一、转基因草坪草的研究概况与展望（论文文献综述）
张蕊[1]（2020）在《日本结缕草（Zoysia japonica）ZjERF3基因的克隆和功能鉴定》文中进行了进一步梳理极端温度、干旱和高度盐碱化等不良环境影响陆地植物的生长和发育,严重时甚至导致植物死亡。为了适应不良的生长条件,植物进化出了复杂而精准的分子调控机制,ERF转录因子在调控网络中发挥重要作用。本研究以“Meyer”品种为试验材料,揭示日本结缕草（Zoysia japonica L.）中ZjERF3转录因子的特性和生物学功能,研究结果如下:1.从日本结缕草中分离了一个AP2/ERF转录因子家族的新成员,命名为ZjERF3,该基因开放阅读框为642 bp,编码213个氨基酸。保守结构域分析表明ZjERF3含有一个AP2保守结构域,符合ERF亚家族成员的特征。构建进化树发现其与弯叶画眉草（Eragrostis curvula）ERF亚家族蛋白的亲缘关系最近。利用q RT-PCR检测ZjERF3基因的表达情况,结果表明ZjERF3基因在日本结缕草的不同部位及不同发育时期表达量均有差异,在成熟叶片中表达量最高。此外ZjERF3基因表达受ET、Me JA、Na Cl及低温条件的诱导,但受ABA、PEG6000处理的抑制。2.为探析ZjERF3基因编码蛋白的亚细胞定位情况,成功构建35S::ZjERF3::YFP载体,本生烟草瞬时表达结果证明ZjERF3定位于细胞核。构建p GBKT7-ZjERF3载体,转化Y2H Gold酵母感受态细胞,SD/-Trp-His-Ade培养基上的生长情况表明ZjERF3蛋白具有转录自激活活性。3.构建酵母表达载体pYES2,将其转化到酵母菌株YPH500,同时转入空载体。观察转入重组质粒和空载体的酵母细胞在盐、干旱和低温胁迫条件下的生长情况发现,携带pYES2-ZjERF3的酵母细胞的生长速度明显快于转pYES2空载体的酵母细胞。表明ZjERF3基因转入酵母中可以提高酵母细胞对3种胁迫的抗性。4.构建植物表达载体p3302Y3-ZjERF3,转入农杆菌菌株GV3101,采用侵染花序法转化拟南。在正常浇水条件下,野生型和转基因拟南芥的各指标间没有差异。盐和干旱胁迫下,转基因植株的发芽率和鲜重明显低于野生型,而叶片相对含水量、可溶性糖、脯氨酸含量均高于野生型,电导率和丙二醛的含量则低于野生型。可以看出转ZjERF3基因的拟南芥在萌发期对胁迫条件更敏感性,但在苗期的抗性却比野生型强。表明ZjERF3基因参与对盐和干旱胁迫的应答。在极端低温处理下,转基因拟南芥的存活率显着高于野生型,表明ZjERF3基因同样参与对低温胁迫的应答。本研究结果表明,ZjERF3蛋白具有较强的转录自激活活性,定位在细胞核中,在植物中过表达能够显着提高转基因植株的生长及渗透调节能力从而提高植株对胁迫条件的抗性。本研究为深入阐明ZjERF3的调控途径提供了理论依据。
刘芳兵[2]（2020）在《狗牙根CdNF-YA23基因响应盐胁迫的功能解析》文中研究表明我国盐碱地面积大、分布广。由于盐碱化程度高,适合盐碱地种植的植物种类缺乏,许多地区呈现寸草不生的荒凉状态,从而造成土壤资源的巨大浪费。此外,这些盐碱化地区容易引发盐碱尘暴,盐碱灰霾和盐渍化泛滥扩散,造成严重的生态灾难和环境污染,危害人类健康和农业生产。狗牙根（Cynodon dactylon）因其具有成坪速度快、草坪质量好、抗逆性强等优点,被广泛应用于运动场草坪、园林绿化和边坡防护等,被誉为暖季型草坪草当家草种。近年来,狗牙根也被应用于盐碱地的生态修复,但由于其耐盐能力有限,中重度盐碱地区仍缺乏高耐盐狗牙根新品种。通过分子育种技术来改良狗牙根的耐盐能力可提高育种效率。然而,目前关于狗牙根耐盐基因及其响应盐胁迫的分子机制研究匮乏。本研究通过分析狗牙根全长转录组数据库,克隆了一个受盐胁迫显着诱导的NF-Y类转录因子基因CdNF-YA23,开展了该基因基本特性、表达模式、生物学功能等方面的研究,主要结果如下:1.CdNF-YA23基因克隆及表达模式分析以狗牙根种质“WBD128”cDNA为模板,克隆了CdNF-YA23基因CDS序列,全长939 bp,编码312个氨基酸。qRT-PCR表达分析发现,CdNF-YA23基因同时受到盐、干旱、低温、ABA和JA的显着诱导,其中盐胁迫下的诱导倍数最高。通过染色体步移技术获得CdNF-YA23基因启动子区域序列,构建CdNF-YA23:GUS表达载体,转化拟南芥得到的转基因株系经盐、干旱、ABA处理后,GUS信号显着增强。2.CdNF-YA23转录因子特征分析构建CdNF-YA23:GFP表达载体,转化农杆菌,注射烟草叶片,在激光共聚焦显微镜下观察发现,CdNF-YA23蛋白定位于细胞核中,表明它可能在细胞核中发挥其功能。构建pGBKT7-CdNF-YA23酵母表达载体,转化Y2H酵母感受态细胞,在SD/-Trp/x-α-gal划线,结果显示,CdNF-YA23具有很强的自激活活性。通过截短实验的自激活活性检测,发现位于该基因的1 bp-169 bp序列是CdNF-YA23基因的自激活活性区域,169 bp-939 bp序列是CdNF-YA23基因CDS全长序列中没有自激活活性的最长片段。3.CdNF-YA23过表达转基因拟南芥幼苗对盐和ABA敏感构建35S:CdNF-YA23过表达载体转化拟南芥,得到转基因株系,对CdNF-YA23过表达转基因拟南芥幼苗进行盐、干旱、低温和ABA处理。结果显示,盐处理下CdNF-YA23过表达拟南芥幼苗根伸长和绿苗率均显着低于对照拟南芥;ABA处理下CdNF-YA23过表达拟南芥幼苗根伸长和生物量均显着低于对照拟南芥。200 mM NaCl处理下,CdNF-YA23过表达拟南芥成苗的丙二醛含量、电导率、Na+含量、K+含量、Na+/K+均显着高于对照拟南芥,叶绿素含量和OJIP曲线均显着低于对照拟南芥。以上结果表明过表达CdNF-YA23基因提高了转基因拟南芥对盐胁迫和ABA的敏感性。进一步分析表明,盐胁迫下CdNF-YA23过表达拟南芥中,AtRD29A基因表达量显着低于对照植株。4.CdNF-YA23过表达转基因水稻植株的获得为了进一步明确CdNF-YA23基因功能,我们转化了禾本科模式植物水稻。在根瘤农杆菌AGLI介导下,使用愈伤组织转化水稻,并对T0代植株进行检测,目前已获得5个水稻转基因阳性株系,准备进行转基因水稻的耐盐性表型分析。综上所述,本研究通过克隆CdNF-YA23基因并对其进行了时空表达模式、转录因子特征和生物学功能分析表明,过表达CdNF-YA23基因可提高转基因拟南芥对ABA以及盐胁迫的敏感性,初步解析了狗牙根CdNF-YA23基因介导的耐盐分子生理机制,为狗牙根耐盐育种提供了科学依据。
姜红岩[3]（2020）在《日本结缕草ZjNAC3基因的功能研究》文中认为NAC（NAM,ATAF1/2,CUC2）转录因子在植物的生长发育和胁迫耐受性方面发挥着重要作用,但在日本结缕草中的研究还未详细展开。本文旨在研究日本结缕草（Zoysia japonica）中的NAC转录因子ZjNAC3基因的基本功能及其启动子的活性,同时探究ZjNAC3基因过表达对植物耐盐性的影响。研究结果如下:1、从日本结缕草中克隆获得了ZjNAC3基因,编码区全长1167 bp,生物信息学分析表明ZjNAC3基因的N端有NAM保守结构域,属于NAC超家族。利用实时荧光定量技术进行基因表达分析,发现ZjNAC3基因在日本结缕草的根、茎、叶中均有表达,且在日本结缕草叶片中的表达量最高,同时在衰老叶片中的表达量最高。ZjNAC3的表达受到ETH、ABA、Me JA激素和干旱、高盐的调控。通过烟草瞬时表达的方法对ZjNAC3进行亚细胞定位,结果显示ZjNAC3定位在细胞核。2、通过转录自激活验证,ZjNAC3蛋白具有转录自激活活性。蛋白分段实验结果表明其N端不具有转录激活活性,而C端具有转录自激活活性。利用酵母双杂筛库技术初步筛选出16个候选基因,并对其进行了生物信息学分析,分析表明这些候选基因不仅参与糖酵解、三羧酸循环,还参与逆境胁迫响应、病原体防御和植物生长发育等其他生理生化过程。3、同时克隆了ZjNAC3基因的启动子序列1622 bp,作用元件分析表明启动子中含有多种响应植物激素和胁迫的作用元件。启动子活性分析表明,ZjNAC3的启动子可驱动GUS基因在拟南芥中表达,在转基因拟南芥中能够检测到GUS活性。ABA、Me JA、ETH、Na Cl和Mannitol处理可以抑制启动子活性,降低GUS基因的表达水平;SA处理能够增强启动子活性,诱导GUS基因的表达。4、将ZjNAC3转化酵母YPH500菌株,盐胁迫下ZjNAC3基因对酵母菌株生长具有负调控作用。同时对转基因植株的耐盐性分析,盐处理后转基因植株中的可溶性糖含量、叶绿素含量均显着低于WT,丙二醛含量和细胞膜透性显着高于WT,At NHX1基因的表达水平显着低于WT,表明转ZjNAC3基因的拟南芥植株具有盐敏感性。这可能与ZjNAC3基因参与盐胁迫调控途径有关,包括降低渗透调节能力、加深细胞受损程度以及削弱将Na+隔离到液泡的能力,进而导致转基因拟南芥植株的盐敏感性表型。本研究探究了ZjNAC3基因及其启动子的基本特征,探索了其在盐胁迫下的调控情况和对拟南芥植株抗盐性的影响,并为进一步了解结缕草NAC基因的调控机理奠定了基础。
