一、毛形线虫各隔离种保姆细胞形成时间的研究（论文文献综述）
王迪[1]（2014）在《消化法检验旋毛虫最适条件的筛选》文中提出旋毛虫病是一种人兽共患寄生虫病，呈世界性分布，目前在一些发展中国家（如泰国、阿根廷及中国等）仍常有暴发，其不但危害人类公共卫生，而且成为影响猪肉生产和食品安全的重大经济问题之一。由于屠宰动物的旋毛虫病检验是目前控制该病向人类传播的唯一有效策略，因此该病的检验已成为世界各国更是世界动物卫生组织（OIE）法规规定的屠宰动物强制性、首检和必检病种（我国始于1956年）。目前已确定旋毛虫有8个种和4个基因型，其检测方法一律采用集样消化法。由于旋毛虫国际消化法采用统一标准和规定，但实际上旋毛虫不同种与基因型存在不同的生物学特征，因此在消化和收集方法上应存在一定的差异。本研究以小鼠为动物模型，利用实验室保存传代的旋毛虫国际标准的8个种和4个基因型感染Balb/c小鼠，感染40天后检测其繁殖能力指数（RCI）和每克肌肉幼虫数（LPG）；进一步分别在4℃和25℃条件下计算不同时间点的回收肌幼虫百分比，比较和分析旋毛虫不同种及基因型对小鼠繁殖能力指数、沉降速率及消化法检验最适条件的差异。结果表明：用消化液原液计数，得出的RCI值更为准确,有望改写现有教科书及相关研究报道中有关旋毛虫繁殖力指数的经典记载；计算不同温度不同时间点收集到的肌幼虫数目与消化液原液总的肌幼虫数目的比值，并计算出回收肌幼虫达到100%时的沉降速率，比较发现旋毛虫不同种及基因型在不同温度和沉降时间上,回收的肌幼虫百分比存在明显差异，确定出适合已知旋毛虫每个种和基因型的消化法检验最适条件。因此，本研究结果为旋毛虫国际消化法的改善提供了重要的参考数据。
付宝权[2]（2012）在《旋毛虫分子鉴定研究与半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的克隆、表达及初步鉴定》文中进行了进一步梳理旋毛虫是一种细胞内寄生性线虫,其生活史可以在同一宿主内完成,宿主感染谱极广,几乎所有的哺乳动物均可感染。旋毛虫感染引起的旋毛虫病是一种危害极其严重的食源性人兽共患寄生虫病。旋毛虫病的病原是毛形属的线虫,目前已经确定有8个种和4个基因型。由于不同旋毛虫种的地理分布、宿主范围、对宿主的感染性与致病性以及宿主对不同虫种的免疫应答等方面存在明显的差异,对旋毛虫分离株的种类鉴定,对旋毛虫病的病原学、免疫学、流行病学、临床学及防治等具有重要意义。半胱氨酸蛋白酶抑制因子是一类广泛存在于生物体的半胱氨酸蛋白酶高效内源性抑制剂。寄生虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂在寄生虫逃避宿主免疫应答、适应寄生生活中发挥着重要作用。寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂具有明显的免疫调控作用,在寄生虫入侵宿主时对宿主免疫应答的抑制起重要作用,是诱导宿主免疫抑制的重要因子之一。本研究应用旋毛虫线粒体基因组核糖体RNA基因作为分子标记,建立了基于多重PCR的基因分型方法,可以鉴定欧亚大陆四个旋毛虫T. spiralis, T. nativa, T. britovi和T. pseudospiralis。以旋毛虫标准株T. spiralis和T. nativa为对照,应用线粒体核糖RNA基因多重PCR技术对我国11个旋毛虫分离株进行了鉴定,并且以5S rRNA基因间隔区（ISR）为分子标记,对其系统进化和聚类进行了分析,结果证实国内11个旋毛虫分离株中,河南邓县、陕西西安、黑龙江哈尔滨、天津、云南保山、云南大理、西藏那曲猪旋毛虫分离株以及内蒙古乌兰浩特犬株Trichinella sp-Tyl等9个分离株可归为T.spiralis;而吉林犬株与内蒙古乌兰浩特犬株Trichinella sp-Ty5分离株为T. nativa。5S rRNA基因间隔区序列分析表明,同一种内不同分离株之间序列高度保守。成功克隆了旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂TsCystatin基因家族的三个成员TsCystatinl, TsCystatin2和TsStefin。其开放阅读框分别为666bp,423bp和294bp,分别编码221,140和97个氨基酸,具有典型的半胱氨酸蛋白酶抑制剂保守结构域,TsCystatin基因家族在旋毛虫各个时期均可转录。在原核系统表达了TsCystatin基因,纯化后的TsCystatin重组蛋白具有蛋白酶抑制活性,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
王丽娜,田建丽,陈晓宁,路国兵,高云[3]（2011）在《旋毛虫属分类及其分类方法的研究进展》文中指出旋毛虫病（Trichinellosis）是由旋毛虫引起的一种严重的人兽共患病。旋毛虫宿主范围广泛,可感染人及150多种哺乳动物,呈全球性分布[1]。据估计,目前全世界旋毛虫病感染者大约有1 100万[2]。近几十年以来,人们一直努力将其控制或消灭,但目前在很多国家仍常有该病的暴发,现已被列入再度
宋铭忻,路义鑫,王守育,张子群,畅丹,韩彩霞[4]（2010）在《旋毛虫Ts43基因在各感染时期的转录水平上差异表达》文中进行了进一步梳理
