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 人工免疫抗原浓度的测定 |
| 3.2 人工免疫抗原的扫描检测 |
| 3.2.1 人工免疫抗原紫外光谱扫描检测 |
| 3.2.2 人工免疫抗原红外光谱扫描检测 |
| 3.2.3 人工免疫抗原SDS-PAGE检测 |
| 4 讨论 |
| 第三章 抗CIT抗体的制备及ELISA免疫学方法的建立 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验材料与试剂 |
| 1.2 实验仪器设备 |
| 1.3 主要缓冲溶液的配置（见附录） |
| 2 实验方法 |
| 2.1 BALB/c 小鼠的处理及免疫途径 |
| 2.2 抗血清效价的测定 |
| 2.2.1 最佳酶标二抗浓度的分析 |
| 2.2.2 最佳包被抗原CIT-KLH浓度的测定（方阵法） |
| 2.2.3 甲醇对ELISA的影响 |
| 2.2.4 小鼠血清效价的测定 |
| 2.3 抗CIT血清灵敏度的测定 |
| 2.4 抗CIT交叉反应率的测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 间接非竞争 ELISA 确定最佳羊抗鼠-HRP 酶标二抗 |
| 3.2 最佳包被抗原和抗血清工作浓度的选择 |
| 3.3 甲醇浓度对 ELISA 的影响 |
| 3.4 血清效价的测定 |
| 3.5 抗 CIT血清灵敏度分析 |
| 3.6 抗 CIT血清特异性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 免疫动物的选择 |
| 4.2 BALB/c 小鼠的免疫 |
| 4.3 人工完全抗原的制备 |
| 第四章 CIT的加标回收及抗体在实际体系中的应用 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验材料与试剂 |
| 1.2 实验仪器设备 |
| 1.3 主要缓冲溶液的配置（见附录） |
| 2 实验方法 |
| 2.1 ELISA 标准曲线的建立 |
| 2.2 加标回收率和变异系数的测定 |
| 2.2.1 CIT标准品的添加 |
| 2.2.2 CIT的提取 |
| 2.2.3 CIT的 HPLC 检测 |
| 2.2.4 回收率和变异系数的测定 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 ELISA 标准曲线的建立 |
| 3.2 样品中 CIT的提取及检测 |
| 3.3 添加 CIT回收率及变异系数的测定 |
| 4 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录 1 试剂配制 |
| 附录 2 图表 |
（10）高效液相色谱在农副产品检测中的应用（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 利用高效液相色谱分析粮食、果蔬中的营养成分 |
| 2 利用高效液相色谱检测粮食、果蔬中的农药残留 |
| 3 利用高效液相色谱测定粮食中的细菌毒素 |
| 4 利用高效液相色谱检测畜肉、禽肉中的兽药残留 |
| 5 结语 |
四、黄绿青霉素的高效液相色谱检测法的改进（论文参考文献）
- [1]赭曲霉毒素A饮用水突发污染在线监测及生物毒性评估[D]. 李梁. 暨南大学, 2020(03)
- [2]玉米赤霉烯酮降解菌株的分离、鉴定及降解特性的研究[D]. 金博文. 大连理工大学, 2020(02)
- [3]选择性吸附磺胺甲恶唑的磁性分子印迹材料的制备及性能[D]. 何旭萌. 哈尔滨工业大学, 2019(02)
- [4]黄绿青霉素饮用水突发性污染在线监测及毒性评估[D]. 吴事正. 暨南大学, 2018(12)
- [5]黄绿青霉素对肺癌细胞增殖和凋亡的调节作用[D]. 孙涛. 泰山医学院, 2017(06)
- [6]酵母相马尔尼菲青霉黑素的生成和TYR基因的关系及次级代谢产物的研究[D]. 陈秀芳. 广西医科大学, 2016(02)
- [7]碳纳米管分散固相萃取结合液质联用测定饲料中β-受体激动剂、霉菌毒素和抗菌类药物的研究[D]. 应永飞. 浙江大学, 2014(09)
- [8]抗黄绿青霉素单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的建立[D]. 金妮. 福建农林大学, 2014(05)
- [9]黄绿青霉素人工抗原的制备及酶联免疫吸附法的建立[D]. 阙善进. 福建农林大学, 2012(01)
- [10]高效液相色谱在农副产品检测中的应用[J]. 张萍,王甫丽,陈丁龙,张东红,郧海丽. 石家庄学院学报, 2010(06)