林恬逸[4]（2020）在《沟叶结缕草愈伤组织干旱胁迫响应及其矮化突变体变异机理的研究》文中研究指明沟叶结缕草[Zoysia matrella（L.）Merr.],又名马尼拉草,作为生长力强,观赏性好,整体品质佳的优良暖季型草坪草,在我国南方地区广为应用。因其在养护管理时需要充足供水和定期修剪,花费大量的人工和成本,为了降低供水量和减少修剪频率,降低草坪养护管理成本,本研究利用体细胞无性系变异筛选抗旱和矮化的沟叶结缕草。本研究以重要暖季型草坪草沟叶结缕草为材料,通过外源施加表油菜素内酯（EBL）,探究了植物激素油菜素甾醇（BR）对沟叶结缕草体细胞胚胎发生过程的作用,不断优化完善长期离体的愈伤组织培养体系并维持其高效的再生能力。利用PEG-6000模拟干旱胁迫,筛选具有耐旱性的沟叶结缕草体细胞无性系再生植株,并外源施加EBL研究BR提高沟叶结缕草逆境胁迫的作用机理。同时,以沟叶结缕草60Coγ辐射诱变的体细胞无性系矮化突变体为材料,结合形态、生理生化、内源激素水平,利用转录组测序技术（RNA-seq）对沟叶结缕草矮化突变体进行转录组测序,分析植物激素调控沟叶结缕草生长作用的潜在机制,筛选调控沟叶结缕草矮化的候选基因,为进行遗传工程改良,提高优良性状提供分子基础。主要研究结果如下:1、植物激素BR能促进沟叶结缕草体细胞胚胎发生,外源施加EBL对沟叶结缕草愈伤组织的生长和再生有显着的促进作用,随着EBL浓度的升高,愈伤组织及再生植株的生长态势先升高后降低,高浓度的EBL对愈伤组织的生长和再生有抑制作用。经过形态学和生理学对比分析,0.02μmol·L-1 EBL是外源处理的最优浓度,对愈伤组织的增殖率和再生率有很大提升。2、干旱胁迫对沟叶结缕草愈伤组织再生能力有明显抑制作用,通过不同浓度PEG胁迫下对体细胞无性系进行定向筛选,分别在5%PEG以及10%PEG处理中获得具有耐旱性的沟叶结缕草体细胞无性系再生植株。3、植物激素BR能显着提高干旱胁迫下沟叶结缕草的抗旱性,外源EBL能显着缓解并促进沟叶结缕草愈伤组织在干旱胁迫下的再生和生长能力,随着EBL浓度的升高,愈伤组织再生能力先升高后降低。0.05、0.1、0.5μmol·L-1的EBL分别对不同浓度PEG模拟的干旱胁迫下的愈伤组织再生有显着的促进作用,并通过促进干旱胁迫下愈伤组织再生过程中的抗氧化酶CAT、POD、SOD活性以及降低MDA含量来调控植物对干旱胁迫的响应。4、植物激素IAA和ABA可能通过合成、运输及代谢途径,调控60Coγ辐射诱变的沟叶结缕草体细胞无性系突变体矮化。矮化突变体在无性繁殖5年的过程中表型和生理指标维持长期稳定,表现出茎短、叶宽、低矮和叶色深绿的表型,在生理上,矮化突变体的表型变化与CAT、POD、SOD、MDA、木质素和叶绿素等生理反应有关。在测定的4种内源激素中,突变体的IAA和ABA含量均下降。通过对矮化突变体和野生型叶片的转录组比较,发现360个差异表达基因（DEGs）,其中62个上调,298个下调。内源激素水平和转录组数据表明,突变体的IAA和ABA含量及相关基因表达量均显着下降,IAA合成（Cytochrome P450）、IAA转运（PIN1）、ABA降解（Abscisic acid 8’-hydroxylase 2-like）、细胞壁发育（CESA1）和膨胀素同源基因等主要的DEGs均下调,表明它们是调控矮化突变体的表型的潜在机制。其中,IAA合成及运输、ABA代谢和膨胀素相关蛋白可能是造成该沟叶结缕草矮化的主要原因。本研究发现0.02μmol·L-1 EBL是外源处理的最优浓度,能显着促进愈伤组织的增殖和再生,在5%PEG以及10%PEG处理中获得具有耐旱性的沟叶结缕草体细胞无性系再生植株,EBL能通过增强干旱胁迫下沟叶结缕草抗氧化酶的活性,提高愈伤组织的抗旱性。IAA合成及运输、ABA代谢和膨胀素相关蛋白可能是造成沟叶结缕草矮化突变体矮化的主要原因。
纪康[5]（2020）在《高羊茅高温响应转录因子FaNAC74的功能鉴定及耐高温种质筛选应用》文中研究说明高羊茅（Festuca arundinacea Schreb.）具有抗逆性强、绿期长以及耐践踏等特点,是应用最广泛的草坪草之一。作为典型的冷季型草坪草,高羊茅的最佳生长温度为18-25℃,对高温敏感。在我国亚热带及热带地区,夏季的极端高温天气会造成高羊茅生长迟缓或停滞,草坪质量下降甚至植株死亡。因此,高温被认定是发展和利用高羊茅的主要限制因素之一。NAC类蛋白是一类植物特有的转录因子家族,其成员广泛分布于陆生植物中,参与植物生长发育、生物和非生物胁迫响应、衰老调节等诸多生物学过程。从高羊茅中发掘鉴定响应高温胁迫的NAC类转录因子,并进行功能解析,可为改良高羊茅的耐高温能力提供科学依据,具有重要的理论意义和应用价值。本研究开展了高羊茅种质资源收集、耐热性评价、耐热基因挖掘及功能解析等研究工作,取得的主要结果如下:1.高羊茅种质的耐高温筛选以收集的188份来自不同国家地区的高羊茅种质为材料,选取其中的64份利用武汉地区的夏季高温进行了室外越夏实验,对高羊茅种质耐热性进行了综合评价,并筛选到高羊茅耐热种质和高温敏感种质各10份,为培育耐高温高羊茅新品系提供了亲本材料。2.高羊茅FaNAC74基因的挖掘及特征鉴定基于实验室前期的高羊茅转录组数据库,发掘到一个耐热相关的转录因子,命名为FaNAC74。我们分析了FaNAC74基因在高羊茅耐高温以及高温敏感种质中的表达模式,发现FaNAC74基因的表达受高温胁迫显着诱导,且在耐高温种质中表达量更高,表明FaNAC74基因可能与高羊茅耐热性相关。以耐高温种质高温处理后的cDNA为模版,克隆了FaNAC74基因,并进行了氨基酸多重序列比对和系统进化树构建,结果表明FaNAC74蛋白与二穗短柄草的BdNAC74蛋白有较高的氨基酸序列同源性。通过对氨基酸序列跨膜结构域的预测,发现FaNAC74的C端存在一个跨膜结构域。我们进一步构建了FaNAC74的亚细胞融合表达载体35S:FaNAC74-eGFP,并在农杆菌介导下转化烟草表皮细胞,观察FaNAC74亚细胞定位,结果显示FaNAC74蛋白定位在细胞膜上。3.高羊茅FaNAC74转录因子的功能解析为了研究FaNAC74转录因子的功能,我们构建了超表达载体并转化模式植物拟南芥,获得了转基因植株。我们对过表达FaNAC74的转基因拟南芥株系进行42℃高温处理2小时,恢复3天后对存活率进行统计分析,结果显示转基因株系的存活率较对照植株显着提高,表明FaNAC74基因正调控植株的耐热性。4.FaNAC74转录因子下游基因的发掘为了揭示FaNAC74介导的高温胁迫应答调节机制,我们利用RNA-seq技术对高温前后的35S:FaNAC74和对照植株转录组分析。结果发现,在高温处理下,转基因株系与对照相比差异表达的基因数目为2043个,包括1261个表达上调基因,782个表达下调基因。GO分析结果表明,在生物过程和在分子功能方面,差异基因主要富集在应对高温胁迫（Response to Heat）与细胞内未折叠蛋白结合（Unfolded Rrotein Binding）上。进一步地,我们发现多个抗逆相关基因,如HSP70-16、HSP18.1、ANAC13和DREB2C等在FaNAC74过表达植株中的表达量显着高于对照。以上结果表明FaNAC74可能通过调节下游逆境应答基因的表达来响应高温胁迫。综上所述,我们对高羊茅种质耐高温能力进行了综合评价,并从耐高温种质中发掘鉴定到一个受高温显着诱导的转录因子FaNAC74,开展了该转录因子的特征鉴定、功能解析等研究工作,为培育耐高温高羊茅新种质提供了科学依据。
张利娟,季梦晨,任亮[6]（2019）在《价值观影响下公众对转基因草坪草的态度和支付意愿的研究》文中进行了进一步梳理转基因草坪草具有重要的商业和生态价值,公众的态度和支付意愿影响到转基因草坪草的推广应用。本研究基于感知理论和技术接受模型,采用随机调查法,运用结构方程模型论证了个人价值观对公众对待转基因草坪草的态度和支付意愿的影响。结果表明,公众对转基因草坪草的态度和支付意愿普遍偏高,态度直接影响支付意愿,态度越积极,支付意愿越高;感知收益对态度有正向影响,感知风险对态度有负向影响;不同价值观显着影响态度,生态主义的影响最大,利他主义次之,利己主义最小;生态主义者的感知收益和感知风险最敏感,利己主义者对感知风险更为敏感;感知收益和感知风险在生态主义对态度的影响中起到部分中介效应。因此,决策者可以针对不同的价值观人群,充分考虑个人利益、社会发展及生态环境,制定科学民主的推广应用策略,使转基因草坪真正造福于人类。
张睿[7]（2019）在《CRISPR/Cas9介导无外源DNA日本结缕草ZjSGR基因编辑技术研究》文中指出CRISPR/Cas9基因编辑技术自2013年问世以来,被广泛应用在多种动植物的基因敲除或敲入研究中,改良的CRISPR/Cas9 RNP（ribonucleoproteins）技术是一种无外源DNA的基因编辑技术,使用该方法获得的编辑植株最终无外源DNA的整合,成功避免了后代分离的复杂步骤,且更利于公众的接受;其还具有较低脱靶率的优势,因此在农作物的遗传改良应用中极具发展潜力。日本结缕草（Zoysia japonica Stued.）是我国极其宝贵的草种资源,拥有众多优良特性,但在北方绿期短的特点成为其大面积推广使用的主要限制因子,该试验拟通过构建CRISPR/Cas9 RNP编辑体系与结缕草遗传转化体系,改良结缕草持绿性状,为创制绿期延长性状的结缕草育种材料做尝试性研究,试验得到以下主要结果:1、进一步优化了结缕草成熟种子愈伤组织诱导方法。6-BA对结缕草种子发芽率及诱导率有抑制作用;α-酮戊二酸显着提高了发芽率与诱导率,且在0-1OOmg/L的范围内随着浓度的增加而升高;正交试验表明试验范围内1号培养基组合是使发芽率与诱导率最高的组合:即在MS培养基种添加1mg/L2,4-D、0.1mg/L6-BA、50mg/L α-酮戊二酸、2mg/LVB1与2.5mg/LCuSO4,使发芽率与诱导率分别达到86.67%与81.33%;且表明对发芽率影响作用的顺序为α-酮戊二酸>2,4-D>VB1>6-BA;对诱导率影响作用的顺序为2,4-D>a-酮戊二酸>VB1>6-BA;通过不同品种的比较试验得出“Compadre”品种的诱导率明显高于“Zenith”与“Chinese Common”,但“Zenith”状态较优。通过继代培养得到了大量的胚性愈伤组织,并可用于下一步试验。2、结缕草再生体系的研究结果表明,分化生芽的过程中会有异常分化情况的发生,具体表现为只有根状物长出而无芽原基形成。结果显示,0.2mg/L的6-BA对愈伤组织分化生根具有明显的促进作用。3、结缕草ZjSGR CRISPR/Cas9 RNP基因编辑体系各元件的构建和制备。以pHUN411gRNA-1、2、3为模板,根据ZjSGR基因设计特异性引物,反转录获得100ng/uL的三个sgRNA体外转录模板,通过T7体外转录并纯化最终获得三个靶位点的sgRNA浓度分别为3.4μg/μL、3.0μg/μL及3.8μg/μL,达到转化目标要求;将Cas9基因构建在原核表达载体pET-28a上,获得重组载体pET28a-cas9-His并通过大肠杆菌菌株BL21表达,纯化后获得Cas9蛋白终浓度为1μg/μL,Cas9蛋白的分子量约为200KDa。高质量sgRNA与Cas9蛋白的获得为成功建立起RNP编辑体系奠定基础。4、将sgRNA与Cas9蛋白在体外于Cas9蛋白反应缓冲液中预混,通过基因枪法将RNP导入结缕草“Chinese Common”品种胚性愈伤组织。由于此体系无选择标记基因可供大量筛选,因此验证ZjSGR基因的编辑效率工作量较大,该结果还需要进一步的研究。