王守育,路义鑫,张子群,韩彩霞,宋铭忻[5]（2009）在《旋毛虫43ku ES抗原基因表达水平的实时荧光定量PCR检测》文中进行了进一步梳理根据GenBank中旋毛虫43 ku ES抗原基因（Ts43）序列设计引物和探针。以管家基因18 SrRNA为内参基因,对旋毛虫总RNA进行归一化处理,根据循环阈值（Ct值）的变化计算Ts43基因的表达量,建立检测旋毛虫Ts43表达量的实时荧光定量PCR方法,并用该方法测定旋毛虫不同寄生时期Ts43基因的表达水平。结果显示,旋毛虫Ts43基因在各寄生时期均有表达,成虫和新生幼虫Ts43基因的表达水平相对于其他寄生时期的虫体低,该基因表达量在感染后第18 d开始逐渐上升,于感染后第30 d达到高峰,而后开始逐渐下降,但感染后第58 d的虫体Ts43基因表达水平仍高于成虫和新生幼虫。结果表明,Ts43基因的表达与保姆细胞的形成有较大关系。
王守育[6]（2009）在《旋毛虫43ku ES抗原基因与保姆细胞形成相关性的研究》文中研究表明旋毛虫是一种骨骼肌细胞内寄生的线虫,被感染的肌细胞会失去原有的组织特征,并转变成一种新的组织结构——保姆细胞（Nurse Cells,NC）,旋毛虫的排泄分泌（ES）蛋白被认为参与了保姆细胞的形成过程,旋毛虫43ku ES抗原就是其中之一。本研究旨在利用实时荧光定量PCR技术建立旋毛虫43ku ES抗原基因（Ts43）和小鼠骨骼肌细胞调节因子MyoD、Id1基因表达量的测定方法。并用相应方法检测这些基因的表达动态,为深入探讨Ts43基因的表达水平与保姆细胞形成的关系奠定基础。根据GenBank中发表的旋毛虫的Ts43和18S rRNA基因序列,设计引物和探针。以管家基因18S rRNA为内参基因,对旋毛虫总RNA进行归一化处理,利用标准曲线法计算出Ts43基因的表达量。应用该方法检测旋毛虫不同寄生时期（包括成虫、新生蚴、成囊前期幼虫和肌幼虫）Ts43基因的表达动态变化。研究结果表明,旋毛虫在各寄生时期均有Ts43基因的表达,然而成虫和新生蚴Ts43基因的表达水平相对于其它寄生时期的虫体很低,该基因表达量在感染后18d开始逐渐上升,于感染后30d达到高峰,而后开始逐渐下降,但至感染后58d的虫体Ts43基因表达水平仍高于成虫和新生蚴。根据GenBank中发表的小鼠骨骼肌细胞调节因子MyoD、Id1和G3PDH基因序列,设计引物。以管家基因G3PDH为内参基因,对旋毛虫总RNA进行归一化处理,利用△Ct值法计算出MyoD和Id1基因的表达量。应用该方法检测旋毛虫不同寄生时期（感染后7d、14d、18d、22d、26d、30d、34d、38d、48d和58d）和小鼠活体转染Ts43基因前后小鼠骨骼肌细胞MyoD、Id1基因的表达动态变化。研究结果表明,小鼠骨骼肌细胞MyoD、Id1基因在开始感染旋毛虫后,基因表达量持续增加。MyoD基因表达量在感染后26d达到最高值,而Id1基因表达量在感染后22d达到最高值。之后,MyoD基因表达量持续下降,在感染后38d回到正常水平,而Id1基因表达量在达到最高值后迅速下降,在感染后26d时就回到正常水平。小鼠活体转染Ts43基因后会使MyoD和Id1基因的表达量均有增加,但增加的时间不同,MyoD基因在转染后2d表达量显着增加,而Id1基因在转染后6d时才有显着增加。保姆细胞的形成涉及到肌细胞去分化和再分化,而MyoD和Id1基因都是重要的肌细胞调节因子。本研究发现,在小鼠感染旋毛虫以后,小鼠骨骼肌细胞MyoD和Id1基因的表达量都发生了明显的变化。说明MyoD和Id1基因很可能在保姆细胞的形成过程中发挥了重要作用。而小鼠活体转染Ts43基因后会使MyoD和Id1基因的表达量均有增加,则进一步说明43ku ES抗原很可能通过改变细胞调节因子的转录来参与保姆细胞的形成。综上所述,Ts43基因与保姆细胞的形成有较大的关系,而且Ts43基因很可能是通过细胞调节因子来参与保姆细胞形成的。保姆细胞的形成涉及多个ES抗原蛋白和细胞调节因子,要想真正了解保姆细胞的形成机制,还需要对它们进行深入的研究。
姜曰晓,宋铭忻,路义鑫[7]（2007）在《黑龙江省旋毛虫分类研究进展》文中提出近年来,随着遗传学、生物学和分子生物技术的发展及其在寄生虫学方面的应用,国内学者认为黑龙江省旋毛虫有2个种和1个分类地位尚未定的基因型。文章根据黑龙江省旋毛虫形态学、生物学、遗传学、分子生物学等方面表现的不同特性,对其分类学方面的研究加以综述。
路义鑫[8]（2006）在《旋毛虫49ku ES抗原基因核酸疫苗构建及免疫保护作用研究》文中研究说明本研究根据GenBank中已发表的序列（M64242）为参考设计引物,用SDS裂解液配合蛋白酶K的方法提取总RNA,用RT-PCR方法从黑龙江猪、犬、猫旋毛虫,美国猪旋毛虫、旋毛形线虫、本地毛形线虫6个旋毛虫隔离种的成囊前期幼虫及黑龙江猪旋毛虫不同发育时期（成囊前期幼虫、肌幼虫、成虫）虫体中扩增出了带有Kozak序列的49ku ES抗原基因,将目的基因定向克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌TG1。构建了重组质粒pMD18-T-S/EL、pMD18-T-D/EL、pMD18-T-C/EL、pMD18-T-AS/EL、pMD18-T-T1/EL、pMD18-T-T2/EL,pMD18-T-S/ML和pMD18-T-S/AM,经PCR、限制性内切酶EcoRI和BamHI进行单、双酶切鉴定,阳性质粒测序。成功克隆了6个旋毛虫隔离种成囊前期幼虫及猪旋毛虫不同发育时期虫体49ku ES抗原基因。