王剑[8]（2019）在《干旱胁迫抑制高羊茅分蘖发育的分子机理》文中指出分蘖是草坪草生长发育过程中从茎基部节上产生的不依赖于主茎的一种特殊分枝结构,直接影响草坪草耐践踏性和坪用价值,是草坪草重要性状之一。每个分蘖都能形成独立于主茎的根系,进而促进植物有效地利用土壤中的养分,促进植株个体发育,此外分蘖可以提高植株的占地能力,有效地抑制杂草危害,提高草坪草的抗性和适应性。分蘖发育包括两个过程:侧生分生组织形成后分蘖芽的起始及随后分蘖芽的伸长。而分蘖芽形成之后能否长成分蘖,主要受外界环境、内源激素、遗传等因素的影响。分蘖的形成和生长对于干旱胁迫非常敏感,干旱胁迫显着抑制植株分蘖的发育,进而严重影响草坪质量,同时一些分蘖发育相关的关键基因对分蘖的遗传调控中也发挥着至关重要的角色,因此,研究干旱如何抑制草坪草分蘖发育进程及其遗传调控机制对于培育多分蘖草坪草新种质提高草坪质量具有重要意义。本研究通过对高羊茅（Festuca arundinacea）水培环境下添加聚乙二醇6000（PEG6000）模拟干旱胁迫来研究干旱对高羊茅分蘖起始或伸长两个阶段的影响以及干旱是否介导独脚金内酯（strigolactone,SL）信号途径抑制分蘖发育。同时,通过干旱胁迫下分蘖节转录组数据和qRT-PCR分析获得两个干旱诱导的分蘖关键因子FaMAX2（more axillary growth 2）和 FaTB1（teosinte branched1）,进一步通过对FaMAX2在水稻中异源表达来研究FaMAX2影响分蘖发育的功能和潜在机制。通过对FaTB1在高羊茅中过量表达以及酵母单杂和双杂交来研究其功能和分子调控机制。主要研究内容与结果:1.为研究在多年生草坪草中干旱抑制分蘖发育是否与抑制了腋芽的起始或起始后的伸长生长,以及干旱抑制分蘖发育是否与SL含量的积累和信号转导相关。实验采用高羊茅没有腋芽产生和两个腋芽产生的幼苗进行20%PEG6000模拟的干旱胁迫,在胁迫期间,统计植株高度、叶片数、腋芽数、分蘖数和腋芽长度。结果发现干旱胁迫对腋芽起始和伸长生长两个阶段均有抑制作用,伸长生长对干旱胁迫更为敏感。qRT-PCR分析显示,干旱胁迫14天时,腋芽激活相关基因下调表达,腋芽休眠相关基因上调表达（FaTB1表达水平上调）。干旱胁迫下植株基部分蘖节（crown）中的SL含量升高。qRT-PCR分析显示干旱胁迫下SL信号转导相关基因（FaMAX2）及其下游因子（FaTB1）表达水平上调。结合干旱胁迫下分蘖节转录组结果显示干旱胁迫下分蘖节中FaMAX2和FaTB1表达显着上调,说明FaMAX2和FaTB1在干旱抑制腋芽的伸长生长过程起关键作用。2.为了研究高羊茅FaMAX2调控分蘖发育的功能,从高羊茅中克隆得到了FaMAX2基因序列,开放阅读框（ORF）为2160个核苷酸,编码720个氨基酸。进化树分析发现,FaMAX2与黑麦草LpMAX2的进化关系最近,其次为水稻OsD3和二穗短柄草BdMAX2。氨基酸序列分析结果显示,该基因具有特定的F-box结构域（F-box）和富亮氨酸重复序列（leucine-richrepeat,LRR）。绿色荧光蛋白（GFP）融合表达载体瞬时转化原生质体进行亚细胞定位,发现FaMAX2定位在细胞核。将FaMAX2在水稻中进行异源过表达对其功能进行验证,结果发现与野生型相比转基因水稻分蘖发育受到抑制,并且是通过抑制了水稻腋芽的伸长生长造成的。在转基因水稻中分析了芽激活与休眠、独脚金内酯合成与转导以及MAX2下游基因的表达模式,发现转基因水稻中芽激活基因OsCDKB2-1和OsCycD2在部分株系中呈现出下调表达,芽休眠基因OsDRM1和OsARP呈现出上调表达,说明在过表达株系中产生的分蘖芽可能保持休眠状态而不能伸长生长造成分蘖减少的表型,同时独脚金内酯下游基因OsD53,OsIPA1和OsTB1呈上调表达,说明转基因株系抑制发育也与这些芽伸长生长关键因子相关。3.FaTB1编码一个TCP转录因子家族成员,是最早发现的玉米teosintebranched1（tb1）的同源基因,该基因是特异在腋芽中表达控制侧生分枝发育信号的关键整合因子。进化树分析发现高羊茅FaTB1与黑麦草LpTB1亲缘关系最近,其次是二穗短柄草BdTB1,水稻OsTB1和玉米ZmTB1。氨基酸序列比对发现FaTB1含有单子叶植物中专有的SP结构域,以及典型的TCP结构域和TB1特有的R结构域。亚细胞定位分析显示FaTB1定位在细胞核中。表达模式分析发现该基因在腋芽和基部分蘖节中的表达量最高。将FaTB1在高羊茅中进行过表达后,发现转基因株系与野生型相比分蘖显着减少,对转基因株系分蘖芽和分蘖的动态变化分析,发现FaTB1通过影响腋芽的伸长生长而不是影响了腋芽的起始来抑制分蘖发育。研究发现转基因株系基部分蘖节中ABA的含量升高以及ABA合成及信号转导相关基因的表达上调,同时转基因株系中芽休眠基因上调表达,芽激活基因下调表达,说明转基因株系抑制分蘖芽的伸长生长可能与ABA含量升高导致的腋芽休眠相关。在高羊茅中通过酵母单杂交获得FaTB1的潜在下游基因FaHOX12,并且该基因在转基因株系中得到上调表达。通过酵母双杂交及双分子荧光互补实验筛选和验证了与FaTB1可能存在的互作蛋白FaGID1L2和FaUPL1,以期为进一步研究FaTB1抑制分蘖发育的潜在机制提供基础。
吴雪莉[9]（2017）在《超表达CdNF-YC和CdSAMDC提高海滨雀稗抗逆性研究》文中进行了进一步梳理海滨雀稗（Paspalums vaginatium O.Swartz）是一种重要的暖季型草坪草,具有优良的草坪性状,在我国长江以南地区的高尔夫球场被广泛应用。海滨雀稗作为盐土植物,能严格调节对钠的摄取量,是目前最耐盐的暖季型草坪草种。海滨雀稗对干旱和低温的耐受能力低于大多数暖季型草坪草,极大限制了它在我国北方干旱和半干旱盐渍土地区的推广种植。因此,亟需开展海滨雀稗的耐旱耐寒育种,培育耐旱耐低温的新种质。本研究以海滨雀稗为研究对象,首次建立了高效的农杆菌介导的遗传转化体系。通过农杆菌介导转化的方法,用含有Hpt标记基因和GUS报告基因的pCAMBIA1305.2载体,浸染海滨雀稗胚性愈伤组织。通过确定潮霉素最佳筛选压以及优化农杆菌转化方法,建立了高效稳定的遗传转化方法:菌液浓度OD600=0.6、添加100 μMAS、0.01%Silwet L-77、超声波处理5 min、真空处理20 min条件下,共培养2d,可以获得高的GUS瞬时转化效率。最高GUS瞬时转化效率可达98.8%,平均GUS瞬时转化效率87.1%。通过PCR、Southern blot检测证明T-DNA成功在海滨雀稗基因组中表达,平均转化效率为8%。我们利用农杆菌介导转化的方法,将狗牙根NF-YC整合到海滨雀稗基因组中,首次成功获得了表达CdNF-YC的转基因海滨雀稗新种质。与此同时,将狗牙根SAMDC基因和具有草铵膦抗性的bar基因同时整合到海滨雀稗基因组中,首次成功获得了具有除草剂抗性的表达CdSAMDC的转基因海滨雀稗新种质。通过PCR、Southern blot检测,证明T-DNA成功在海滨雀稗基因组中表达。通过qRT-PCR分析,转基因海滨雀稗中CdNF-YC的相对表达量显着高于野生型;在干旱、低温、盐处理条件下,转基因海滨雀稗中CdSAMDC的相对表达量显着高于野生型。过表达bar基因的转基因海滨雀稗具有明显的BASTA除草剂抗性。NF-YC核转录因子通过与其他调控因子相互作用,激活或抑制下游基因的表达,参与调控逆境应答。干旱条件下,表达CdNF-YC的转基因海滨雀稗株系具有显着更低的相对电导率,显着更高的叶片相对含水量以及复水后存活率,耐旱性显着提高。过表达CdNF-YC的转基因海滨雀稗对高盐的耐受力也进一步提高。在高盐胁迫条件下,表达CdNF-YC海滨雀稗株系具有显着更低的叶片枯黄率,保持了显着更高的叶片含水量、根系重量、光系统Ⅱ最大光化学效率和叶绿素含量。在高盐条件下,转基因海滨雀稗通过保持体内更低的Na+含量,和更高的K+含量以及K+/Na+比,从而显着提高了耐盐性。在干旱、盐胁迫条件下,转基因海滨雀稗中CdNF-YC基因激活胁迫响 应 基因 PvDREB2A、PvDREB1B、PvLEA3、PvP5CS1、PvABI 的表达,相对表达量均显着高于野生型。ABA处理,显着提高了PvLEA3、PvP5CS1、PvABI基因的相对表达量,且转基因株系显着高于野生型;而PvDREB2A、PvDREB1B的诱导表达量变化较小。SAMDC基因通过调节海滨雀稗体内不同形态、不同种类的多胺合成与代谢,调控对不同逆境的应答反应。干旱胁迫下,表达CdSAMDC转基因海滨雀稗具有更低的相对电导率,更高的相对含水量和复水后存活率,并显着高于野生型,获得了更高的耐旱能力。转基因株系的游离态的腐胺Put、亚精胺Spd含量显着高于野生型;而结合态、束缚态及精胺Spm含量虽升高,但差异不显着。表达CdSAMDC转基因海滨雀稗的低温耐受能力显着提高,具有显着低于野生型的低温半致死温度;低温处理后的存活率显着高于野生型。低温胁迫条件下,转基因株系3种形态的腐胺Put含量均显着高于野生型。游离态亚精胺无显着差异,而结合态、束缚态的亚精胺Spd含量显着低于野生型。游离态精胺Spm显着高于野生型;结合态、束缚态精胺Spm稍高于野生型。与此同时,表达CdSAMDC转基因株系的耐盐性也得到进一步的提高。在高盐胁迫下,转基因海滨雀稗具有显着更高的光合作用能力、K+含量、K+/Na+比。转基因株系中游离态的腐胺Put、精胺Spm含量,显着高于野生型;游离态亚精胺Spd含量显着低于野生型;束缚态多胺差异均不显着。CdSAMDC基因通过调控体内多胺代谢,显着提高了转基因株系体内GABA含量,参与海滨雀稗对干旱、低温、盐的抵御过程。本研究首次建立了海滨雀稗稳定的农杆菌转化体系,同时获得了表达CdNF-YC和CdSAMDC的转基因新种质,显着提高了海滨雀稗的耐旱性、耐寒性、耐盐性,以及除草剂的抗性。