序列分析结果显示:49ku ES抗原基因由起始密码子到终止密码子的核苷酸长为951bp,包含完整的阅读框,编码316个氨基酸残基。所获6个旋毛虫隔离种基因序列经同源性分析表明,6个旋毛虫隔离种与GenBank上发表的序列核苷酸的同源性为97.0%～97.5%,推导氨基酸的同源性为93.4%～94.6%。6个隔离种之间的同源性为99.3%～99.9%,基因的保守性很强,不同隔离种之间的差异很小,其编码蛋白的抗原性也基本相同。所获猪旋毛虫不同发育时期虫体基因序列经同源性分析表明,猪旋毛虫成囊前期期幼虫、肌幼虫和成虫与GenBank中已知序列的同源性分别为,97.5%、97.3%和97.3%;猪旋毛虫不同发育时期虫体之间具有高度同源性,成囊前期幼虫与肌幼虫的核苷酸序列同源性达99.8%,在第535位点上有一个T→C突变,在第665位点上有一个T→C突变;与成虫的同源性同样为99.8%,在第535位点上有一个T→C突变,在848位点上有一个A→G突变;肌幼虫与成虫相比,同源性为99.8%,在第665位C→T、在848位A→G。导致与之相对应的氨基酸序列发生相应的改变。其编码蛋白的抗原性也很稳定,同种不同发育时期虫体之间的差异很小。将真核表达载体pcDNA3.1（+）与pMD18-T-S/EL分别用BamHⅠ和EcoR I双酶切,胶回收纯化后连接。经PCR、酶切鉴定,证明P49-S/EL基因按设计要求已插入表达载体中,构建了真核表达载体pcDNA-P49-S/EL。将家兔随机分为A、B、C组,分别肌肉注射pcDNA3.1（+）、pcDNA3.1-P49-S/EL和pcDNA3.1-P49-S/EL+LipofectamineTM2000。每只家兔100μg/100μl,共免3次,每次间隔1周。首次免疫后第0d、7d、14d、21d、28d、35d、42d、51d采血分离血清用ELISA法检测抗体动态变化,同时检测外周血CD4+、CD8+T细胞动态变化。A组家兔血清在旋毛虫攻击感染后21d（42d）开始检出阳性抗体,然后迅速升高;B组家兔血清在免疫期间一直没能检出阳性抗体,而是在旋毛虫攻击感染后14d（35d）开始检出阳性抗体,而后迅速升高;C组家兔血清在3免后7d（21d）即可检出阳性抗体,旋毛虫攻击感染后,血清抗体OD值有所下降,而后呈逐渐上升趋势,第51d OD450达到2.128,与A、B两组相比差异极显着（P<0.01）。首次免疫后B组与C组家兔外周血CD4+T细胞减少;2次免疫后B组、C组仍然降低,
李冬梅[9]（2004）在《旋毛虫分子分类和49ku结构基因在昆虫细胞中表达研究》文中认为18S rRNA基因是一类编码核糖体小亚基RNA、长约1800bp的DNA序列，由于在生物体内含量较大占80%左右，且在进化过程中非常保守，核苷酸的替换率较低，因而它是探讨生物高级分类群系统演化的难得工具之一。本实验克隆并比较了旋毛虫5个隔离种的18S rRNA基因序列，分析他们的同源性，为旋毛虫的分类和诊断开辟了新的途径。旋毛虫排泄分泌（Excretory-Secretory antigen，ES）抗原，即旋毛虫生长过程中的排泄分泌产物，是旋毛虫检测和免疫的良好抗原。本实验将本地毛形线虫（Trichinella nativa）ES抗原的49ku结构基因构建到杆状病毒表达载体上，并在昆虫细胞中得到表达。本实验以NCBI中U60231序列为参考，设计并合成引物，用改进AGPC方法结合Trizol LS试剂盒提取旋毛虫总RNA，用分光光度计检测RNA的质量。然后用特异性引物, 对旋毛虫标准隔离种旋毛形线虫（Trichinella spiralis）和本地毛形线虫，以及分离自黑龙江省的猪旋毛虫、犬旋毛虫和猫旋毛虫5个旋毛虫隔离种进行RT-PCR扩增目的基因18S rRNA片段，均扩增出1800bp左右的基因片段。将目的基因与克隆载体pMD18-T 连接，转化大肠杆菌JM109中，筛选阳性重组子，并将阳性质粒送有关生物公司测序，同时在哈尔滨兽医研究所生物技术重点实验室也进行测序。用DNAstar和Genedoc软件分析结果显示，18S rRNA 基因的种间同源性很高，均在99%以上。猪旋毛虫与旋毛形线虫的同源性为99.4%，犬旋毛虫与本地毛形线虫的同源性为99.3%，猫旋毛虫与旋毛形线虫比与本地毛形线虫的同源性要略高0.4%。因此，猪旋毛虫与旋毛形线虫，犬旋毛虫与本地毛形线虫的亲缘关系更近，这与传统分类学的结果相符合。本地毛形线虫和猪旋毛虫的18S rRNA基因序列已经提交GeneBank，序列号分别为AY487254和AY497012。这为旋毛虫分类学的研究开创了一种新的方法和思路。根据BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统的供体质粒，设计表达引物，从克隆质粒上扩增本地毛形线虫49ku ES结构基因，酶切后与供体质粒连接，在大肠杆菌中克隆，将克隆有外源基因的供体质粒转化DH10Bac感受态细胞，该细胞含有杆状病毒穿梭载体，供体质粒中的外源基因在辅助质粒编码的转座酶作用下，通过转座而插入杆状病毒基因组中，筛选含有重组质粒的Bacmid DNA，用脂质体介导法转染昆虫细胞获得重组病毒。SDS-PAGE电泳显示表达蛋白为36ku的融合蛋白，将表达产物进行Western blot检测，可以被小鼠旋毛虫的阳性血清识别。实验结果表明，旋毛虫的ES抗原在诊断和免疫方面具有很好的应用前景。
牛廷献[10]（2003）在《旋毛虫新生幼虫期特性基因的克隆、表达及抗原性研究》文中研究表明利用地高辛标记的旋毛虫新生幼虫期特异性核酸探T68对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行筛选，获得1个全长为1609 bp的cDNA分子。该cDNA含有1个1395bp的开放阅读框架（ORF），该ORF编码1个465个氨基酸残基组成的多肽，其分子量理论推导值为50.1kDa，等电点（IP）为9.7。蛋白质序列分析显示，31～64位氨基酸为信号肽序列，N末端前31～64个氨基酸以疏水性为主，而其亲水性区域位于C末端。Blastn同源性分析表明，与其他已知生物基因序列无明显的同源性，为1个新的cDNA分子，命名为：T668，GenBank注册号为：AF331160.1。Blastp蛋白质同源性分析表明，T668与丝氨酸蛋白酶（U62659）同源性达38％。同时，从cDNA文库筛选获得1个克隆G10-7，编码此蛋白C-末端275个氨基酸残基。应用PCR技术，从筛选得到的pBK-CMV-G10-7和pBK-CMV-T668重组质粒中分别扩增到G10-7和不含信号肽序列的T668基因片段，与pMD18-T载体连接后进行克隆，再将其分别克隆于原核表达载体pET28，成功地构建了pETG10-7、pETT668重组表达质粒，将其转化到E.coli表达菌株BL21（DE3）感受态细胞中，经IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果表明，G10-7和T668表达融合蛋白的分子量分别为34kDa和49kDa。薄层扫描结果显示，随诱导时间的延长蛋白表达量逐渐增加，在分别诱导4、5h时，表达量达到高峰，目的蛋白分别占菌体总蛋白的61.7％和34.6％。Western-blotting检测显示，两种蛋白均可被感染旋毛虫阳性猪血清所识别，表明两种蛋白均具有良好的反应原性，为旋毛虫病的早期诊断及防制提供了新的潜在抗原。 为了研究重组蛋白对旋毛虫病诊断的特异性、敏感性及其免疫保护性，以重组蛋白为抗原，并以排泄／分泌（ES）抗原作为检测对照，以兔抗旋毛虫血清、猪抗旋毛虫血清及人抗旋毛虫血清为一抗，分别以辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG、羊抗猪IgG和山羊抗人IgG为二抗，建立了检测兔、猪和人旋毛虫抗体的间接ELISA方法。结果表明，以G10-7、T668重组蛋白为抗原诊断旋毛虫病，敏感性强、检出率高，且与ES抗原检测结果完全一致。可见，重组抗原有望代替ES抗原，且G10-7重组抗原可以代替T668重组抗原诊断旋毛虫病。以T668、G10-7 重组蛋白为抗原免疫小鼠，每间隔1周免疫1次，共免疫3次。末次免疫后1周， 每只小鼠攻击感染200条旋毛虫感染性肌幼虫（ML），感染后5周用消化法检查ML 负荷。同时，用 ELISA方法检测攻击感染后 1～5周血清中抗 NBL IgG滴度。结果 表明，T668、G10－7重组蛋白免疫组 ML减虫率分别为 67．0％和 63．3％，明显高于 仅用佐剂组（5．4％和 5．8％）；血清中抗重组抗原哈G滴度也明显升高。可见，T668、 G10－7重组蛋白均能诱导小鼠产生特异性体液免疫及免疫保护，有望成为旋毛虫基 因工程疫苗的侯选抗原。 在原核表达的基础上，依据Te、G10－7基因序列设计引物，分别以 pBK－CMVT668和 PBK－CWG10－7为模板，扩增出m－7和含有信号肽的 T668目 的片段，将其分别克隆于真核表达载体 PCR3．1，构建 pCRG－7和 pCRT668真核表 达载体。经脂质体转染于COS－7细胞，经培养后，分别取不同时段的COS。7细胞裂 解物和培养物上清，ELISA检测其表达蛋白的反应原性。结果表明，pCRG10－7和 pCRT668重组质粒在COS－7细胞中的瞬时表达产物均具有良好的反应性。从而为旋 毛虫核酸疫苗的研制奠定了实验基础。
二、毛形线虫各隔离种保姆细胞形成时间的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、毛形线虫各隔离种保姆细胞形成时间的研究（论文提纲范文）
（1）消化法检验旋毛虫最适条件的筛选（论文提纲范文）
| 中文摘要 Abstract 英文缩略词表 前言 第一篇 文献综述 |
| 第1章 旋毛虫与旋毛虫种 |
| 1.1 旋毛虫生活史 |
| 1.2 旋毛虫分类 |
| 1.3 有包囊旋毛虫的介绍 |
| 1.4 无包囊旋毛虫的介绍 |
| 1.5 旋毛虫类群及其与宿主的关系 |
| 1.6 旋毛虫属在自然界的生存策略 |
| 1.7 人体旋毛虫病 |
| 第2章 旋毛虫繁殖能力与肌幼虫收集方法 |
| 2.1 关于 T1-T7 的感染能力和宿主的研究 |
| 2.2 旋毛虫的诊断方法 |
| 2.3 旋毛虫诊断技术—国家标准集样消化法 第二篇 研究内容 |
| 第1章 旋毛虫不同种与基因型感染小鼠的 RCI 值和 LPG 值 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第2章 旋毛虫不同种及基因型消化法的最适条件筛选 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 结论 参考文献 导师和作者简介 致谢 |