肖国增[10]（2016）在《匍匐翦股颖对盐胁迫的响应和AsNHX2基因功能研究》文中指出匍匍翦股颖（Agrostis stoloniferaL.）属于禾本科翦股颖属,冷季型草坪草,它具有良好的叶片质地、耐低修剪和抗冻性,是世界上城市绿地、高尔夫球场和保龄球场等高质量草坪中应用最广泛的草种。但由于耗水量大,耐盐性不够理想,限制了它更大的应用范围。目前,对盐胁迫下匍匐翦股颖的生理和分子响应、耐盐性相关基因的克隆与功能鉴定以及高光谱反射特征的研究还非常有限。本研究以Penncross和SeasideⅡ为材料,探讨了盐胁迫下的光合作用、抗氧化代谢、抗氧化酶基因表达和叶片高光谱特征等生理和分子响应机制;构建了高光谱反演电解质渗透率模型;克隆了Penncross AsNHX2基因并对其功能进行了初步鉴定。研究结果如下:1、通过测定盐胁迫下Penncross和SeasideⅡ的草坪质量、叶绿素、抗氧化酶活性表明:第10天Seaside Ⅱ的草坪坪观质量、叶绿素含量、光合速率以及CAT、APX和POD的活性要比Penncross好;而SOD活性则低于Penncross,但在盐处理后期SeasideⅡ要高于 Penncross。2、采用qRT-PCR对盐胁迫下5个抗氧化酶基因的表达分析表明:在盐处理的第3h,Seaside Ⅱ CytCu/ZnSOD和POD的表达量要低于Penncross,但在12h后要高于Penncross;APX的表达量在3h后高于Penncross;FeSOD和CAT表达量一直高于Penncross。3、在分析盐胁迫下Penncross和Seaside Ⅱ叶片EL与高光谱反射率特征参数相关性的基础上,利用回归法建立反演模型表明:以541nm、617nm和651nm波段反射率,541nm、617nm 波段和 651 nm、718nm 波段构成的 NDVI,667nm、668nm 波段构成的DVI,以及绿边幅值和绿边面积为自变量,采用偏最小二乘回归法反演叶片EL的模型精度高。4、采用同源克隆与RACE技术克隆了 Penncross的AsNHX2基因,该基因ORF为1617bp,属于第一类NHX家族。AsNHX2基因在新叶中的表达量最高,受盐、低温和SA诱导上调。通过构建该基因的两个植物表达载体,转化烟草表明:在液泡膜中观察到了明亮的荧光。在盐胁迫下,转基因植株有较好的生长状态、K+离子吸收能力、光合作用效率和降解活性氧的能力,能提高NtSOD、NtCAT、NtDREB4初NtP5CS的表达量。综上所述,在盐胁迫下Penncross和Seaside Ⅱ的生理和分子响应有差异,SeasideⅡ的各指标前期低,但在后期则高于Penncross;基于偏最小二乘法构建的高光谱模型,能较好的反演盐胁迫下的电解质渗透率;AsNHX2基因定位于液泡膜中,对提高植物耐盐性有积极作用。
二、转基因草坪草的研究概况与展望（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、转基因草坪草的研究概况与展望（论文提纲范文）
（1）日本结缕草（Zoysia japonica）ZjERF3基因的克隆和功能鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 1 引言 |
| 1.1 AP2/ERF转录因子的研究进展 |
| 1.1.1 AP2/ERF转录因子的分类 |
| 1.1.2 AP2/ERF转录因子的结合特征 |
| 1.1.3 AP2/ERF转录因子对下游基因的调控 |
| 1.1.4 AP2/ERF转录因子的生物学功能 |
| 1.2 结缕草的概况 |
| 1.2.1 结缕草的分布和研究价值 |
| 1.2.2 结缕草抗逆性研究进展 |
| 1.3 本研究的目的和内容 |
| 1.3.1 研究目的及意义 |
| 1.3.2 研究内容及方法 |
| 1.3.3 技术路线 |
| 1.3.4 创新点 |
| 2 ZjERF3基因的克隆及表达模式分析 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 植物材料及处理 |
| 2.1.2 载体菌株 |
| 2.1.3 生化试剂 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 RNA的提取 |
| 2.2.2 cDNA的合成 |
| 2.2.3 构建克隆载体pMD-ZjERF3 |
| 2.2.4 生物信息学分析 |
| 2.2.5 qRT-PCR分析 |
| 2.3 试验结果 |
| 2.3.1 ZjERF3基因的序列特征 |
| 2.3.2 ZjERF3基因的表达模式分析 |
| 2.4 讨论 |
| 3 ZjERF3蛋白自激活活性验证及亚细胞定位 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 植物材料及培养 |
| 3.1.2 载体菌株 |
| 3.1.3 生化试剂 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 构建表达载体pGBKT7-ZjERF3和35S::ZjERF3::YFP |
| 3.2.2 pGBKT7-ZjERF3载体转化酵母细胞 |
| 3.2.3 35S::ZjERF3:YFP载体转化农杆菌感受态细胞 |
| 3.3 结果分析 |
| 3.3.1 ZjERF3蛋白的自激活活性验证 |
| 3.3.2 ZjERF3蛋白的亚细胞定位 |
| 3.4 讨论 |
| 4 ZjERF3基因转化酵母及功能验证 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 载体菌株 |
| 4.1.2 生化试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 构建pYES2-ZjERF3表达载体 |
| 4.2.2 pYES2-ZjERF3载体转化酵母感受态细胞 |
| 4.3 试验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 5 农杆菌介导的花序侵染法转化拟南芥 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 植物材料 |
| 5.1.2 载体菌株 |
| 5.1.3 生化试剂 |
| 5.1.4 主要仪器 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 拟南芥的转化和鉴定 |
| 5.2.2 转基因拟南芥的抗性分析 |
| 5.3 试验结果 |
| 5.3.1 农杆菌转化及阳性检测 |
| 5.3.2 转基因拟南芥的获得 |
| 5.3.3 转基因拟南芥表型观察 |
| 5.3.4 发芽率及鲜重 |
| 5.3.5 生理生化指标及存活率 |
| 5.4 讨论 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 全文结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 A |
| 附录 B |
| 附录 C |
| 个人简介 |
| 导师简介 |
| 第二导师简介 |
| 致谢 |
（2）狗牙根CdNF-YA23基因响应盐胁迫的功能解析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 研究背景与意义 |
| 1.2 草坪草耐盐性研究进展 |
| 1.2.1 盐胁迫对草坪草的影响 |
| 1.2.2 草坪草耐盐性评价 |
| 1.2.3 草坪草对盐胁迫的应答机制 |
| 1.3 NF-Y转录因子研究进展 |
| 1.3.1 核因子Y介绍 |
| 1.3.2 NF-Y的结构 |
| 1.3.3 NF-Y家族转录因子生物学功能 |
| 1.4 本研究的主要内容、研究目的与意义 |
| 1.4.1 本研究的研究目的及意义 |
| 1.4.2 研究内容与技术路线 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 狗牙根cDNA |
| 2.1.3 菌株和质粒 |
| 2.1.4 本实验常用培养基 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 狗牙根材料种植及处理 |
| 2.2.2 CdNF-YA23 表达模式分析 |
| 2.2.3 狗牙根CdNF-YA23 基因克隆 |
| 2.2.4 构建表达载体 |
| 2.2.5 花浸染法转化拟南芥 |
| 2.2.6 CdNF-YA23 转录因子特征分析 |
| 2.2.7 CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥苗期盐和ABA处理 |
| 2.2.8 CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥成苗盐处理后生理指标测定 |
| 2.2.9 盐信号途径相关基因表达量检测 |
| 2.2.10 CdNF-YA23 过表达转基因水稻的获得(要求全程无菌操作) |
| 第3章 研究结果与分析 |
| 3.1 狗牙根中NF-Y家族蛋白多序列比对 |
| 3.2 CdNF-YA23 基因克隆及表达模式分析 |
| 3.2.1 CdNF-YA23 基因表达模式分析 |
| 3.2.2 GUS组织化学染色法分析CdNF-YA23 表达模式 |
| 3.3 CdNF-YA23 转录因子特征分析 |
| 3.3.1 CdNF-YA23 亚细胞定位分析 |