（2）旋毛虫分子鉴定研究与半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的克隆、表达及初步鉴定（论文提纲范文）
| 内容摘要 Abstract 第一章 绪论 |
| 1.1 我国旋毛虫分类鉴定研究进展 |
| 1.1.1 旋毛虫概述 |
| 1.1.2 旋毛虫分类概况 |
| 1.1.3 我国旋毛虫分离株分类现状 |
| 1.1.4 我国旋毛虫分类方法研究进展 |
| 1.2 寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 |
| 1.2.1 半胱氨酸蛋白酶抑制剂的类型与结构特征 |
| 1.2.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂的作用机制 |
| 1.2.3 寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂 |
| 1.3 研究内容 |
| 1.4 研究目的和意义 第二章 应用多重PCR鉴定旋毛虫种的研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 旋毛虫种及基因组DNA提取 |
| 2.1.2 线粒体小亚基及大亚基核糖体RNA基因的克隆及序列分析 |
| 2.1.3 线粒体核糖体RNA基因多重PCR |
| 2.1.4 ESV/ITS1多重PCR |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 T.nativa,T.britovi和T.pseudospiralis线粒体核糖体RNA基因克隆 |
| 2.2.2 线粒体核糖体RNA基因多重PCR结果 |
| 2.3 讨论 第三章 中国旋毛虫分离株的分子鉴定研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 旋毛虫分离株 |
| 3.1.2 基因组DNA提取 |
| 3.1.3 线粒体核糖体大小亚基RNA基因多重PCR鉴定 |
| 3.1.4 旋毛虫5S rRNA基因间隔区克隆与分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 旋毛虫线粒体核糖体RNA基因多重PCR扩增结果 |
| 3.2.2 旋毛虫5S RNA基因间隔区序列分析 |
| 3.3 讨论 第四章 旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的克隆及初步鉴定 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 旋毛虫cystatin家族基因的克隆 |
| 4.2.2 旋毛虫cystatin家族基因重组蛋白表达及鉴定 |
| 4.2.3 重组蛋白半胱氨酸蛋白酶抑制活性 |
| 4.3 讨论 第五章 全文结论 参考文献 附录 致谢 博士后期间发表的学术论文 个人简历 永久通信地址 |
（3）旋毛虫属分类及其分类方法的研究进展（论文提纲范文）
| 1 旋毛虫属的分类现状 |
| 1.1 国外研究 |
| 1.2 国内研究 |
| 2 旋毛虫属分类方法的研究进展 |
| 2.1 虫体杂交试验 |
| 2.2 旋毛虫肌幼虫对宿主的感染性 |
| 2.3 同工酶酶谱分析 |
| 2.4 分子生物学 |
| 2.4.1 限制性酶切片段长度多态性技术 (Restriction fragment length polymorphism, RFLP) |
| 2.4.2 随机扩增多态性DNA (Random amplified polymorphic DNA, RAPD) |
| 2.4.3 多重PCR (Multiplex PCR) |
| 2.5 分子遗传学 |
| 3 结 语 |
（4）旋毛虫Ts43基因在各感染时期的转录水平上差异表达（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 虫种和质粒 |
| 1.2 荧光定量PCR引物和探针的设计 |
| 1.3 旋毛虫不同寄生时期虫体的收集 |
| 1.4 旋毛虫总RNA和cDNA文库的制备 |
| 1.5 荧光定量PCR灵敏性、稳定性和重复性的检测 |
| 1.6 标准曲线的制备及Ts43基因的表达水平的检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 旋毛虫各时期虫体cDNA的PCR鉴定 |
| 2.2 荧光定量PCR的灵敏度、稳定性和重复性的检测 |
| 2.3 标准曲线的制备 |
| 2.4 旋毛虫各时期虫体Ts43基因表达水平的检测 |
| 3 讨论 |
（5）旋毛虫43ku ES抗原基因表达水平的实时荧光定量PCR检测（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 虫种和质粒 |
| 1.2 荧光定量PCR引物和探针的设计 |
| 1.3 旋毛虫不同寄生时期虫体的收集[5-6] |
| 1.4 旋毛虫总RNA的提取和反转录 |
| 1.5 荧光定量PCR的稳定性和重复性的检测 |
| 1.6 标准曲线的建立 |
| 1.7 旋毛虫各时期虫体Ts43基因表达水平的检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 旋毛虫各时期虫体cDNA的PCR鉴定 |
| 2.2 荧光定量PCR的稳定性和重复性 |
| 2.3 标准曲线的建立 |
| 2.4 旋毛虫各时期虫体Ts43基因表达水平的检测 |
| 3 讨论 |
（6）旋毛虫43ku ES抗原基因与保姆细胞形成相关性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 引言 |
| 1.1 保姆细胞形成机制的研究进展 |
| 1.1.1 保姆细胞的形成过程 |
| 1.1.2 肌细胞改建的分子机制 |
| 1.1.3 保姆细胞的形成与肌细胞修复的相似性 |
| 1.1.4 保姆细胞的形成与ES 抗原的关系 |
| 1.2 旋毛虫 43ku ES 抗原的研究进展 |
| 1.3 肌肉发生的相关因子 MyoD 和 Id1 |
| 1.3.1 肌肉发生网络调控 |
| 1.3.2 MyoD 的生物学作用 |
| 1.3.3 Id 的生物学作用 |
| 1.4 荧光定量PCR 的原理与定量方法 |
| 1.4.1 荧光定量PCR 的原理 |
| 1.4.2 常用的荧光定量PCR |
| 1.4.3 荧光定量PCR 的定量方法 |
| 1.5 研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 虫种、质粒、试验动物和表达载体 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 荧光定量PCR检测旋毛虫Ts43基因在各寄生时期的表达水平 |
| 2.2.1 引物设计 |
| 2.2.2 旋毛虫各寄生时期虫体的收集 |
| 2.2.3 旋毛虫各寄生时期虫体总RNA 的提取 |
| 2.2.4 RNA 的反转录和鉴定 |
| 2.2.5 荧光定量PCR 灵敏性、稳定性和重复性的检测 |
| 2.2.6 荧光定量PCR 标准曲线的制备 |
| 2.2.7 检测各寄生时期旋毛虫Ts43 基因的相对表达水平 |
| 2.3 SYBR Green 荧光定量 PCR 法检测感染旋毛虫后小鼠骨骼肌 MyoD 和 Id1 的动态表达 |
| 2.3.1 引物设计 |
| 2.3.2 旋毛虫各寄生时期小鼠骨骼肌的收集 |
| 2.3.3 组织 RNA 的提取和 cDNA 的合成 |
| 2.3.4 SYBR Green 荧光定量PCR 法检测 |
| 2.4 Ts43 基因对小鼠骨骼肌 MyoD 和 Id1 基因表达的影响 |
| 2.4.1 真核表达载体pcDNA3.1(+)-Ts43 的构建 |
| 2.4.2 pcDNA3.1(+)-Ts43 质粒的活体转染 |
| 2.4.3 RT-PCR 检测转染后Ts43 特异mRNA 的表达 |
| 2.4.4 SYBR Green 荧光定量PCR 法检测转染后小鼠骨骼肌MyoD 和Id1 表达的动态变化 |
| 3 结果 |
| 3.1 荧光定量PCR 检测旋毛虫Ts43 基因在各寄生时期的表达水平 |
| 3.1.1 旋毛虫各寄生时期虫体的收集 |
| 3.1.2 各时期虫体RNA 纯度和完整性分析 |
| 3.1.3 旋毛虫各时期虫体cDNA 文库的PCR 鉴定 |
| 3.1.4 荧光定量PCR 的灵敏度、稳定性和重复性的检测 |
| 3.1.5 标准曲线的制备 |
| 3.1.6 旋毛虫各时期虫体Ts43 基因的相对表达水平检测 |
| 3.2 SYBR Green 荧光定量 PCR 法检测感染旋毛虫后小鼠骨骼肌内 MyoD 和 Id1 的动态表达 |
| 3.2.1 旋毛虫各寄生时期小鼠骨骼肌RNA 纯度和完整性分析 |
| 3.2.2 SYBR Green 荧光定量PCR 法产物特异性 |
| 3.2.3 SYBR Green 荧光定量PCR 法检测MyoD 和Id1 的动态表达 |
| 3.3 转染 Ts43 基因对小鼠骨骼肌 MyoD、Id1 基因表达的影响 |
| 3.3.1 重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-Ts43 的鉴定 |
| 3.3.2 活体转染后各组小鼠骨骼肌Ts43 mRNA 的鉴定 |
| 3.3.3 SYBR Green 荧光定量PCR 法检测转染前后小鼠骨骼肌MyoD 和Id1 表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 荧光定量PCR 检测旋毛虫Ts43 基因在各寄生时期的表达水平 |
| 4.2 SYBR Green荧光定量PCR法检测感染旋毛虫后小鼠骨骼肌内 MyoD 和 Id1 基因的表达动态 |
| 4.3 转染 Ts43 基因对小鼠骨骼肌 MyoD、Id1 基因表达的影响 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（7）黑龙江省旋毛虫分类研究进展（论文提纲范文）
| 1 形态学的差异 |
| 2 生物学上的差异 |
| 2.1 对温度敏感性的差异 |
| 2.2 宿主体内分布情况的差异 |
| 2.3 雌虫体外产幼虫能力和成虫肠期持续时间的差异 |
| 2.4 保姆细胞形成时间的差异 |
| 2.5 感染性的差异 |
| 3 遗传学上的差异 |
| 4 分子生物学技术的应用 |
| 4.1 同工酶技术 |
| 4.2 限制性酶切片段长度多态性技术 |
| 4.3 聚合酶链式反应 |
| 5 结语 |