| 3.3.2 CdNF-YA23 自激活活性分析 |
| 3.4 CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥对盐胁迫和ABA敏感 |
| 3.4.1 CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥的获得 |
| 3.4.2 盐和ABA处理下CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥的表型 |
| 3.5 盐胁迫对CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥生理指标的影响 |
| 3.5.1 盐胁迫后CdNF-YA23 过表达拟南芥表型分析 |
| 3.5.2 盐胁迫对CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥丙二醛含量和电导率影响 |
| 3.5.3 盐胁迫对CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥叶绿素含量影响 |
| 3.5.4 盐胁迫下CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥快速叶绿素荧光诱导动力学曲线分析 |
| 3.5.5 盐处理对CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥叶片内离子含量影响 |
| 3.5.6 盐信号途径相关基因表达量检测 |
| 3.6 CdNF-YA23 过表达转基因水稻的获得 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 CdNF-YA23 表达受盐、干旱和ABA诱导 |
| 4.2 CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥对盐胁迫和ABA敏感 |
| 4.3 盐胁迫对CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥生理特征的影响 |
| 4.4 盐胁迫对CdNF-YA23 过表达转基因拟南芥中盐信号基因影响 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录A 染色体步移技术得到CdNF-YA23 基因的启动子区域碱基序列 |
| 附录B 本实验中一些常用培养基的配方 |
| 致谢 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的论文与研究成果 |
（3）日本结缕草ZjNAC3基因的功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 引言 |
| 1.1 NAC转录因子 |
| 1.1.1 NAC转录因子的结构 |
| 1.1.2 NAC转录因子的生物学特性 |
| 1.2 盐胁迫 |
| 1.2.1 植物耐盐机理的研究 |
| 1.2.2 转录因子与盐胁迫 |
| 1.3 研究的目的与意义 |
| 1.4 技术路线 |
| 2 日本结缕草ZjNAC3基因特性研究 |
| 2.1 试验材料及试剂 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 培养基及试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 ZjNAC3基因的克隆 |
| 2.2.2 荧光定量 |
| 2.2.3 亚细胞定位 |
| 2.2.4 酵母双杂筛库 |
| 2.2.5 数据分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 基因克隆与生物信息学分析 |
| 2.3.2 组织差异性分析 |
| 2.3.3 不同处理下基因的的表达情况 |
| 2.3.4 亚细胞定位 |
| 2.3.5 转录自激活活性验证 |
| 2.3.6 酵母双杂筛库 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 日本结缕草ZjNAC3基因启动子的功能研究 |
| 3.1 试验材料及试剂 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 启动子的生物信息学分析 |
| 3.2.2 转启动子拟南芥植株的获得 |
| 3.2.3 GUS组织化学染色 |
| 3.2.4 荧光定量分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 启动子序列的获得 |
| 3.3.2 启动子作用元件分析 |
| 3.3.3 转启动子拟南芥植株的获得 |
| 3.3.4 GUS组织化学染色 |
| 3.3.5 不同处理下启动子驱动GUS基因的表达 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 转ZjNAC3基因拟南芥的耐盐性分析 |
| 4.1 试验材料及试剂 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 ZjNAC3基因在酵母中耐盐性分析 |
| 4.2.2 转基因植株的获得 |
| 4.2.3 转基因植株的耐盐性分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 ZjNAC3基因对盐胁迫下酵母菌株生长的影响 |
| 4.3.2 转ZjNAC3拟南芥的获得 |
| 4.3.3 转基因株系中ZjNAC3基因的表达情况 |
| 4.3.4 表型观察 |
| 4.3.5 生理指标的测定 |
| 4.3.6 抗性基因的表达分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 全文结论与展望 |
| 5.1 全文结论 |
| 5.2 创新点与不足 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附图 |
| 个人简介 |
| 导师简介 |
| 第一导师简介 |
| 第二导师简介 |
| 致谢 |
（4）沟叶结缕草愈伤组织干旱胁迫响应及其矮化突变体变异机理的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 1 绪论 |
| 1.1 暖季型草坪草生物技术研究进展 |
| 1.1.1 组织培养再生体系的建立和完善 |
| 1.1.2 体细胞无性系变异 |
| 1.1.3 遗传转化的研究 |
| 1.1.4 转录组学的研究 |
| 1.2 植物激素与生长调控 |
| 1.2.1 生长素参与植物生长调控 |
| 1.2.2 油菜素甾醇参与植物生长调控 |
| 1.2.3 脱落酸参与植物生长调控 |
| 1.3 植物激素在植物组织培养中的应用 |
| 1.3.1 生长素在植物组织培养中的应用 |
| 1.3.2 细胞分裂素在植物组织培养中的应用 |
| 1.3.3 油菜素甾醇在植物组织培养中的应用 |
| 1.4 研究目的、主要内容及技术路线 |
| 1.4.1 研究目的及意义 |
| 1.4.2 主要内容 |
| 1.4.3 技术路线 |
| 2 油菜素甾醇调控沟叶结缕草愈伤组织生长和再生 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 EBL处理下愈伤组织的继代生长 |
| 2.1.3 EBL处理下愈伤组织的再生 |
| 2.1.4 EBL处理下愈伤组织继代和再生过程中的生理测定 |
| 2.1.5 数据统计与分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 不同浓度EBL对沟叶结缕草愈伤组织生长的影响 |
| 2.2.2 不同浓度EBL对沟叶结缕草愈伤组织再生的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 BR调控沟叶结缕草愈伤组织生长和再生 |
| 2.3.2 BR激活沟叶结缕草愈伤组织生长和再生过程中抗氧化体系 |
| 2.4 小结 |
| 3 油菜素甾醇调控沟叶结缕草再生的干旱胁迫响应 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 不同浓度PEG-6000处理下愈伤组织的再生 |
| 3.1.3 EBL处理干旱胁迫下愈伤组织的再生 |
| 3.1.4 EBL处理干旱胁迫下愈伤组织再生的生理测定 |
| 3.1.5 数据统计与分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 不同浓度PEG处理对沟叶结缕草愈伤组织再生形态的影响 |
| 3.2.2 不同浓度PEG处理对沟叶结缕草再生生理的影响 |
| 3.2.3 干旱胁迫下不同浓度EBL对沟叶结缕草愈伤组织再生形态的影响 |
| 3.2.4 干旱胁迫下不同浓度EBL对沟叶结缕草再生植株生理的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 干旱胁迫对沟叶结缕草愈伤组织再生的影响 |
| 3.3.2 干旱胁迫下沟叶结缕草愈伤组织抗氧化系统的响应 |
| 3.3.3 BR参与沟叶结缕草愈伤组织对干旱胁迫的响应 |
| 3.4 小结 |
| 4 沟叶结缕草矮化突变体矮化机理研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 矮化突变体遗传稳定性的形态学评估 |
| 4.1.3 矮化突变体遗传稳定性的生理学测定 |
| 4.1.4 矮化突变体内源激素分析 |
| 4.1.5 RNA提取和文库构建 |
| 4.1.6 RNA-Seq测序、组装和注释 |
| 4.1.7 差异表达基因的鉴定与功能注释 |