（8）旋毛虫49ku ES抗原基因核酸疫苗构建及免疫保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 引言 |
| 1.1 旋毛虫与旋毛虫病 |
| 1.1.1 病原分类与形态 |
| 1.1.2 生活史 |
| 1.1.3 流行病学 |
| 1.1.4 致病作用和病理变化 |
| 1.1.5 临床症状 |
| 1.1.6 诊断 |
| 1.1.7 治疗 |
| 1.1.8 预防 |
| 1.2 旋毛虫ES 抗原的研究进展 |
| 1.2.1 ES 抗原的分泌与成分组成 |
| 1.2.2 ES 抗原中的糖基 |
| 1.2.3 ES 抗原的酶活性 |
| 1.2.4 ES 抗原与营养细胞的形成 |
| 1.2.5 成虫的ES 抗原 |
| 1.2.6 ES 抗原的功能 |
| 1.2.7 基因重组ES 抗原 |
| 1.3 旋毛虫疫苗的研究进展 |
| 1.3.1 减毒活疫苗 |
| 1.3.2 天然抗原疫苗 |
| 1.3.3 合成肽疫苗 |
| 1.3.4 重组抗原疫苗 |
| 1.3.5 核酸疫苗 |
| 1.3.6 影响免疫效果的因素 |
| 1.3.7 对不同隔离种旋毛虫感染的免疫保护效果 |
| 1.3.8 小结 |
| 1.4 核酸疫苗的研究进展 |
| 1.4.1 核酸疫苗的结构与分类 |
| 1.4.2 核酸疫苗的免疫机理 |
| 1.4.3 核酸疫苗的特点 |
| 1.4.4 核酸疫苗的接种方法和途径 |
| 1.4.5 影响核酸疫苗免疫效果的主要因素 |
| 1.4.6 核酸免疫的新进展 |
| 1.4.7 核酸疫苗研究需要解决的几个问题 |
| 1.4.8 核酸疫苗的应用前景与展望 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 各隔离种旋毛虫 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 引物 |
| 2.1.4 质粒与菌种 |
| 2.1.5 主要试剂及药品 |
| 2.1.6 主要实验仪器与设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 旋毛虫成囊前期幼虫（pre-encysted larvae EL）的收集 |
| 2.2.2 旋毛虫肌幼虫（musle larvae ML）的收集 |
| 2.2.3 旋毛虫成虫(adult worms AW)的收集 |
| 2.2.4 旋毛虫总RNA 的提取 |
| 2.2.5 RNA 的反转录和P49 基因的扩增 |
| 2.2.6 目的基因的分子克隆和鉴定 |
| 2.2.7 重组真核表达载体pcDNA-P49 的构建 |
| 2.2.8 核酸疫苗的免疫保护效果 |
| 3 结果 |
| 3.1 旋毛虫不同发育时期虫体收集 |
| 3.2 旋毛虫不同隔离种成囊前期幼虫49KU ES 抗原基因的克隆与序列分析 |
| 3.2.1 猪旋毛虫成囊前期幼虫49ku ES 抗原基因的克隆与鉴定 |
| 3.2.2 犬旋毛虫成囊前期幼虫49ku ES 抗原基因的克隆与鉴定 |
| 3.2.3 猫旋毛虫成囊前期幼虫49ku ES 抗原基因的克隆与鉴定 |
| 3.2.4 美国猪旋毛虫成囊前期幼虫49ku ES 抗原基因的克隆与鉴定 |
| 3.2.5 旋毛形线虫成囊前期幼虫49ku ES 抗原基因的克隆与鉴定 |
| 3.2.6 本地毛形线虫成囊前期幼虫49ku ES 抗原基因的克隆与鉴定 |
| 3.2.7 旋毛虫不同隔离种成囊前期幼虫49ku ES 抗原基因的序列分析 |
| 3.3 猪旋毛虫不同发育时期虫体49KU ES 抗原基因的克隆与序列分析 |
| 3.3.1 猪旋毛虫成囊前期幼虫49ku ES 抗原基因的克隆与鉴定 |
| 3.3.2 猪旋毛虫肌幼虫49ku ES 抗原基因的克隆与鉴定 |
| 3.3.3 猪旋毛虫成虫49ku ES 抗原基因的克隆与鉴定 |
| 3.3.4 猪旋毛虫不同发育时期虫体49ku ES 抗原基因的序列分析 |
| 3.4 重组真核表达载体PCDNA-P49 的构建 |
| 3.5 核酸疫苗的免疫效果 |
| 3.5.1 pcDNA3.1-P49-S/EL 免疫后的抗体检测 |
| 3.5.2 T 细胞亚类检测 |
| 3.5.3 pcDNA3.1-P49-S/EL 免疫对猪旋毛虫攻击感染的免疫保护作用 |
| 4 讨论 |
| 4.1 旋毛虫不同隔离种与旋毛虫不同发育阶段虫体 |
| 4.2 旋毛虫不同隔离种成囊前期幼虫49KU ES 抗原基因的克隆与序列分析 |
| 4.3 猪旋毛虫不同发育时期虫体49KU ES 抗原基因的克隆与序列分析 |
| 4.4 重组真核表达载体PCDNA-P49 的构建 |
| 4.5 核酸疫苗的免疫保护作用 |
| 4.5.1 抗体的检测 |
| 4.5.2 T 细胞亚类检测 |
| 4.5.3 pcDNA3.1-P49-S/EL 免疫对猪旋毛虫攻击感染的免疫保护作用 |
| 4.6 本实验的创新 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（9）旋毛虫分子分类和49ku结构基因在昆虫细胞中表达研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引 言 |
| 1.1 研究的目的和意义 |