| 4.1.8 实时定量PCR(RT-qPCR)分析 |
| 4.1.9 数据统计与分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 矮化突变体形态特征的稳定性 |
| 4.2.2 矮化突变体生理变化的稳定性 |
| 4.2.3 矮化突变体内源激素含量的变化 |
| 4.2.4 Unigene组装和注释 |
| 4.2.5 差异表达基因的识别与聚类分析 |
| 4.2.6 差异表达基因的功能注释和富集分析 |
| 4.2.7 矮化相关DEGs的 RT-qPCR分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 突变体表型的长期稳定性 |
| 4.3.2 抗氧化酶活性和其他与矮化相关的生理变化 |
| 4.3.3 植物激素对矮化突变体的调控作用 |
| 4.3.4 细胞壁与植物矮化 |
| 4.4 小结 |
| 5 结论、创新点与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简历及攻读学位期间研究成果 |
（5）高羊茅高温响应转录因子FaNAC74的功能鉴定及耐高温种质筛选应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 植物耐高温研究进展 |
| 1.1.1 高温对植物的影响 |
| 1.1.2 植物耐高温分子机制 |
| 1.2 高羊茅耐高温研究进展 |
| 1.2.1 高温对高羊茅的影响 |
| 1.2.2 高羊茅种质的耐高温筛选评价 |
| 1.2.3 高羊茅耐高温的分子机制研究进展 |
| 1.3 NAC转录因子家族的研究进展 |
| 1.3.1 NAC转录因子概述 |
| 1.3.2 NAC基因在逆境胁迫过程中的研究进展 |
| 1.4 本研究目的意义及技术路线 |
| 1.4.1 研究目的 |
| 1.4.2 研究意义 |
| 1.5 研究内容 |
| 1.5.1 高羊茅种质资源筛选评价 |
| 1.5.2 FaNAC74基因的克隆与特征鉴定 |
| 1.5.3 FaNAC74转录因子的功能鉴定 |
| 1.5.4 FaNAC74下游基因的发掘鉴定 |
| 1.6 技术路线 |
| 第2章 研究方法 |
| 2.1 高羊茅种质资源筛选评价 |
| 2.1.1 高羊茅材料扩繁实验方法 |
| 2.1.2 高羊茅武汉地区越夏实验方法 |
| 2.2 FaNAC74基因表达差异分析 |
| 2.2.1 FaNAC74基因特异性定量引物设计 |
| 2.2.2 高羊茅高温处理实验 |
| 2.2.3 高羊茅叶片样品RNA提取方法 |
| 2.2.4 高羊茅叶片样品RNA反转录 |
| 2.2.5 FaNAC74基因在不同品种高羊茅中的表达模式测定 |
| 2.3 FaNAC74功能分析与基因克隆 |
| 2.3.1 FaNAC74基因序列分析 |
| 2.3.2 FaNAC74基因克隆 |
| 2.3.2.1 引物设计及克隆 |
| 2.3.2.2 PCR产物凝胶回收 |
| 2.3.3 FaNAC74 基因与pESI-Blunt载体连接 |
| 2.3.4 转化大肠杆菌DH5α |
| 2.3.5 质粒提取方法 |
| 2.3.6 质粒酶切方法 |
| 2.3.7 载体连接方法 |
| 2.3.8 质粒转化农杆菌实验方法 |
| 2.3.9 农杆菌转染拟南芥方法 |
| 2.4 转基因阳性苗的插入及表达验证 |
| 2.4.1 拟南芥基因组DNA提取方法 |
| 2.4.2 转基因拟南芥gDNA水平阳性苗鉴定 |
| 2.4.3 转基因拟南芥RNA水平鉴定方法 |
| 2.5 转基因植株高温处理实验方法 |
| 2.6 FaNAC74蛋白的亚细胞定位 |
| 2.6.1 转化根瘤农杆菌GV3101 |
| 2.6.2 烟草瞬时转化法观察亚细胞定位 |
| 2.7 转录组分析方法 |
| 2.7.1 样品收集和准备 |
| 2.7.2 RNA提取与检测 |
| 2.7.3 文库构建与质检 |
| 2.7.4 上机测序 |
| 2.7.5 数据分析 |
| 2.7.5.1 数据质控 |
| 2.7.5.2 序列比对到参考基因组 |
| 2.7.5.3 基因表达水平定量 |
| 2.7.5.4 差异表达分析 |
| 2.7.5.5 差异基因富集分析 |
| 第3章 实验结果与分析 |
| 3.1 高羊茅种质资源筛选 |
| 3.1.1 室外温度统计结果 |
| 3.1.2 高温越夏后高羊茅种质的表型统计 |
| 3.1.3 高温越夏后高羊茅种质的草坪质量评定 |
| 3.2 FaNAC74基因表达差异分析与序列分析结果 |
| 3.2.1 FaNAC74基因表达模式分析 |
| 3.2.2 FaNAC74基因克隆 |
| 3.2.3 FaNAC74蛋白跨膜结构域预测结果 |
| 3.2.4 FaNAC74蛋白多序列比对结果 |
| 3.2.5 FaNAC74蛋白进化树分析结果 |
| 3.3 FaNAC74亚细胞定位 |
| 3.4 过表达转基因拟南芥株系中FaNAC74基因的表达水平鉴定 |
| 3.5 35S:FaNAC74 转基因拟南芥高温处理存活率统计 |
| 3.6 高温处理前后FaNAC74过表达拟南芥转录组测序结果 |
| 3.6.1 转录组分析 |
| 3.6.2 各组合差异基因数目统计结果 |
| 3.6.3 各样品组间差异基因韦恩图分析结果 |
| 3.6.4 各组间及组内差异表达基因聚类分析结果 |
| 3.6.5 GO功能富集分析结果 |
| 3.6.6 KEGG通路富集分析结果 |
| 3.6.7 FaNAC74下游基因的发掘 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 高羊茅种质资源耐高温筛选评价 |
| 4.2 FaNAC74转录因子结构和功能解析 |
| 4.3 FaNAC74下游基因发掘及调控网络解析 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录A |
| 致谢 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文 |
（7）CRISPR/Cas9介导无外源DNA日本结缕草ZjSGR基因编辑技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 1 引言 |
| 1.1 结缕草简介 |
| 1.2 我国草坪草转基因技术育种进展 |
| 1.3 结缕草属植物育种进展 |
| 1.3.1 结缕草常规育种国内外进展 |
| 1.3.2 延长结缕草绿期研究 |
| 1.3.3 结缕草生物技术育种研究 |
| 1.4 植物滞绿基因SGR与ZjSGR研究 |
| 1.4.1 植物滞绿基因SGR功能及滞绿突变 |
| 1.4.2 ZjSGR对植物持绿性的调控 |
| 1.5 CRISPR/Cas9基因编辑技术简介 |
| 1.5.1 CRISPR/Cas9基因编辑技术的来源与发展 |
| 1.5.2 CRISPR/Cas9基因编辑技术的结构与作用机理 |
| 1.5.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用 |
| 1.6 转基因育种的潜在局限 |
| 1.7 CRISPR/Cas9核糖核蛋白介导的基因编辑技术 |
| 1.7.1 RNP基因编辑技术 |
| 1.7.2 RNP技术的应用 |
| 1.8 试验研究目的及意义 |
| 2 日本结缕草再生体系构建 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 主要仪器与试剂 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 植物材料预处理 |
| 2.2.2 试验设计 |
| 2.2.3 培养基的制备 |
| 2.2.4 培养方法 |
| 2.2.5 数据统计与分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 添加6-BA对结缕草成熟种子发芽率及愈伤组织诱导率的影响 |
| 2.3.2 添加α-酮戊二酸对结缕草种子发芽率及愈伤组织诱导率的影响 |
| 2.3.3 正交试验结果分析 |
| 2.3.4 不同基因型结缕草种子发芽率与诱导率的差异 |
| 2.3.5 愈伤组织生芽培养 |
| 2.4 讨论 |
| 3 CRISPR/Cas9核糖核蛋白基因编辑体系构建 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 生化试剂 |
| 3.1.2 试验仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 敲除靶位点的选择设计 |
| 3.2.2 体外转录模板的获得 |
| 3.2.3 含有ZjSGR靶位点sgRNA的体外转录 |
| 3.2.4 sgRNA纯化 |
| 3.2.5 Cas9蛋白表达 |
| 3.2.6 Cas9蛋白纯化 |
| 3.2.7 Cas9蛋白浓度检测 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 靶位点的选择设计 |
| 3.3.2 体外转录模板获得 |
| 3.3.3 sgRNA的转录与纯化 |
| 3.3.4 Cas9蛋白的表达与纯化 |
| 3.4 讨论 |
| 4 基因枪介导的RNP导入 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 主要仪器与试剂 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 RNP复合体体外制备 |
| 4.2.2 基因枪的操作 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 5 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录A |
| 附录B |
| 附录C |
| 附录D |
| 个人简介 |
| 导师简介 |
| 致谢 |
（8）干旱胁迫抑制高羊茅分蘖发育的分子机理（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 植物分蘖发育的研究进展 |
| 1.1 植物分蘖的形态特征 |
| 1.2 植物分蘖发育的内在调节 |
| 1.3 植物分蘖发育的环境影响 |
| 1.4 植物分蘖发育的激素调节 |
| 1.5 植物分蘖发育的分子调控 |
| 2 F-box家族基因及MAX2的研究进展 |
| 2.1 F-box蛋白分类与功能 |
| 2.2 MAX2在植物生长发育中的作用 |
| 3 TCP家族基因及TB1的研究进展 |
| 3.1 TCP家族基因的分类与功能 |
| 3.2 TB1在植物生长发育中的作用 |
| 4 研究目的与意义和技术路线 |
| 4.1 研究目的与意义 |
| 4.2 技术路线 |
| 第二章 干旱胁迫抑制高羊茅分蘖发育进程的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 植物材料与生长条件 |
| 1.2 干旱处理和实验设计 |
| 1.3 植株表型分析 |
| 1.4 总独脚金内酯含量的测量 |
| 1.5 实时荧光定量PCR分析基因表达量 |
| 1.6 表型指标和表达数据的分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 干旱胁迫对腋芽起始的影响 |
| 2.2 干旱胁迫对腋芽伸长生长的影响 |
| 2.3 干旱胁迫对叶腋分生组织起始,芽激活和休眠基因表达水平的影响 |
| 2.4 干旱胁迫对独脚金内酯含量和信号途径基因表达模式的影响 |
| 3 讨论 |
| 第三章 FaMAX2异源转化水稻对分蘖发育功能的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 FaMAX2基因cDNA序列克隆 |
| 1.2 FaMAX2的序列分析 |
| 1.3 FaMAX2亚细胞定位 |
| 1.4 FaMAX2的水稻转化及鉴定 |
| 1.5 转基因水稻分蘖数统计 |
| 1.6 基因表达分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 FaMAX2 cDNA序列的克隆 |
| 2.2 FaMAX2的序列分析与鉴定 |
| 2.3 FaMAX2的亚细胞定位和组织表达模式分析 |
| 2.4 FaMAX2转基因水稻的获得与鉴定 |
| 2.5 FaMAX2转基因水稻对分蘖发育的影响 |
| 2.6 FaMAX2转基因水稻中芽激活和休眠基因的表达模式分析 |
| 2.7 FaMAX2转基因水稻中独脚金内酯代谢途径下游基因的表达模式分析 |
| 3 讨论 |
| 第四章 FaTB1过表达高羊茅对调控分蘖发育功能的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 FaTB1基因cDNA序列克隆 |
| 1.2 FaTB1的序列分析 |
| 1.3 FaTB1亚细胞定位 |
| 1.4 FaTB1植物表达载体的构建 |
| 1.5 高羊茅遗传转化及转基因株系鉴定 |
| 1.6 外源细胞分裂素处理和实验设计 |
| 1.7 植株表型分析 |
| 1.8 脱落酸含量的测量 |
| 1.9 HD-Zip I家族基因的鉴定 |
| 1.10 酵母单杂交 |
| 1.11 实时荧光定量PCR分析基因表达量 |
| 1.12 酵母双杂交 |
| 1.13 FaTB1候选互作蛋白的双分子荧光互补(BIFc)验证 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 FaTB1序列的克隆和鉴定 |
| 2.2 FaTB1的亚细胞定位和组织表达模式分析 |
| 2.3 高羊茅FaTB1过表达株系的获得与鉴定 |
| 2.4 FaTB1对高羊茅过表达株系分蘖发育的影响 |
| 2.5 FaTB1对高羊茅过表达株系腋芽伸长生长的影响 |
| 2.6 高羊茅FaTB1过表达株系基部分蘖节中ABA含量及ABA信号转导途径相关基因的表达分析 |
| 2.7 FaTB1下游基因的酵母单杂交鉴定 |
| 2.8 FaTB1过表达株系中芽激活和休眠基因的表达模式分析 |
| 3 高羊茅FaTB1互作蛋白的筛选与鉴定 |
| 3.1 FaTB1互作蛋白酵母双杂交文库的筛选 |
| 3.2 FaTB1互作蛋白双分子荧光互补(BiFC)验证 |
| 4 讨论 |
| 第五章 全文讨论与结论 |
| 5.1 全文讨论 |
| 5.2 全文结论 |
| 创新点与展望 |
| 创新点 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 RNA的提取方法 |
| 附录二 RNA反转录合成cDNA |
| 附录三 琼脂糖凝胶回收纯化步骤 |
| 附录四 亚克隆载体构建及测序 |
| 附录五 大肠杆菌质粒提取步骤 |
| 附录六 基因序列 |
| 附录七 电转化法转化农杆菌 |
| 附录八 水稻转化培养基配方 |
| 附录九 植物DNA的提取 |
| 附录十 RACE用PCR产物纯化 |
| 附录十一 酵母质粒的提取 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（9）超表达CdNF-YC和CdSAMDC提高海滨雀稗抗逆性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 海滨雀稗抗逆性研究进展 |
| 1.1 海滨雀稗的耐盐性研究 |
| 1.1.1 海滨雀稗对盐胁迫的形态学反应 |
| 1.1.2 海滨雀稗耐盐性机理研究 |
| 1.1.3 海滨雀稗耐盐性评价 |
| 1.2 海滨雀稗的耐旱性研究 |
| 1.2.1 海滨雀稗对干旱胁迫的形态学响应 |
| 1.2.2 海滨雀稗耐旱性评价 |
| 1.3 海滨雀稗耐寒性 |
| 1.3.1 海滨雀稗对低温胁迫的生理生化反应 |
| 1.3.2 海滨雀稗耐寒性评价 |
| 2 NF-Y转录因子与植物耐逆性 |
| 2.1 植物转录因子概述 |
| 2.2 NF-Y转录因子参与植物逆境响应 |
| 3 多胺与植物抗逆性 |
| 3.1 多胺代谢参与植物逆境响应 |
| 3.2 SAMDC基因与植物抗逆性 |
| 3.3 多胺代谢与GABA的生物学功能 |
| 4 禾本科草的转基因育种研究进展 |
| 4.1 植物转基因研究概况 |
| 4.2 农杆菌介导的禾本科草的转化研究进展 |
| 5 研究的目的和意义 |
| 第二章 海滨雀稗遗传转化体系的建立 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 植物材料 |
| 2.2 菌株、质粒、引物 |
| 2.3 工具酶及主要试剂 |
| 2.4 外植体的消毒、接种 |
| 2.5 离体再生培养基 |
| 2.6 诱导并继代胚性愈伤组织 |
| 2.7 不同基因型的愈伤组织对再生率的影响 |
| 2.8 不同培养基对的再生率的影响 |
| 2.9 农杆菌的培养方法 |
| 2.10 农杆菌侵染过程 |
| 2.11 潮霉素筛选压的选择 |
| 2.12 优化农杆菌介导的遗传转化条件 |
| 2.13 抗性愈伤组织筛选与再生 |
| 2.14 GUS基因瞬时、稳定表达染色 |
| 2.15 GUS表达效率和转化效率的统计 |
| 2.16 抗性植株PCR检测 |
| 2.17 Southern blot检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 建立高效的离体再生体系 |
| 3.2 潮霉素筛选压的确定 |
| 3.3 转化条件的优化 |
| 3.4 农杆菌介导的转化体系的建立 |
| 3.5 GUS表达效率与转化效率统计 |
| 3.6 抗性再生植株的分子检测与表型鉴定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 外植体基因型和培养基对愈伤组织诱导、再生的影响 |
| 4.2 潮霉素浓度对遗传转化的影响 |
| 4.3 乙酰丁香酮对遗传转化的影响 |
| 4.4 共培养时间对遗传转化的影响 |
| 4.5 菌液浓度对遗传转化的影响 |
| 4.6 表面活性剂对遗传转化的影响 |
| 4.7 超声波及真空处理对遗传转化的影响 |
| 第三章 表达CdNF-YC和CdSAMDC转基因海滨雀稗的鉴定 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 植物材料 |
| 2.2 菌株、质粒、引物 |
| 2.3 植物材料养护管理 |
| 2.4 除草剂抗性鉴定 |
| 2.5 质粒提取 |
| 2.6 酶切鉴定 |
| 2.7 PCR产物回收纯化 |
| 2.8 目的片段和目的载体的连接 |
| 2.9 转化大肠杆菌感受态及阳性克隆筛选 |
| 2.10 农杆菌EHA105电激感受态细胞的制备 |
| 2.11 电激转化农杆菌及阳性克隆筛选 |
| 2.12 抗性植株PCR检测 |
| 2.13 Southern blot检测 |
| 2.14 数据统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 获得转基因抗性再生植株 |
| 3.2 PCR鉴定 |
| 3.3 Southern blot鉴定 |
| 3.4 除草剂抗性鉴定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 获得表达CdNF-YC转基因海滨雀稗新种质 |
| 4.2 获得表达CdSAMDC转基因海滨雀稗新种质 |
| 4.3 获得抗除草剂转基因海滨雀稗新种质 |