| 1.2 旋毛虫属种分类的研究现状 |
| 1.3 核糖体RNA在寄生虫学上的应用 |
| 1.3.1 核糖体RNA基因的特征 |
| 1.3.2 核糖体RNA基因在寄生虫学上的应用 |
| 1.4 旋毛虫ES免疫诊断抗原的研究进展 |
| 1.5 杆状病毒表达系统简介 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 旋毛虫各隔离种 |
| 2.1.2 试验动物 |
| 2.1.3 引物 |
| 2.1.4 菌株和克隆菌 |
| 2.1.5 试验试剂 |
| 2.1.6 供体质粒 |
| 2.1.7 试验仪器和设备 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 旋毛虫肌幼虫的收集 |
| 2.2.2 旋毛虫总RNA的提取 |
| 2.2.3 RNA的反转录和目的基因的扩增 |
| 2.2.4 目的基因的分子克隆和鉴定 |
| 2.2.5 目的基因的序列测定和分析 |
| 2.2.6 49ku ES结构基因表达载体的构建 |
| 2.2.7 昆虫细胞的转染 |
| 2.2.8 表达产物的SDS-PAGE电泳分析 |
| 2.2.9 表达产物的Western blot分析 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 旋毛虫形态观察 |
| 3.2 旋毛虫总RNA的检测 |
| 3.3 目的基因的RT-PCR扩增 |
| 3.4 目的基因的克隆和鉴定 |
| 3.5 目的基因的测序结果和序列分析 |
| 3.6 重组pFastTNPG质粒的鉴定 |
| 3.7 Bacmid质粒的鉴定 |
| 3.8 杆状病毒DNA的鉴定 |
| 3.9 昆虫细胞的病变 |
| 3.10 表达产物的SDS-PAGE电泳 |
| 3.11 表达产物的Western blot分析 |
| 4 讨 论 |
| 4.1 旋毛虫形态观察 |
| 4.2 旋毛虫总RNA的提取及RT-PCR扩增 |
| 4.3 目的基因的鉴定 |
| 4.4 目的基因的测序及序列分析 |
| 4.5 杆状病毒表达载体的构建 |
| 4.6 重组病毒的表达及表达产物的鉴定 |
| 5 结 论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 致 谢 |
（10）旋毛虫新生幼虫期特性基因的克隆、表达及抗原性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 文献综述旋毛虫分子生物学研究进展 |
| 1 旋毛虫种属分类 |
| 2 旋毛虫抗原研究 |
| 3 旋毛虫免疫研究 |
| 4 旋毛虫检测技术 |
| 5 结束语 |
| 第二部分 研究内容 |
| 实验一 旋毛虫新生幼虫期特异性基因的筛选及序列分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 旋毛虫新生幼虫期特异性G10-7、T668cDNA在大肠杆菌中的高效表达及鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验三 以重组抗原建立间接ELISA方法检测旋毛虫抗体的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验四 重组抗原对小鼠的保护性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验五 旋毛虫新生幼虫期特异性G10-7、T668cDNA在COS-7细胞中的瞬时表达 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 英文摘要 |
四、毛形线虫各隔离种保姆细胞形成时间的研究（论文参考文献）
- [1]消化法检验旋毛虫最适条件的筛选[D]. 王迪. 吉林大学, 2014(10)
- [2]旋毛虫分子鉴定研究与半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的克隆、表达及初步鉴定[D]. 付宝权. 中国农业科学院, 2012(06)
- [3]旋毛虫属分类及其分类方法的研究进展[J]. 王丽娜,田建丽,陈晓宁,路国兵,高云. 中国人兽共患病学报, 2011(12)
- [4]旋毛虫Ts43基因在各感染时期的转录水平上差异表达[J]. 宋铭忻,路义鑫,王守育,张子群,畅丹,韩彩霞. 中国兽医杂志, 2010(01)
- [5]旋毛虫43ku ES抗原基因表达水平的实时荧光定量PCR检测[J]. 王守育,路义鑫,张子群,韩彩霞,宋铭忻. 中国兽医科学, 2009(06)
- [6]旋毛虫43ku ES抗原基因与保姆细胞形成相关性的研究[D]. 王守育. 东北农业大学, 2009(03)
- [7]黑龙江省旋毛虫分类研究进展[J]. 姜曰晓,宋铭忻,路义鑫. 动物医学进展, 2007(02)
- [8]旋毛虫49ku ES抗原基因核酸疫苗构建及免疫保护作用研究[D]. 路义鑫. 东北农业大学, 2006(02)
- [9]旋毛虫分子分类和49ku结构基因在昆虫细胞中表达研究[D]. 李冬梅. 东北农业大学, 2004(04)
- [10]旋毛虫新生幼虫期特性基因的克隆、表达及抗原性研究[D]. 牛廷献. 中国人民解放军军需大学, 2003(02)