| 第四章 表达CdNF-YC海滨雀稗的耐逆性分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 植物材料处理 |
| 2.2 实时定量PCR引物 |
| 2.3 植物总RNA提取 |
| 2.4 RNA样品检测 |
| 2.5 第一链cDNA的合成 |
| 2.6 实时定量PCR |
| 2.7 相对电导率 |
| 2.8 叶片相对含水量 |
| 2.9 复水后存活率 |
| 2.10 叶片枯黄率 |
| 2.11 地下部生物量 |
| 2.12 最大光化学效率 |
| 2.13 叶绿素含量 |
| 2.14 离子含量测定 |
| 2.15 数据统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 转基因海滨雀稗的基因表达量分析 |
| 3.1.1 转基因海滨雀稗的CdNF-YC和Hpt表达 |
| 3.1.2 CdNF-YC调控海滨雀稗相关胁迫基因的表达 |
| 3.2 转基因海滨雀稗的耐旱性分析 |
| 3.3 转基因海滨雀稗的耐盐性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 表达CdNF-YC基因调控胁迫相关基因的表达 |
| 4.2 表达CdNF-YC提高海滨雀稗的耐旱性 |
| 4.3 表达CdNF-YC提高海滨雀稗的耐盐性 |
| 第五章 表达CdSAMDC海滨雀稗的耐逆性分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 植物材料处理 |
| 2.2 实时定量PCR引物 |
| 2.3 植物总RNA提取 |
| 2.4 RNA样品检测 |
| 2.5 第一链cDNA的合成 |
| 2.6 实时定量PCR |
| 2.7 叶片中多胺含量的测定 |
| 2.8 相对电导率 |
| 2.9 叶片相对含水量 |
| 2.10 复水后存活率 |
| 2.11 叶片枯黄率 |
| 2.12 地下部生物量 |
| 2.13 最大光化学效率 |
| 2.14 叶绿素含量 |
| 2.15 离子含量测定 |
| 2.16 半致死温度的测定 |
| 2.17 低温存活率 |
| 2.18 数据统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 转基因海滨雀稗的SAMDC表达量分析 |
| 3.2 转基因海滨雀稗内源多胺含量对逆境的响应 |
| 3.3 转基因海滨雀稗内源GABA含量对逆境的响应 |
| 3.4 转基因海滨雀稗的耐旱性分析 |
| 3.5 转基因海滨雀稗的耐寒性分析 |
| 3.6 转基因海滨雀稗的耐盐性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 表达CdSAMDC提高海滨雀稗的耐旱性 |
| 4.2 表达CdSAMDC提高海滨雀稗的耐寒性 |
| 4.3 表达CdSAMDC提高海滨雀稗的耐盐性 |
| 第六章 结论与展望 |
| 1 主要结论 |
| 2 创新点 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文 |
| 致谢 |
（10）匍匐翦股颖对盐胁迫的响应和AsNHX2基因功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 引言 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 植物对盐胁迫的生理响应机制 |
| 2.1.1 土壤的盐碱化及对植物的影响 |
| 2.1.2 盐胁迫下植物的渗透调节机制 |
| 2.1.3 盐胁迫下植物的离子平衡机制 |
| 2.1.4 盐胁迫下植物的抗氧化保护机制 |
| 2.1.5 盐胁迫下植物光合作用响应 |
| 2.1.6 盐胁迫下植物生理与高光谱特征参数的相关性 |
| 2.2 植物对盐胁迫的分子响应 |
| 2.2.1 转录因子调控基因响应 |
| 2.2.2 信号传导和调控基因响应 |
| 2.2.3 离子平衡的转运蛋白基因调控响应 |
| 2.2.4 Na~+/H~+逆转运蛋白基因调控响应 |
| 2.3 研究的目的和内容 |
| 2.3.1 研究的目的和意义 |
| 2.3.2 研究的内容和技术路线 |
| 3 匍匐翦股颖对盐胁迫的生理响应研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 材料培养 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 材料处理与取样 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 草坪坪观质量 |
| 3.2.2 叶片相对含水量 |
| 3.2.3 叶绿素含量 |
| 3.2.4 叶片光合速率和蒸腾速率 |
| 3.2.5 抗氧化酶活性 |
| 3.2.6 可溶性蛋白 |
| 3.3 数据处理与统计分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 草坪坪观质量 |
| 3.4.2 叶片相对含水量 |
| 3.4.3 叶绿素含量 |
| 3.4.4 叶片光合速率和蒸腾速率 |
| 3.4.5 抗氧化酶活性 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 盐胁迫下匍匐翦股颖抗氧化酶基因表达研究 |
| 4.1 扩增抗氧化酶基因与生物信息学分析 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.1.3 结果与分析 |
| 4.2 盐胁迫下抗氧化酶基因的表达分析 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 数据处理 |
| 4.2.4 结果与分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 5 盐胁迫下匍匐翦股颖高光谱与电解质渗透率的模型构建 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 材料培养 |
| 5.1.2 材料处理与取样 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 叶片高光谱反射率测定与数据处理 |
| 5.2.2 叶片电解质渗透率测定 |
| 5.3 建模方法与检验 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 盐胁迫下叶片的高光谱特征分析 |
| 5.4.2 盐胁迫对叶片电解质渗透率的影响 |
| 5.4.3 盐胁迫下叶片电解质渗透率与反射率的相关分析 |
| 5.4.4 叶片高光谱与电解质渗透率反演模型构建 |
| 5.4.5 叶片高光谱与电解质渗透率反演模型检验 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 6 AsNHX2基因克隆与表达研究 |
| 6.1 AsNHX2基因克隆与生物信息学分析 |
| 6.1.1 实验材料 |
| 6.1.2 实验方法 |
| 6.1.3 结果与分析 |
| 6.2 AsNHX2基因表达量分析 |
| 6.2.1 实验材料 |
| 6.2.2 实验方法 |
| 6.2.3 结果与分析 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 7 AsNHX2基因功能研究 |
| 7.1 AsNHX2基因亚细胞定位 |
| 7.1.1 实验材料 |
| 7.1.2 实验方法 |
| 7.1.3 结果与分析 |
| 7.2 AsNHX2基因转化烟草 |
| 7.2.1 实验材料 |
| 7.2.2 实验方法 |
| 7.2.3 结果与分析 |
| 7.3 转基因烟草的功能分析 |
| 7.3.1 实验材料 |
| 7.3.2 实验方法 |
| 7.3.3 数据处理 |
| 7.3.4 结果与分析 |
| 7.4 讨论 |
| 7.5 小结 |
| 8 总结与展望 |
| 8.1 总结 |
| 8.2 创新点 |
| 8.3 展望 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 导师简介 |
| 致谢 |
四、转基因草坪草的研究概况与展望（论文参考文献）
- [1]日本结缕草（Zoysia japonica）ZjERF3基因的克隆和功能鉴定[D]. 张蕊. 北京林业大学, 2020(03)
- [2]狗牙根CdNF-YA23基因响应盐胁迫的功能解析[D]. 刘芳兵. 中国科学院大学(中国科学院武汉植物园), 2020(01)
- [3]日本结缕草ZjNAC3基因的功能研究[D]. 姜红岩. 北京林业大学, 2020(06)
- [4]沟叶结缕草愈伤组织干旱胁迫响应及其矮化突变体变异机理的研究[D]. 林恬逸. 浙江大学, 2020(01)
- [5]高羊茅高温响应转录因子FaNAC74的功能鉴定及耐高温种质筛选应用[D]. 纪康. 中国科学院大学(中国科学院武汉植物园), 2020(01)
- [6]价值观影响下公众对转基因草坪草的态度和支付意愿的研究[J]. 张利娟,季梦晨,任亮. 草业科学, 2019(10)
- [7]CRISPR/Cas9介导无外源DNA日本结缕草ZjSGR基因编辑技术研究[D]. 张睿. 北京林业大学, 2019(04)
- [8]干旱胁迫抑制高羊茅分蘖发育的分子机理[D]. 王剑. 南京农业大学, 2019(08)
- [9]超表达CdNF-YC和CdSAMDC提高海滨雀稗抗逆性研究[D]. 吴雪莉. 南京农业大学, 2017(05)
- [10]匍匐翦股颖对盐胁迫的响应和AsNHX2基因功能研究[D]. 肖国增. 北京林业大学, 2016(04)